TRYPTICASEIN SOY AGAR: PAMATOJUMS, SAGATAVOŠANA UN LIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Sojas agars triptona vai triptāzes sojas agarā audzēt ir cieta barotne un uztura neselektīvie. Ar burtu TSA tas apzīmē akronīmu angļu valodā Trypticase Soy Agar. Tas sastāv no tripteina, sojas peptona, nātrija hlorīda un agara agara.

Sakarā ar augsto uzturvērtību, tas ir ideāli piemērots vidēji prasīgu un nepieprasītu mikroorganismu kultivēšanai. Barotne bez papildu piedevām nav ieteicama primārajām kultūrām, taču tā ir ļoti noderīga tīru celmu subkultūrai un uzturēšanai dzīvotspējīgiem, cita starpā.

Trypticasein sojas agara ķīļi mēģenēs ar bakelīta vāciņiem. Avots: fotogrāfijas autore pieņēmusi maģistrantūru. Marielsa Gil.

Šis agars kalpo arī par bāzi bagātinātu barotņu, piemēram, asiņu agara, sagatavošanai, it īpaši, ja ir nepieciešams novērot hemolīzes modeļus un uzstādīt optokvīna un bacitracīna taksonus, kas nepieciešami attiecīgi Streptococcus pneumoniae un Streptococcus pyogenes diagnozei.

No otras puses, kombinējot ar antibiotikām, tas ir noderīgi, lai no paraugiem ar jauktu floru izolētu klīniski svarīgus fakultatīvos un stingros anaerobos mikroorganismus.

Visbeidzot, trippticasein sojas agara sastāvs un tā darbība atbilst dažādu farmakopeju (Eiropas, Japānas un Ziemeļamerikas) noteiktajām prasībām.

Pamats

Lai pareizi attīstītu baktērijas, ir nepieciešama enerģijas piegāde, piemēram, aminoskābes, vitamīni, šķīstošās un pirimidiskās bāzes.

Šajā ziņā tripteins un sojas peptons nodrošina šīs barības vielas mikroorganismiem, tādējādi ļaujot pilnvērtīgi attīstīties. Tomēr gardām baktērijām ir nepieciešams šo agaru papildināt ar defibrinētām asinīm vai uzsildītām asinīm, lai palielinātu tā bagātināšanos.

No otras puses, ja barotnei pievieno antibiotikas, tā kļūst par selektīvu barotni. Var pievienot arī 0,6% rauga ekstraktu, lai veicinātu Listeria ģints sugu izolēšanu, savukārt cistīna tellurīta un jēra asiņu pievienošana ir ideāli piemērota Corynebacterium diphteriae.

Visbeidzot, nātrija hlorīds nodrošina barotnes osmotisko līdzsvaru, bet agars nodrošina cietu konsistenci.

Sagatavošana

Trypticasein sojas agara plāksnes

Lai pagatavotu trippticasein sojas agaru, digitāli jāsver 40 g dehidrētas komerciālās barotnes. To izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens kolbā.

Maisījumu atstāj atpūsties 5 minūtes un pēc tam to novieto siltuma avotā, lai palīdzētu izšķīdināt barotni. To vajadzētu bieži maisīt un vārīt 1 līdz 2 minūtes. Pēc tam barotni 15 minūtes sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā.

Ļauj atdzist līdz 50 ° C un sadala sterilos Petri traukos. Ļauj sacietēt, apgriež otrādi, pasūta plāksnēs un uzglabā ledusskapī.

Barotnes galīgajam pH jābūt 7,3 ± 0,2.

Jāatzīmē, ka dehidrētā barotne ir gaiši smilškrāsas un to jāuzglabā temperatūrā no 10 līdz 35 ° C sausā vietā.

Sagatavotajam agaram savukārt ir gaiša dzintara krāsa. Pagatavotās plāksnes līdz lietošanai jāuzglabā ledusskapī (2–8 ° C).

Pirms lietošanas plāksnēm jāsasniedz istabas temperatūra.

Trypticasein sojas agara plāksnes, kas papildinātas ar asinīm

Asins agaru sagatavo, pievienojot 5% defibrinētu asiņu, trippticasein sojas agaru atdzesējot līdz 50 ° C. Maisījumu homogenizē, pagriežot ar maigām kustībām.

Pasniedziet sterilos Petri traukos. Vidējai krāsai jābūt ķiršu sarkanai.

Trypticasein sojas agara plāksnes, kas papildinātas ar uzsildītām asinīm

Lai pagatavotu uz TSA bāzes asiņu agaru, rīkojieties tāpat, kā jau aprakstītas procedūras, bet, izejot no autoklāva, ļaujiet tam atpūsties, līdz barotnes temperatūra ir aptuveni 56 līdz 70 ° C. Šajā laikā asinis ievieto un samaisa, līdz barotne kļūst brūna.

Pasniedziet sterilos Petri traukos. Barotnes krāsa ir šokolādes brūna.

Trypticasein sojas agara ķīļi

Agara sagatavošanas procedūra ir tāda pati kā aprakstīta plāksnēm, ar atšķirību tajā, ka barotni nevis pasniegt Petri traukos, bet pirms sterilizācijas to izdala starp 10 līdz 12 ml mēģenēs ar Bakelite vāku.

Pēc tam mēģenes 15 minūtes autoklāvā 121 ° C temperatūrā. Kad viņi dodas prom, viņi ar atbalsta palīdzību tiek slīpi un ļauj sacietēt.

Sagatavotos ķīļus sēj pēc virsmas laukuma un kalpo tam, lai noteiktu mikroorganismu, kas nav prasīgi, noteiktā laikā saglabātu dzīvotspēju.

Lietojumprogrammas

Tryptiaseīna sojas agaru lieto šādos gadījumos:

- Kā pamats klasiskā asins agara pagatavošanai, ko parasti izmanto lielākajā daļā laboratoriju.

- Prasīgo baktēriju izolēšana.

-Hemolīzes modeļa novērošana.

-Diagnostikas testu veikšana.

- Kā bāze, lai sagatavotu īpašu asiņu agaru Corynebacterium diphteriae ar cistīna tellurītu un jēra asinīm.

- Kā pamats jēra asiņu agara, kā arī kanamicīna-vankomicīna, sagatavošanai anaerobu, īpaši Bacteroides sp.

- nepieprasītu celmu (Bacterioteca) uzturēšanai.

- Aerobo mikrobu skaits, pētot ūdens, vides, pārtikas un kosmētikas paraugu mikrobu robežas.

Sēj

Paraugus var sēt tieši uz Trypticasein Soy Agar virsmas, kas papildināta ar asinīm vai citām piedevām. To sēj izsmelšana.

Tā kā mikrobiālo celmu (baktēriju vai rauga) subkultūrai parasti izmanto trippticasein sojas agara plāksnes bez piedevām.

QA

Sterilitātes kontrole

Lai pārbaudītu dažādu barotņu, kas sagatavotas ar trippticasein sojas bāzes agaru, sterilitāti, ieteicams veikt šādus pasākumus: no katras sagatavotās partijas 1 vai 2 neinokulētās plates vai mēģenes 24 stundas jāinkubē 37 ° C temperatūrā, lai pierādītu to sterilitāti. Visos gadījumos tai jāpaliek bez izaugsmes.

Ja tiek konstatēts piesārņojums, visa partija jāiznīcina.

Izaugsmes kontrole

Trypticasein sojas agara pareizas darbības izpētei var izmantot šādus baktēriju celmus: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 un Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Celmus sēj un aerobi inkubē 37 ° C temperatūrā 24 stundas.

Visos gadījumos izaugsmei jābūt apmierinošai.

Var izmantot arī tādas sēnītes kā Candida albicans Complex ATCC 10231 un Aspergillus niger ATCC 16404. Labs augšana gaidāma abiem celmiem.

Ar asinīm papildināta trippticasein sojas agara augšanas kontrole un hemolīzes shēma

Lai pārbaudītu asins agara, kas sagatavots ar šo bāzi, pareizu darbību, var izmantot šādus celmus: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 un Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Tos sēj un inkubē 37 ° C temperatūrā mikroaerofilitātē 24 stundas.

Visos gadījumos augšanai jābūt apmierinošai, ņemot vērā, ka S. pyogenes jānovēro beta-hemolīze (gaiši halogoni ap koloniju), un abos S. pneumoniae celmos jānovēro alfa hemolīze (zaļgani halo ap koloniju). kolonijas).

Atsauces

1. Wikipedia līdzautori. Trypticase esmu agars. Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2018. gada 17. decembris, 15:47 UTC. Pieejams vietnē: https://en.wikipedia.org
2. Britannia laboratorijas. Tripteina sojas agars. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
3. Neogēnu laboratorijas. Tryptisks sojas agars. Pieejams vietnē: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Argentīna. Redakcija Panamericana SA
5. BD laboratorijas. Trypticase esmu agars. 2014.Pieejams vietnē: .bd.com