VOGELA-DŽONSONA AGARS: PAMATOJUMS, SAGATAVOŠANA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Agar Vogel-Johnson ir ciets vidēja selektīvs un diferenciāļa kultūra, īpaši izstrādāti izolācijai Staphylococcus aureus. Šo barotni 1960. gadā izveidoja Vogels un Džonsons pēc tellurēta glicīna agara modifikācijas, ko 1955. gadā izstrādāja Zebovics, Evanss un Nivens.

Pārveidošana ietvēra barotnē esošā mannīta koncentrācijas palielināšanu un pH indikatora iekļaušanu. Pašreizējā formula sastāv no tripteina, rauga ekstrakta, mannīta, dikālija fosfāta, litija hlorīda, glicīna, fenola sarkanā, agara, 1% kālija tellurīta šķīduma un ūdens.

Avots: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flikrs.

Jāatzīmē, ka ir arī citi barotnes, piemēram, sāļa mannīta agars un Berta Pārkera agars, tāpat kā Vogela-Džonsona agars, kas selektīvi izdala S. aureus. Šajā ziņā varētu teikt, ka Vogela-Džonsona agara pamats ir maisījums starp sāļo mannīta agaru un Baird Parker agaru.

Pirmajā S. aureus kolonijas izšķir, fermentējot mannītu un pārvēršot pH indikatoru dzeltenā krāsā. No otras puses, S. aureus raksturo tellurīta reducēšana līdz telūram un pelēku veidošanās līdz melnām kolonijām. Abas īpašības novēro Vogela-Džonsona agarā.

Šī barotne, tāpat kā tās līdzīgie, ir noderīga Staphylococcus aureus noteikšanai pārtikas paraugos, rūpniecisko izstrādājumu sanitārajā kontrolē un klīniskajos paraugos.

Pamats

Barības vielu piegāde

Vogel-Johnson barotne satur triptein un rauga ekstraktu; Abas vielas nodrošina aminoskābes ar garām ķēdēm, kuras kalpo par oglekļa un slāpekļa avotiem, kas nepieciešami baktēriju augšanai. Baktērijas, kuras var augt šajā barotnē, uzņems barības vielas no šīm vielām.

Selektīvā jauda

Vogela-Džonsona agars spēj kavēt gramnegatīvo baktēriju un pat dažu grampozitīvu baktēriju augšanu, sekmējot koagulāzes pozitīvu stafilokoku attīstību. Inhibējošās vielas ir kālija tellurīts, litija hlorīds un glicīns.

Diferenciālā jauda

Vielas, kas veido šo diferenciālo barotni, ir mannīts un kālija tellurīts. Mannīts ir ogļhidrāts, un, kad tas tiek raudzēts, tiek ražotas skābes, kas padara barotni no sarkanas uz dzeltenu, kas notiek, pateicoties sarkanā fenola pH indikatora klātbūtnei.

Tā kā bezkrāsainajam tellurītam, kad to samazina par brīvu metālisku tellūru, iegūst no tumši pelēkas līdz melnai krāsai.

Staphylococcus aureus raudzē mannītu un samazina tellurītu līdz telūram. Šī iemesla dēļ tipiskās S. aureus kolonijas šajā barotnē ir pelēkas vai melnas, un to ieskauj dzeltena barotne.

Baktērijas, kas aug šajā barotnē un nesamazina tellurītu vai fermentē mannītu, veidos caurspīdīgas kolonijas, kuras ieskauj sarkanā vidē, pat intensīvākas nekā sākotnējā krāsa, barotnes alkalizējot, izmantojot peptonus.

No otras puses, baktērijas, kas samazina tellurītu, bet neraudzē mannītu, augs kā pelēkas vai melnas kolonijas, ko ieskauj dziļi sarkana barotne.

Ja barotne būtu sagatavota bez kālija tellurīta pievienošanas, S. aureus kolonijas attīstītos kā dzeltenas kolonijas, ko ieskauj dzeltena barotne, kā sāļajā mannīta agarā.

Osmotiskais līdzsvars un sacietējošs līdzeklis

Dikālija fosfāts uztur barotnes osmotisko līdzsvaru un pielāgo pH neitralitātei. 7.2. Kamēr agars piešķir barotnei stabilu konsistenci.

Sagatavošana

Kālija tellurīta šķīdums, 1 masas%

Šis šķīdums nav iekļauts dehidrētajā barotnē, jo to nevar sterilizēt autoklāvā. Šī iemesla dēļ to sagatavo atsevišķi un pievieno jau sterilizētai barotnei.

Dažās tirdzniecības mājās tiek pārdots lietošanai gatavs 1% kālija tellurīta šķīdums. Ja vēlaties sagatavoties laboratorijā, rīkojieties šādi:

Nosver 1,0 g kālija tellurīta un izmēra 100 ml destilēta ūdens. Kālija tellurītu izšķīdina ūdens daļā un pēc tam piepilda ūdens daudzumu, līdz tas sasniedz 100 ml. Sterilizējiet šķīdumu ar filtrācijas metodi.

Vogela-Džonsona agara bāzes vide

Nosver 60 gr dehidrētas barotnes un izšķīdina 1 litrā destilēta ūdens. Maisījumu uzkarsē līdz vārīšanās temperatūrai, lai veicinātu pilnīgu izšķīšanu. Izšķīdināšanas laikā barotni bieži maisa.

Sterilizējiet autoklāvā 15 mārciņu spiedienā un 121 ° C 15 minūtes. Izņem no autoklāva un ļauj tam atpūsties, līdz barotnes temperatūra sasniedz aptuveni 45 līdz 50 ° C. Pievieno 20 ml iepriekš sagatavota 1% kālija tellurīta šķīduma.

Sajauc un ielej sterilos Petri traukos. Ļauj sacietēt un pasūti apgrieztu uz plākšņu turētājiem, lai vēlāk varētu uzglabāt ledusskapī līdz lietošanai.

Sagatavotās barotnes galīgajam pH jābūt 7,2 ± 0,2.

Pirms parauga sēšanas pagaidiet, kamēr plate sasniedz istabas temperatūru.

Sagatavotās barotnes krāsa ir sarkana.

Izmantojiet

Lai gan to var izmantot S. aureus izolēšanai jebkura veida paraugos, to galvenokārt izmanto farmaceitisko produktu, kosmētikas un pārtikas mikrobioloģiskajai analīzei.

Sējmašīnai ieteicams būt blīvam. Sēšanu var veikt, vērtējot ar platīna rokturi vai ar virsmu ar Drigalski lāpstiņu.

Plāksnes inkubē 35-37 ° C temperatūrā 24 līdz 48 stundas aerobiozes laikā.

QA

Lai veiktu Vogel-Johnson barotnes kvalitātes kontroli, var izmantot šādus kontroles celmus:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 vai Proteus mirabilis ATCC 43071.

Gaidāmais rezultāts ir šāds: S. aureus celmiem augšana ir apmierinoša, ja melnās kolonijas ieskauj dzeltena barotne. S. epidermidis normālai augšanai ar caurspīdīgām vai melnām kolonijām, ko ieskauj sarkana barotne.

Tāpat sagaidāma pilnīga inhibīcija E. coli un daļēja vai pilnīga Proteus mirabilis inhibīcija; ja tas aug, tas notiks saudzīgi, un kolonijas būs melnas, sarkanā krāsā ieskautas.

Atsauces

1. BD laboratorijas. VJ (Vogels un Džonsons Agars). 2006.Pieejams vietnē: bd.com
2. Britannia laboratorijas. Vogels- Džonsona agars. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
3. Britannia laboratorijas. Kālija tellurīts. 2015.Pieejams vietnē: britania.com
4. Himedia laboratorija. Vogel- Džonsona agara vide. 2018.Pieejams vietnē: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel- Džonsona agara bāze. Merck mikrobioloģijas rokasgrāmata. 12. izdevums, 502. – 503. Lpp. Pieejams vietnē: Lietotāji / Komanda / Lejupielādes
6. Wikipédia līdzautori, “Ágar Vogel Jonhson”, Wikipédia enciklopēdija bez maksas, pieejami vietnē: wikipedia.org.
7. Venecuēlas standartkovenīns 1292-89. (1989). Pārtika. Staphylococcus aureus izolēšana un uzskaitīšana. Pieejams vietnē: sencamer.gob.ve