Bismuta sulfīts agars ir ciets vidēja selektīvs un diferenciāļa kultūra, īpaši izstrādāti lai izolētu Salmonella enterica pasuga enterica serotipa Typhi, starp citu sugu Salmonella. Barotne ir pazīstama kā BSA agars ar savu akronīmu angļu valodā Bismuth Sulfite Agar.
Bismuta sulfīta agara sākotnējo formulu 1927. gadā izveidoja Vilsons un Blērs (vidējā glikozes bismuta sulfīta dzelzs vide); tas saturēja nātrija sulfītu, glikozi, bismuta šķīdumu, amonija citrātu, dzelzs sulfātu un agara agaru.
Salmonella sp inkubācijas 48 stundu pieaugums uz bismuta sulfīta agara. Avots: Pixnio.com Autors: Dr. WR Erving, USCDCP
Mūsdienās ir modificēta sākotnējā barotne, kas sastāv no gaļas ekstrakta, gaļas un kazeīna peptoniem, bismuta sulfīta indikatora, glikozes, nātrija fosfāta, melnā sulfāta, spilgti zaļas un agara agara.
Salmonella sugu izolēšanai ir daudz līdzekļu, bet, kad ir nepieciešams atgūt Typhi serotipu, bismuta sulfīta agaram ir ievērojama priekšrocība salīdzinājumā ar tiem, jo lielākajā daļā gadījumu šī mikroorganisma reģenerācija ir ļoti maza vai nav vispār. .
Mēģinot izdalīt enteropatogēnus, ir jāizmanto vairāk nekā viena veida barotnes, jo bismuta sulfīta agars ir mazāk efektīvs citām Salmonella sugām un Shigella ģintīm, kuras ir nomāktas vai attīstās ļoti slikti. šajā agarā.
Jāatzīmē, ka no visām Salmonella sugām Typhi serotips ir viens no vissvarīgākajiem enteropatogēniem cilvēkiem, jo tas ir vienīgais rezervuārs. Šis serovars izraisa vēdertīfu, gastroenterītu, bakteriēmiju un septicēmiju.
Šī iemesla dēļ ir svarīgi iekļaut šo agaru, analizējot ūdeni, fekālijas vai pārtikas paraugus, ja ir aizdomas par tā klātbūtni.
Pamats
Tāpat kā lielākajā daļā barotnes, bismuta sulfīta agars satur barības vielas, piemēram, peptonus un gaļas ekstraktu baktēriju augšanas veicināšanai. Tāpat glikoze darbojas kā enerģijas un oglekļa avots.
Tomēr ne visas baktērijas augs šajā barotnē, jo bismuta sulfīta agars ir selektīva barotne. Tas satur savienojumus, kas kavē grampozitīvu mikroorganismu un noteiktu gramnegatīvu baktēriju augšanu. Šie savienojumi ir: indikators bismuta sulfīts un spilgti zaļš.
Savukārt dinātrija fosfāts uztur barotnes osmolaritāti un pH.
Bismuta sulfīta agars ir diferencēta vide, pateicoties dzelzs sulfāta klātbūtnei, kas parāda H 2 S. veidošanos. Baktēriju veidotais H 2 S reaģē ar melnā sulfāta palīdzību un veido skaidri redzamas nešķīstošas melnas nogulsnes.
Visbeidzot, agara agars barotnei nodrošina cietu konsistenci.
Sagatavošana
Nosver 52,3 g dehidrētas barotnes un izšķīdina vienā litrā ūdens. Maisījumu karsē līdz vārīšanās temperatūrai 1 minūti, bieži maisot, līdz tas ir pilnībā izšķīdis. Nepārsildiet pārāk daudz. Šī barotne nav autoklavējama, jo ārkārtējs karstums kaitē barotnei.
Ļauj atdzist līdz 45 ° C un pirms pasniegšanas sakrata sterilos Petri traukos. Ieteicams izgatavot plāksnes ar labu biezumu. Lai to izdarītu, katrā plāksnē jāielej 25 ml. Ļaujiet sacietēt. Tā kā tā ir nesterilizēta vide, ir ieteicama tūlītēja tās lietošana.
Tomēr D'aoust 1977. gadā veiktais pētījums parādīja, ka Salmonella typhimurium un Salmonella enteritidis ir labāka vidēja vecuma bismuta sulfīta agara atveseļošanās, neietekmējot serovāru Typhi un Paratyphi B veiktspēju.
D'aoust iesaka plāksnes lietot atdzesēšanas ceturtajā dienā, lai gan tas brīdina, ka vidējam vecumam samazinoties selektivitātei un Proteus vulgaris celmiem attīstoties vieglāk.
Šī iemesla dēļ ļoti piesārņotiem paraugiem, piemēram, fekālijām, ieteicams izmantot svaigi pagatavotu barotni. Pretējā gadījumā lietojiet tā sagatavošanas 4. dienā. Citi autori iesaka plāksnes lietot nākamajā dienā pēc to sagatavošanas, kas tiek uzglabātas ledusskapī.
Pirms lietošanas atdzesētās plātnes ir jāatlaidina. Barotnes pH jābūt 7,5 ± 0,2. Neapstrādāta barotne ir bēša, un sagatavotā barotne ir zaļgani pelēka, opalescējoša.
Lietojumprogrammas
Starp paraugiem, ko var stādīt šajā barotnē, ir fekāliju, dzeramā vai notekūdeņu un pārtikas paraugi.
Lai uzlabotu izolātus, pirms sēšanas ar bismuta sulfīta agaru ieteicams veikt iepriekšēju bagātināšanu ar laktozes buljonu un pēc bagātināšanas ar tetrationātu buljonu vai cistīna selenīta buljonu.
Plāksnītes inkubē aerobiozes apstākļos 35 ° C ± 0,2 temperatūrā no 24 līdz 48 stundām.
Bismuta sulfīta agara koloniju raksturojums
Salmonella Typhi kolonijas parasti ir redzamas uz šī agara 24 stundu laikā ar melnu centru un ieskautu spilgti zaļā halo. Tā kā 48 stundu laikā sērūdeņraža veidošanās dēļ tie kļūst pilnīgi melni.
-Šī barotne kavē lielāko daļu Shigella ģints sugu.
- S. Typhi un S. arizonae var dot ļoti līdzīgas kolonijas.
-Koliformas, kas ražo H 2 S, piemēram, Proteus un Citrobacter, rada kolonijas, kas ir līdzīgas Salmonella kolonijām, tāpēc ir jāveic bioķīmiskās identifikācijas testi.
-Lai iegūtu izolētas kolonijas, jāveic laba virkne; Tas ir vienīgais veids, kā novērot Salmonella ģints koloniju raksturīgās īpašības.
QA
Sterilitātes kontrolei neinokulēta plāksne tiek inkubēta 37 ° C temperatūrā, paredzams, ka neaugs vai nemainīsies krāsa.
Kvalitātes kontrolei zināmi celmi, piemēram:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Paredzams, ka Escherichia coli un Shigella flexneri daļēji kavēs, attīstot attiecīgi zaļgani brūnas un brūnas kolonijas. Tā kā abām lašveidīgajām zivīm jābūt izcilai attīstībai ar melnajām kolonijām ar metālisku spīdumu, un visbeidzot ir pilnībā jānovērš Enterococcus faecalis.
Atsauces
- Vilsons, W. un EM Makvijs. Blērs. Glikozes bismuta sulfīta dzelzs barotnes izmantošana B. typhosus un B. proteus izolēšanai. Higiēnas žurnāls, 1927; 26 (4), 374-391. Saturs iegūts no .jstor.org
- D'aoust JY. Bismuta sulfīta agara uzglabāšanas apstākļu ietekme. J Clin mikrobiols. 1977. gads; 5 (2): 122. – 124. Pieejams: ncbi.nlm.nih.gov
- IVD laboratorijas. Bismuta-sulfīta agars pēc WILSON-BLAIR. 2009.Pieejams vietnē: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Himedia laboratorijas. Bismuta sulfīta agars. 2017.Pieejams vietnē: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G un Ybarra M. Miravalles pilsētā Pueblā ražota neapstrādāta kazas piena bakterioloģiskā kvalitāte. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54