XLD AGARS: PAMATOJUMS, SAGATAVOŠANA UN LIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

XLD agars vai Ksiloze lizīns desoxycholate agara barotnē ir selektīvs un diferenciālo ciets kultūra lai izolētu enteropatogēnu. Teilors izstrādāja XL agara (ksilozes, lizīna) formulu, lai uzlabotu Shigella ģints izolāciju.

Viņš novēroja, ka šī ģints tika kavēta lielākajā daļā barotņu, kas paredzēta enteropatogēnu izolēšanai. Pēc tam, lai palielinātu tā selektivitāti, tika pievienots nātrija deoksiholāts, nātrija tiosulfāts un dzelzs amonija citrāts. Šī formula ir izrādījusies noderīga gan Shigella, gan Salmonella izolēšanai.

Šigella, Salmonella un koliformu koloniju atšķirības XLD agarā. A. Šigella sp., B. Salmonella sp., C. Coliforms. Avoti: A. Autors: CDC / Amanda Moore, MT; Tods Pārkers, PhD; Audra Mārša, Pieklājība: Sabiedrības veselības attēlu bibliotēka B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Autors: CDC / Dr. JJ lauksaimnieks, Pieklājība: Sabiedrības veselības attēlu bibliotēka

XLD agars sastāv no rauga ekstrakta, nātrija deoksiholāta, ksilozes, lizīna, laktozes, saharozes, nātrija tiosulfāta, dzelzs amonija citrāta, nātrija hlorīda, fenola sarkanā un agara. XLD agara un SS agara duo tiek izmantots lielākajā daļā bakterioloģijas laboratoriju, lai pētītu fekāliju paraugus Šigella un Salmonella noteikšanai.

Citas laboratorijas starp citām pieejamajām iespējām dod priekšroku CHROMagar Salmonella un XLD agara kombinācijai. Šīs duras var pagatavot divkāršos Petri ēdienos. Vienā pusē tie ievieto XLD agaru, bet otrā pusē - otru izvēlēto barotni.

Pamats

-Nutrinošā jauda

XLD agaram ir rauga ekstrakts, kas kalpo par barības avotu mikroorganismiem, kas aug uz šī agara. Turklāt ogļhidrātu (ksilozes, saharozes un laktozes) klātbūtne nodrošina enerģiju baktērijām, kas tās var raudzēt.

-Vidēja selektivitāte

Kā inhibējoša viela tas satur nātrija deoksiholātu; Tas novērš grampozitīvo baktēriju augšanu, piešķirot barotnei selektīvu raksturu.

-Diferenciālā jauda

Tipiskas Šigella kolonijas

Kā jau minēts, XLD agars satur ksilozi; Šo ogļhidrātu raudzē visas baktērijas, kas aug šajā barotnē, izņemot Shigella ģints.

Šī ir viena no īpašībām, kas tai piešķir atšķirīgo raksturu, jo Shigella kolonijas no pārējām atšķir sarkano koloniju veidošanās, bet pārējās baktērijas rada dzeltenās kolonijas.

Tipiskas Salmonella kolonijas

Salmonella ģints arī fermentē ksilozi, sākotnēji veidojot dzeltenās kolonijas. Tomēr pēc ogļhidrātu ksilozes noārdīšanas tas uzbrūk lizīnam tā enzīma lizīna dekarboksilāzes dēļ. Lizīna dekarboksilēšana rada sārmus, kas kolonijas un apkārtējās vides krāsu pārveido sākotnēji sarkanā krāsā.

Šo uzvedību veic tikai Salmonella, jo koliformi, kas dekarboksilē lizīnu, nespēj sārmināt barotni. Tas notiek tāpēc, ka koliformi raudzē arī esošo laktozi un saharozi; tāpēc skābju ražošana ir ļoti augsta, atstājot dzelteno koloniju šajās baktērijās.

Jāatzīmē, ka Salmonella ģints nefermentē saharozi vai laktozi.

H ražošana

XLD agars arī ļauj noteikt H ₂ S producējošās Salmonella sugas ; Šajā nolūkā tas ir atkarīgs no sēra avota, ko pārstāv nātrija tiosulfāts, un reakcijas attīstītāju, kas ir dzelzs amonija citrāts.

Pēdējiem reaģē ar H ₂ S (bezkrāsas gāzes) un formas redzamas nešķīstošas melns nogulsnes no dzelzs sulfāta. Šajā ziņā salmonellu koloniju īpašības būs sarkanas ar melnu centru.

Jāatzīmē, ka, lai notiktu H ₂ S veidošanās reakcija , ir nepieciešams sārmains pH. Tāpēc citas Enterobacteriaceae, kas veido H ₂ S, nevar to darīt vai slikti izdara to šajā vidē, jo augsts skābums, ko rada fermentējot esošos ogļhidrātus, kavē vai kavē reakciju.

-Nātrija hlorīds, agars un fenola sarkans

Visbeidzot, nātrija hlorīds uztur osmotisko līdzsvaru; agars ir sacietēšanas līdzeklis, un fenola sarkanais nosaka pH izmaiņas, mainot koloniju un barotnes krāsu.

Sagatavošana

Nosver 55 g dehidrētas XLD barotnes un izšķīdina 1 litrā ūdens. Uzkarsē un maisa maisījumu, līdz tas sasniedz viršanas temperatūru. Neuzkarsējiet, jo siltums sabojā barotni un rada nogulsnes, kas maina tipisko koloniju morfoloģiju.

Šo barotni nedrīkst autoklāvot. Izšķīdinot, tas jāpārnes ūdens vannā 50 ° C temperatūrā. Atdzesējot, tas jāpasniedz tieši uz steriliem Petri traukiem. Tos var ielej atsevišķās plāksnēs vai dubultā plāksnēs. Tos atstāj sacietēt un līdz lietošanai uzglabā ledusskapī.

Pirms lietošanas atdzesē. Tā kā tā ir nesterila barotne, ieteicams to pagatavot tuvu lietošanas datumam.

Barotnes galīgajam pH jābūt 7,4 ± 0,2. Sagatavotās barotnes krāsa ir oranži sarkana, caurspīdīga, bez nogulsnēm.

Ja jums ir ksilozes lizīna (XL) bāzes agars, varat pievienot nātrija deoksiholātu, nātrija tiosulfātu un dzelzs amonija citrātu. Šādā veidā iegūst XLD agara formulu.

Lietojumprogrammas

XLD agaru izmanto enteropatogēnu, galvenokārt Shigella ģints un sekundāri, Salmonella ģints, reģenerācijai. Tas ir noderīgi, lai novērtētu izkārnījumu, ūdens un pārtikas paraugus.

Paraugu veidi

Izkārnījumi

Izkārnījumu paraugus var sēt tieši uz XLD agara, labi sadalot materiālu, lai iegūtu izolētas kolonijas.

Lai uzlabotu Salmonella atjaunošanos, XLD agaru var svītrot no Salmonella bagātināšanas vidēm.

Ēdiens

Pārtikas gadījumā var izmantot Salmonella un Shigella bagātināšanas buljonus. Salmonellai cita starpā varat izmantot selenīta cistīna buljonu, spilgti zaļu tetrationātu buljonu.

Shigella gadījumā to var bagātināt ar Shigella buljonu ar 0,5 µ / ml novobiocīna, inkubēt 42 ° ± 1 ° C temperatūrā 16-20 stundas.

Ūdens

Ūdens analīzē cita starpā ir ieteicama membrānas filtrēšanas metode un XLD agara izmantošana.

Stādīšanas un identifikācijas nosacījumi

Sēto barotni inkubē aerobos apstākļos 35 ° C temperatūrā no 24 līdz 48 stundām.

Tiek novērotas katras ģints tipiskās kolonijas, lai identificētu aizdomīgās kolonijas, jāveic bioķīmiskie testi.

QA

Lai novērtētu barotnes kvalitātes kontroli, var izmantot šādus baktēriju celmus: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus miCi3030. , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Salmonella ģinti raksturo tas, ka šajā barotnē ir sarkanas kolonijas ar melnu centru vai pilnīgi melnas kolonijas. Tā kā Shigella ģintī kolonijām jābūt sarkanām, tas ir, barotnes krāsai.

Paredzams, ka Escherichia coli gadījumā tā tiks pilnībā vai daļēji nomākta; ja tas aug, kolonijas ir dzeltenas. Proteus mirabilis gadījumā gaidāma slikta augšana ar rozā kolonijām ar melnu centru vai bez tā. Galu galā Klebsiella ģints augs kā dzeltenas kolonijas.

Noslēguma domas

XLD agaru plaši izmanto bakterioloģijas laboratorijās ar augstu efektivitāti Šigella reģenerācijā, un tam ir arī laba Salmonella ģints reģenerācija.

Rall et al. (2005) savā darbā "Trīs bagātināšanas buljonu un piecu cietu barotņu novērtēšana salmonellas noteikšanai mājputnos" parādīja, ka no trim pārbaudītajiem klasiskajiem barotnēm (spilgti zaļais agars, SS agars un XLD agars) , Vislabākais reģenerācijas līmenis bija XLD agaram.

Atgūšanas procenti bija šādi: 13,8% spilgti zaram agaram, 27,6% SS un 34,5% XLD. Rambaha agaru ar 48% atgūšanu un CHROMagar ar 79,3% pārspēja tikai hromogēnie barotnes.

Atsauces

1. Pārtikas izraisītas slimības. Šigeloze. Pieejams vietnē: anmat.gov.ar
2. "XLD agars." Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2019. gada 9. februāris, 11:46 UTC. 2019. gada 10. aprīlis, 19:25 wikipedia.org
3. BBL laboratorijas. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplate). 2013. Pieejams: bd.com
4. Lab. Neogēns. XLD agars. Pieejams vietnē: foodsafety.neogen
5. Fransisko Soria Melguizo laboratorija. XLD agars. Pieejams vietnē: http://f-soria.es/Inform
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Trīs bagātināšanas buljonu un piecu galvanizācijas līdzekļu novērtēšana salmonellas noteikšanai mājputniem. Braz. J. Mikrobiols. 2005. gads; 36 (2): 147-150. Pieejams no: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.