PEPTONA ŪDENS: PAMATOJUMS, SAGATAVOŠANA UN IZMANTOŠANA - BIOLOĢIJA - 2025

Peptona ūdens ir šķidrums bagātināšanas medijs, neselektīviem galvenokārt izmanto kā atšķaidītāju pārtikas paraugiem vai citiem materiāliem. Šis līdzeklis no ķīmiskā viedokļa ir ļoti vienkāršs, tas satur gaļas peptonu, nātrija hlorīdu un ūdeni.

Tam ir noteikta uzturvērtība, kas ļauj bagātināt paraugu. Ja ir ļaunprātīgi izmantotas baktērijas, šī barotne var atjaunot dzīvotspēju. Tas ir īpaši noderīgi baktēriju, kas pieder Enterobacteriaceae ģimenei, atjaunošanā.

Peptona ūdens pudelēs. Avots: MSc. Marielsa gil

Salmonellu reģenerācijas gadījumā ieteicams izmantot buferētā peptona ūdens variantu; Tas kalpo kā parauga iepriekšēja bagātināšanas vide, šajā gadījumā tajā ir citi elementi, piemēram, dinātrija fosfāts un divkālija fosfāts.

Parasti peptona ūdeni sagatavo ar neitrālu pH, tomēr ir arī citi varianti, kad pH ir jābūt 8,5 ± 0,2 (sārmains), jo izdalāmās baktērijas ir alkalifiliskas, piemēram, Vibrio holēras.

Turklāt šo barotni var izmantot par bāzes barotni ogļhidrātu fermentācijas testiem.

Pamats

Peptoni nodrošina barības vielas, kas vajadzīgas baktēriju augšanai, īpaši slāpekļa un īsās ķēdes aminoskābes, bet nātrija hlorīds uztur osmotisko līdzsvaru.

Turklāt barotne ļauj izkliedēt, homogenizēt un atjaunot baktēriju šūnas, kuras ir sabojātas rūpnieciskos procesos.

Kā atšķaidītājs tas ir ideāls, efektīvi aizstājot fizioloģisko šķīdumu (SSF) vai fosfāta buferšķīdumu (PBS).

Baktēriju augšana ir acīmredzama, novērojot tās duļķainību.

Sagatavošana

Pagatavošana mājās (nav komerciāla)

Nosver 1 g peptona un 8,5 g nātrija hlorīda, izšķīdina 1 litrā destilēta ūdens. PH jākoriģē līdz 7,0. Šim nolūkam var izmantot 1N nātrija hlorīdu.

Pagatavošana, izmantojot komerciālu barotni

Nosver 15 g dehidrētas barotnes un izšķīdina litrā destilēta ūdens. Homogenizē maisījumu. Ja nepieciešams, maisījumu vāra 1 minūti, lai veicinātu pilnīgu izšķīšanu. Pēc vajadzības pasniedz 100 ml pudelēs vai 10 ml mēģenēs. Autoklāva 15 minūtes 121 ° C temperatūrā.

Atdzesē un lieto vai uzglabā ledusskapī. Barotnes galīgais pH ir 7,2 ± 0,2.

Dehidrētās barotnes krāsa ir gaiši bēša, un sagatavotā barotne ir gaiši dzintara.

Sagatavošana fermentācijas testiem

Iepriekšējam preparātam - pirms sterilizācijas - ogļhidrāti jāpievieno 1% gala koncentrācijā, pieskaitot Andrade indikatoru (skābā fuksīna) vai fenola sarkano (0,018 g / L). Caurulēm jābūt aprīkotām ar Durhamas zvanu, lai novērotu gāzes veidošanos.

Citi peptona ūdens varianti

Buferēts vai buferēts peptona ūdens

Tas satur kazeīna, nātrija hlorīda, dihidrogēnija kālija fosfāta un nātrija hidrogēnfosfāta dodekahidrāta fermentatīvu hidrolizātu. Galīgais pH ir 7,0 ± 0,2.

Sagatavošanai nosver 20 g dehidrētas barotnes un izšķīdina 1 litrā destilēta ūdens. Ļaujiet tai atpūsties apmēram 5 minūtes. Karsē 1 minūti, līdz tas pilnībā izšķīst.

Pēc vajadzības ielejiet piemērotos burkās. Sterilizējiet, izmantojot autoklāvu 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

-Alkalīna peptona ūdens

Nosver 25 g dehidrētas barotnes un izšķīdina 1 litrā ūdens. Rīkojieties, kā aprakstīts iepriekš. PH ir no 8,3 līdz 8,7.

Izmantojiet

Sējmateriālu veic, tieši ievietojot paraugu.

To izmanto paraugu atšķaidīšanai, īpaši, ja ir aizdomas, ka varētu būt bojātas baktērijas. Parasti atšķaidījumi ir 1:10 un 1: 100.

Inkubē 24 stundas aerobiozē 35-37 ° C temperatūrā.

Izkārnījumu paraugi

Salmonella izkārnījumu paraugiem kā iepriekš bagātināšanas līdzekli ieteicams izmantot buferētu vai buferētu ūdeni.

Lai to izdarītu, rīkojieties šādi:

Ja veidojas izkārnījumi, ņem 1 g parauga. Ja tie ir šķidri, ņem 1 ml fekāliju un suspendē mēģenē ar 10 ml buferēta peptona ūdens. Taisnās zarnas tamponu gadījumā ar tam buferētu peptona ūdeni izvada mēģenē esošo materiālu mēģenē.

Visos gadījumos paraugu ļoti labi samaisa un homogenizē.

Inkubē 18 ​​līdz 24 stundas 37 ° C temperatūrā. Pēc tam subkultūru bagātināšanas buljonā, piemēram, selenīta cistīna buljonā vai tetrationāta buljonā, 37 ° C temperatūrā vēl 18–24 stundas. Visbeidzot, kultivē selektīvās Salmonella barotnēs, piemēram, SS agarā, XLD agarā, Hektoena agarā, cita starpā.

Pārtikas paraugi

Peptona ūdeni izmanto kā bagātināšanas barotni vai kā vienkāršu atšķaidītāju, bet, ja tiek meklētas Salmonella sugas, to izmanto kā iepriekšēju bagātināšanas barotni, kā jau aprakstīts.

Pārtikā rīkojieties šādi:

Cietiem pārtikas produktiem sver 25 g parauga, bet šķidram - 25 ml parauga. Minēto porciju ievieto kolbās, kurās ir 225 ml peptona ūdens. Sajauc un homogenizē paraugu.

Ja tiek uzskatīts, ka mikrobu slodze ir liela, koloniju veidojošo vienību (CFU) uzskaites atvieglošanai var veikt atšķaidījumus ar sēriju vai decimāldaļām.

Atšķaidījumu skaits būs atkarīgs no parauga veida un analītiķa pieredzes.

Ja gluži pretēji, rodas aizdomas, ka mikrobu slodze ir ļoti maza, atšķaidīšana nav jāveic. Pēc tam subkultūra selektīvos medijos.

Jūras pārtikai, piemēram, gliemenēm, zivīm, cita starpā, meklējot Vibrio cholerae vai citas Vibrio sugas, jālieto peptona ūdens, kas noregulēts līdz pH 8,5 (sārmains peptona ūdens).

QA

No katras sagatavotās partijas vienu līdz divas mēģenes 24 stundas jāinkubē bez inokulācijas aerobiozē 37 ° C temperatūrā. Laika beigās nevajadzētu novērot duļķainību vai krāsas izmaiņas.

To efektivitātes novērtēšanai var izmantot arī zināmos kontroles celmus:

Šim nolūkam var izmantot šādus baktēriju celmus: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Visos gadījumos ir sagaidāma apmierinoša mikrobu attīstība, ko novēro barotnes duļķainība.

Ierobežojumi

- Dehidrētā barotne ir ļoti higroskopiska, tāpēc tā jātur tālāk no mitruma.

- Barotni nedrīkst lietot, ja tiek novērota jebkāda veida pasliktināšanās.

- Dehidrētā barotne jāuzglabā temperatūrā no 10 līdz 35 ° C

-Sagatavotā barotne jāuzglabā atdzesēta (2–8 ° C).

Atsauces

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B un Velázquez O. Pārtikas produktu mikrobioloģiskās analīzes paņēmieni. 2009, 2. ed. UNAM Ķīmijas fakultāte. Meksika. ANAM Ķīmijas fakultātes rokasgrāmatu un dokumentu administratora (AMyD) versija. Pieejams vietnē: http://depa.fquim.unam.mx
2. Britannia laboratorijas. Buferēts peptona ūdens. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
3. Neogēnu laboratorijas. Peptona ūdens. Pieejams vietnē: foodsafety.neogen.com
4. Britannia laboratorijas. Peptona ūdens. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
5. Merck laboratorijas. Buferēts peptona ūdens. Pieejams vietnē merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa laboratorijas. Sārmains peptona ūdens. Pieejams vietnē: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.