MALONĀTA BULJONS: PAMATS, SAGATAVOŠANA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Malonate buljons ir šķidrums barotne lieto diagnostikas testu (malonāta), ko izmanto, lai atšķirtu kādu ģintis ģimenes Enterobacteriaceae. To izveidoja Leifsons 1933. gadā, un vēlāk to modificēja Ewings, kurš sākotnējai formulai pievienoja nelielu daudzumu dekstrozes un rauga ekstrakta.

Barotni pašlaik veido rauga ekstrakts, amonija sulfāts, divkālija fosfāts, monokālija fosfāts, nātrija hlorīds, nātrija malonāts, dekstroze un bromtimola zils. Šis tests parasti ir iekļauts Enterobacteriaceae bioķīmiskajā identifikācijas akumulatorā, palīdzot atšķirt noteiktas ģintis un sugas.

Malonāta testa grafiskais attēlojums. A. Negatīvs tests, B. (Paskābināšanās) Negatīvs tests, C. (vidēja sārmināšana) Pozitīvs tests. Avots: krāsu caurulītes publicdomainpictures.net

Malonāta tests galvenokārt ir balstīts uz dažu mikroorganismu spēju izmantot nātrija malonātu kā vienīgo oglekļa avotu un amonija sulfātu kā slāpekļa avotu.

Malonāta tests parasti ir pozitīvs dažām Enterobacter, Klebsiella un Citrobacter ģints sugām. Tā kā lielākajai daļai Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus un Providencia ģinšu sugas ir negatīva reakcija.

Pamats

Malonāta tests sastāv no to baktēriju parādīšanas, kuras spēj izmantot nātrija malonātu kā vienīgo oglekļa avotu un amonija sulfātu kā slāpekļa avotu.

Lielākā daļa Enterobacteriaceae, kas neizmanto malonātu, spēj augt šajā barotnē, par barības vielām ņemot dekstrozi un rauga ekstraktu.

Šajā gadījumā jebkurš mēģinājums sārmināties, izmantojot peptonus, tiks neitralizēts, ražojot skābes, kas radušās, fermentējot dekstrozi. Tāpat kā buferšķīdumu darbojas kālija un monokālija fosfāti, uzturot pH līmeni 6,7.

Tieši tāpēc, ja testa rezultāts ir negatīvs, buljons paliek tādā pašā oriģinālajā krāsā (zaļā krāsā). Retos gadījumos barotne var kļūt skāba dekstrozes fermentācijas dēļ; neizmantojot peptonus un pH indikatoru, barotnes krāsa kļūs dzeltena. Lai tas notiktu, pH vajadzētu pazemināties līdz 6.

Tomēr, kad šis tests ir pozitīvs, tiek teikts, ka mikroorganisms izmantoja malonātu un amonija sulfātu attiecīgi kā oglekļa un slāpekļa avotus, neizmantojot pārējos komponentus.

Šajā gadījumā barotne kļūst sārmaina nātrija izdalīšanās un no tā izrietošās NaOH veidošanās dēļ. Šajā ziņā pH indikators (bromtiimola zils) barotnes krāsu pārvērš no zaļas uz zilu, ja pH ir vienāds vai lielāks par 7,6. Zils var būt gaišs vai intensīvs (Prūsijas zils).

Visbeidzot, nātrija hlorīds uztur barotnes osmolaritāti, un ūdens ir visu sastāvdaļu atšķaidītājs.

Interpretācija

Tās pašas krāsas buljons (zaļš) - negatīvs tests

Dzeltenais buljons: negatīvs tests

Gaišs vai dziļi zils buljons: testa rezultāts ir pozitīvs

Pastāv variants, ko sauc par fenilalanīna malonāta buljonu, ko sauc arī par Shaw un Clarke barotni. Šajā gadījumā var analizēt divus testus: malonāta kā oglekļa avota izmantošanu un piruānskābes iegūšanu no fenilalanīna.

Sagatavošana

Malonāta buljons

Nosver izvēlētā komercsabiedrības ieliktnī norādīto gramu skaitu (tas var mainīties atkarībā no tā). Nosvērtie grami tiek suspendēti vienā litrā destilēta ūdens. Nedaudz sildiet, līdz tā ir pilnībā izšķīdusi. Sadaliet 3 ml barotnes 13/100 mēģenēs ar kokvilnas vāciņiem.

Sterilizējiet autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 līdz 20 minūtes.

Pirms lietošanas atdzesē. Ja tie nav paredzēti tūlītējai lietošanai, līdz lietošanai uzglabāt ledusskapī. Pirms inokulēšanas buljonus sasilda līdz istabas temperatūrai.

Barotnes pH jābūt 6,7 ± 0,2. Sagatavotās barotnes krāsa ir pudeles zaļa.

Fenilalanīna malonāta buljons

Nosver 11 g dehidrētas barotnes un izšķīdina 1 litrā destilēta ūdens. Pārējais preparāta sastāvs ir tāds pats kā iepriekš aprakstīts.

To var arī pagatavot, pirms malonizācijas buljona barotnes pievienojot 2 g / L fenilalanīna, pirms tā tiek sterilizēta.

Izmantojiet

To izmanto kā daļu no bioķīmiskajiem testiem, kas ir samontēti Enterobacteriaceae dzimtas baktēriju identificēšanai.

Palīdz atšķirt:

- Escherichia un Serratia ģints Klebsiella un Enterobacter (+) ģints (-).

-Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame un Salmonella enterica ssp diarizonae (+) sugas Salmonella enterica ssp enterica (-).

-No Klebsiella ģints parasti (+) no Actinobacillus ģints (-).

-Ražīgi tas var palīdzēt diferencēt baktēriju ģintis un sugas, kas nepieder pie Enterobacteriaceae dzimtas, piemēram, starp nefermentējošām gramnegatīvām Alcaligenes faecalis (+) un Acinetobacter sp (-) baktērijām.

Avots: Koneman E, Allens S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.

Process

Zem šķiltavas tiek ņemta daļa tīra odekolona, ​​izmantojot pareizi sterilizētu un atdzesētu rokturi no platīna. Paņemto paraugu (gaišo inokulātu) izšķīdina malonāta buljonā. Inkubē ar brīvu vāku aerobiozē 35 ° C ± 0,2 temperatūrā 24 līdz 48 stundas.

Malonāta buljonu var arī inokulēt no 18–24 stundu kultūras trypticase sojas buljonā. Šajā gadījumā ar sterilu pipeti ņem 0,01 ml un inokulē malonāta buljonu. Inkubē ar brīvu vāku aerobiozē 35 ° C ± 0,2 temperatūrā 24 līdz 48 stundas.

Laika beigās rezultāti tiek interpretēti. Visas zilās krāsas pēdas pēc 48 stundu inkubācijas jāuzskata par pozitīvām. Testu nevajadzētu interpretēt kā negatīvu, kamēr nav pagājis 48 stundu inkubācijas laiks.

Ja izmanto fenilalanīna malonāta buljona variantu, vispirms interpretē malonātu un pēc tam pievieno 5 pilienus 1N HCl un 3-5 pilienus 8% dzelzs hlorīda. Tumši zaļa krāsa tiek interpretēta kā pozitīvs fenilalanīna tests. Ja, no otras puses, barotne kļūst gaiši zila, fenilalanīna tests ir negatīvs.

QA

Lai veiktu barotnes sterilitātes kontroli, vienu vai divus buljonus inkubē 24 stundas 35 ° C ± 0,2 temperatūrā. Pēc šī laika nevajadzētu būt mākoņainībai vai krāsai.

Kvalitātes kontrolei var izmantot zināmus vai sertificētus celmus, piemēram: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 un Escherichia coli ATCC 25922.

Gaidāmie rezultāti ir:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae un Salmonella enterica ssp arizonae dod pozitīvu reakciju (vidēji zilā krāsā).
• Escherichia coli rezultātam jābūt negatīvam, tas ir, sagaidāms, ka nemainīsies krāsa (zaļa) vai ka tas kļūs dzeltens glikozes fermentācijas dēļ.

Ierobežojumi

Nelietojiet buljonu, kurā ir duļķainība, nogulsnes, krāsas maiņa vai jebkādas bojājuma pazīmes.

Atsauces

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Salmonella spp. Mikrobioloģiskā izolācija. un molekulārie instrumenti tā noteikšanai. Uninorte veselība. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73-94. Pieejams vietnē: scielo.org.co
2. BBL. Malonāta buljons, Ewings modificēts. 2007. Pieejams: bd.com
3. Senna laboratorijas. Malonato buljons. Pieejams vietnē: c Scientificasenna.com
4. RenyLab. Malonato buljons. 2013.Pieejams vietnē: es.renylab.ind.br
5. Mbiolog diagnostika. Malonato buljons. Pieejams vietnē: mbiolog.com
6. Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
7. Conda Pronadisa laboratorijas. Fenilalanīna malonāta buljons. Pieejams vietnē: condalab.com