EC BULJONS: PAMATS, SAGATAVOŠANA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

EK buljons vai buljons Escherichia coli ir selektīvs šķidrums barotne. Šo barotni iesaka standarta metodes kopējo un fekālo koliformu saskaitīšanai, izmantojot visiespējamāko skaitļa paņēmienu (MPN) ūdens un pārtikas paraugos, kur galvenais iesaistītais līdzeklis ir Escherichia coli.

EK buljonu veido tripteīns, laktoze, žults sāļi, dikālija fosfāts, monokālija fosfāts, nātrija hlorīds un ūdens. Tās formula ir stratēģiski izstrādāta, lai veicinātu kopējo un fekālo koliformu augšanu un novērstu citu mikroorganismu attīstību.

EK buljona sagatavošanas attēla attēlojums. Avots: Pixabay.com

Escherichia coli baktērija ir galvenā fekāliju koliforma, kas atrodas kā piesārņotājs ūdenī un pārtikas avotos, un ir svarīgu kuņģa-zarnu trakta traucējumu cēlonis.

Jāatzīmē, ka ir daudz Escherchia coli serotipu; Starp tiem mēs varam minēt enterohemorāģisko (EHEC), enteroinvasīvo (EIEC), entopatogēno (EPEC), enterotoksigenisko (ETEC) un enteroagregatīvo (EAEC).

Šim videi ir spēja atļaut visu to attīstību, bet nespējot tos atšķirt viens no otra. Tam nepieciešama papildu pārbaude.

Ūdens un pārtikas mikrobioloģiskais pētījums pēc visiespējamākā skaita (MPN), lai meklētu kopējo un fekāliju koliformas, ir protokols, kas sastāv no vairākām fāzēm; paredzamā fāze, apstiprinošā fāze un pabeigšanas fāze. EK buljonu izmanto apstiprināšanas posmā.

Pamats

EK buljons

EK barotne ir balstīta uz barības elementu nodrošināšanu, kas nepieciešami kopējo un fekāliju koliformu optimālai attīstībai, kurā iekļautas Escherichia coli baktērijas.

Šos uztura elementus nodrošina tripteins, kas ir lielisks peptīdu un aminoskābju avots. Turklāt tas satur arī laktozi, fermentējamu ogļhidrātu, kas nodrošina enerģiju un ļauj parādīt, vai baktērijas ražo gāzi.

No otras puses, barotnē ir žults sāļi, kas nodrošina selektīvo raksturu, jo tas kavē grampozitīvu mikroorganismu, kas var būt paraugā, augšanu.

Tāpat kālija līdzsvara sistēmu darbojas arī kālija fosfāts un monokālija fosfāts. Šī sistēma ir nepieciešama, jo buljonā esošajai laktozei ir tendence paskābināt barotni, kad to raudzē mikroorganismi, bet to kompensē fosfātu sāļi.

Tādēļ šie elementi ir nepieciešami, jo nekontrolēta skābums var ietekmēt meklēto mikroorganismu pareizu attīstību.

Savukārt nātrija hlorīds osmozi stabilizē barotni, bet ūdens ir šķīdinātājs esošajām izšķīdušajām vielām un nodrošina šķidruma konsistenci barotnē.

Novobiocin modificēts EK buljons

Okrend un Rose izveidoja dažādus EK buljonus, kurus sauca par novobiocīna modificētu EK buljonu. Pārveidošana sastāvēja no žults sāļu koncentrācijas samazināšanas un 20 mg / dl novobiocīna pievienošanas.

Šī modifikācija veicina enterohemorāģisko Escherichia coli celmu (O157: H7) atjaunošanos.

Šis baktēriju serotips izraisa smagu hemorāģisko kolītu, kas var izraisīt hemolītiski urēmisko sindromu (HUS); kas savukārt var izraisīt akūtu nieru mazspēju ar augstu mirstības līmeni, kas veciem cilvēkiem var sasniegt līdz 50%.

Saslimstības un mirstības dēļ, ko katru gadu šī baktērija rada piesārņotas pārtikas patēriņa dēļ, Amerikas Savienoto Valstu Lauksaimniecības departaments (USDA) ļoti iesaka izmantot šo barotni.

Sagatavošana

EK buljons

Nosver 37,4 g dehidrētas barotnes un izšķīdina 1 litrā destilēta ūdens. Maisījumam jāļauj nostāvēties 5 minūtes. Pēc tam siltuma avotā tas tiek pabeigts izšķīdināt, bieži maisot.

Pēc izšķīdināšanas tas tiek sadalīts iepriekš kondicionētās mēģenēs ar Durhama mēģeni iekšpusē. Sterilizējiet autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Barotnes pH jābūt 6,9 ± 0,2. Dehidrētās barotnes krāsa ir bēša, un sagatavotā barotne ir gaiši dzintara.

Buljonus līdz lietošanai tur ledusskapī. Lietošanas laikā buljoniem jābūt istabas temperatūrā.

No otras puses, EK buljonu var pagatavot arī divkāršā koncentrācijā.

Novobiocin modificēts EK buljons

Nosver 36,7 g dehidrētas barotnes un izšķīdina 1 litrā ūdens. Pārējais preparāta sastāvs ir tāds pats kā aprakstīts iepriekš.

Izmantojiet

Kopējās un fekāliju koliformas analīze

EK buljons ir ideāli piemērots koliformu izpētes apstiprinošajai fāzei ar NMP metodi gan ūdens paraugos, gan farmaceitiskos izstrādājumos un pārtikā.

Duļķaini, gāzi ražojoši laktozes buljoni, kas iegūti iespējamajā fāzē, jāiesēj atkārtoti 2% spilgti zaļā žults buljonos un EK buljonā.

Kopējām kolibakterijām EK buljonus inkubē aerobā veidā no 24 līdz 48 stundām 37 ° C temperatūrā, un fekāliju koliformām tos inkubē aerobi 24 līdz 48 stundas 44 ° C temperatūrā.

Abos gadījumos to interpretē šādi: duļķainas caurules ar gāzes ražošanu uzskata par pozitīvām. Ja 24 stundās netiek ražota gāze, inkubāciju turpina līdz 48 stundām.

EK pozitīvie buljoni nonāk pilnā apstiprināšanas fāzē, kas sastāv no atkārtotas izsēšanas uz selektīvām barotnēm, piemēram, Mac Conkey agars, EMB agars vai Endo agars.

Ja izmantotajā buljonā ir novobiocīna modificēts EK, pozitīvās mēģenes ieteicams atkārtoti iesēt Mac Conkey agarā ar sorbītu.

QA

Katrai sagatavotā barotnes partijai jābūt kvalitātes kontrolei. Pirmkārt, jānovērtē barotnes sterilitāte. Šajā nozīmē vienu vai divus buljonus inkubē bez inokulācijas aerobiozē 24 stundas 37 ° C temperatūrā. Gaidāmais rezultāts ir caurspīdīgs buljons bez duļķainības vai krāsas maiņas.

Otrkārt, jānovērtē zināmo celmu augšana, tāpēc var izmantot šādas baktērijas: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Visos gadījumos ir sagaidāma apmierinoša mikrobu attīstība, novērojot duļķainu buljonu ar gāzes ražošanu E. coli un bez gāzes Salmonella.

Citi celmi, kurus var iekļaut kontrolē, ir: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Šie celmi ir pilnībā jānovērš.

ieteikumi

-Darhemas cauruļu izvietojums ir būtisks, lai izpētītu koliformas.

-Padaliet barotni mēģenēs pirms sterilizācijas, nekad pēc tās.

Nelietot, ja barotne ir vecāka par 3 mēnešiem.

- Nelietot, ja tiek novērotas izmaiņas barotnes parastajās īpašībās.

Atsauces

1. Britannia laboratorijas. EK vide. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
2. Enterohemorāģiska E. coli. Pārtikas drošības un sabiedrības veselības centrs. 2010.Pieejams vietnē: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. EK barotne. Pieejams vietnē: foodsafety.neogen.com
4. Neogēns. Novobiocīna modificētā EK barotne. Pieejams vietnē: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Escherichia coli, kas ražo Shiga toksīnu no svaigas maltas gaļas no svaigas maltas gaļas Koncepcionas provincē, identificē un izolē Šiga toksīnu. no Tucumán. Mikrobiols Rev Arg; 2010, 42 (4): 284–287. Pieejams: www.scielo.org.