KOŠI ZAĻAIS AGARS: PAMATOJUMS, SAGATAVOŠANA UN LIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Izcili zaļā agars ir cieta barotne ar augstu selektivitāti. To izmanto vienīgi Salmonella ģints celmu izolēšanai, tomēr ir arī daži izņēmumi, piemēram, tīfiju un paratyphi sugas, kas neaug šajā barotnē.

Salmonella ģints meklēšana ir bieža izkārnījumos, ūdenī vai pārtikas paraugos. Šajā ziņā šī vide var būt ļoti noderīga. Šo agaru 1925. gadā izveidoja Kristensens, Lesters un Jurgens, vēlāk to modificēja Kaufens.

Koši zaļš agars. Fermentējošās un nefermentējošās kolonijas. Avots: MJ Richardson / Invisible Worlds izstāde - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License.

Tas sastāv no pluripeptoniem no dzīvnieku audu peptiskā sagremojuma un aizkuņģa dziedzera kazeīna sagremojuma, tas satur arī rauga ekstraktu, nātrija hlorīdu, laktozi, saharozi, fenola sarkano, spilgti zaļo un agara agaru.

To raksturo tas, ka lielākajai daļai baktēriju tā ir diezgan neuzkrītoša vide, kas veicina salmonellu augšanu, tomēr dažas koliformi spēj tajā izdzīvot, attīstoties vāji.

Ir svarīgi atzīmēt, ka Shigella ģints neaug uz šīs barotnes, kā arī ne Salmonella typhimurium, ne Salmonella paratyphi. Tāpēc, ja vēlaties izolēt šos mikroorganismus, cita starpā jāizmanto citi barotnes, piemēram, XLD agars.

Pamats

Koši zaļš agars

Katrs komponents, kas veido barotni, pilda noteiktu funkciju, kas nosaka agara īpašības un īpašības.

Pluripeptoni un rauga ekstrakts ir barības vielu avots, no kura mikroorganismi ņem slāpekli un minerāļus, kas nepieciešami to attīstībai. Laktoze un saharoze ir enerģijas avoti mikroorganismiem, kas spēj tos raudzēt.

Koši zaļa ir inhibējošā viela, kas novērš grampozitīvo baktēriju un daudzu gramnegatīvu mikroorganismu augšanu.

Nātrija hlorīds nodrošina barotnes osmotisko stabilitāti. Lai gan fenola sarkanais ir pH indikators, tas, mainot skābes veidošanos ogļhidrātu fermentācijas laikā, kļūst krāsains.

Nefermentējošās laktozes un saharozes kolonijas šajā barotnē aug sārtā vai caurspīdīgā baltā krāsā uz sarkanā fona. Piemēram, Salmonella ģints baktērijas.

Kamēr laktozi vai saharozi fermentējošās baktērijas, kuras var augt šajā barotnē, uz dzeltenīgi fona veidojas dzeltenīgi zaļas vai dzeltenzaļas kolonijas. Piemēram, Escherichia coli un Klebsiella pneumoniae.

Koši zaļa agara (BGA) varianti

Ir arī citi spilgti zaļa agara varianti; Novobiocīna izcili zaļās glikozes (NBG) agars un Novobiocīna izcili zaļās glicerīna laktozes (NBGL) agars.

Novobiocīns spilgti zaļais glikozes agars

Satur Trypticase sojas agaru, dzelzs amonija citrātu, nātrija tiosulfāta pentahidrātu, fenola sarkano, glikozi, spilgti zaļu, novobiocīnu un destilētu ūdeni.

To izmanto Salmonella koloniju izolēšanai no izkārnījumu paraugiem.

Šajā gadījumā spilgti zaļš un novobiocīns ir inhibējošās vielas, kas novērš grampozitīvu baktēriju un dažu gramnegatīvu mikroorganismu augšanu.

Nātrija tiosulfāts ir sulfīda avots, un dzelzs citrāts ir dzelzs avots, kas abi ir nepieciešami, lai atklātu sērūdeņraža veidošanos, veidojot melnā dzelzs sulfīda nogulsnes.

Glikoze ir raudzējamais ogļhidrāts, un fenola sarkanais ir pH indikators.

Šajā barotnē attīstās lielas Salmonella kolonijas ar melnu centru, ko ieskauj sarkanīgi halo un kam seko skaidri redzams laukums. Daži Citrobacter freundii celmi rada kolonijas, kas ir identiskas Salmonella kolonijām.

Novobiocin Brilliant Green Glicerīna laktozes agars (NBGL)

Šī barotne satur tripptāzes sojas agaru, dzelzs amonija citrātu, nātrija tiosulfātu, laktozi, glicerīnu, spilgti zaļu, novobiocīnu un destilētu ūdeni.

Atšķirība starp šo barotni un iepriekšējo ir tāda, ka glikozi aizstāj ar laktozi un glicerīnu, un fenola sarkanais netiek izmantots.

Barotne tiek izmantota arī Salmonella sugu izolēšanai, tāpēc, ka rodas sērūdeņradis, kolonijās veidojas melna krāsa.

Tikai tādas kolonijas, kas neizraisa skābi no glicerīna vai laktozes, nodrošina pietiekamu H ₂ S veidošanos , jo zems pH līmenis traucē H ₂ S veidošanos, kā rezultātā lielākajai daļai sugu ir bezkrāsainas kolonijas. Proteus un Citrobacter.

Sagatavošana

-Sver 58 gramus komerciāli iegūtas dehidrētas barotnes. Pievienojiet to litram atkārtoti destilēta ūdens. Sajauciet, ļaujiet nostāvēties dažas minūtes un novietojiet maisījumu uz siltuma avota, līdz tas pilnībā izšķīst.

-Autoklāvs 121 ° C temperatūrā 15 minūtes, nepārsniedziet sterilizācijas laiku.

- Ļaujiet tai atpūsties un karstā laikā pasniegt sterilos Petri traukos. Galīgajam pH jābūt 6,9 ± 0,2.

-Ļaujiet sacietēt un uzglabāt ledusskapī līdz lietošanai. Pirms sēšanas plāksnēm jāuzņem istabas temperatūra.

-Pulvera barotne ir zaļā krāsā un sagatavota iegūst oranži brūnu vai sarkanīgi zaļu krāsu atkarībā no pH un tirdzniecības uzņēmuma. Ļoti brūna krāsa norāda uz agara pārkaršanu.

- Kad agars ir sacietējis, nav ieteicams pārstrādāt, jo vide pasliktinās.

Lietojumi / lietojumprogrammas

Šo barotni cita starpā izmanto, lai meklētu Salmonella ģints celmus no izkārnījumu paraugiem un piena produktiem.

Tā kā tā ir diezgan nelietīga vide, ieteicams sēt bagātīgu sējmateriālu, ja tiek izmantots tiešais paraugs. Pretējā gadījumā pirms sēšanas šajā barotnē ir jāveic iepriekšēja bagātināšana un bagātināšana.

Tā kā daži Salmonella celmi tiek kavēti vai aug ar grūtībām, ieteicams šo barotni papildināt ar citu selektīvo agaru Salmonella noteikšanai.

Katru koloniju ar tipiskām salmonellas īpašībām pakļauj bioķīmiskajiem testiem, lai to galīgi identificētu.

QA

Lai pārbaudītu spilgti zaļā agara barotnes labu sniegumu, ATCC celmus var izmantot, lai novērotu to attīstību uz tā.

Biežākie kvalitātes kontrolei izmantotie celmi ir: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12038, Staphylococcus.

Pirmajiem 3 vajadzētu dot rožainas vai caurspīdīgas baltas kolonijas uz sarkanā fona. Salmonellas ar labu attīstību un Proteus ar nelielu vai regulāru augšanu.

Klebsiella un Escherichia gadījumā ir sagaidāmas dzeltenīgi zaļas kolonijas ar dzeltenu fonu, un Shigella un Staphylococcus gadījumā tās ir jānovērš.

Dehidrētā barotne jāuzglabā istabas temperatūrā, sausā vietā, jo barotne ir ļoti higroskopiska.

Atsauces

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Briljantzaļais agars. 2009. gads
2. Britannia laboratorija. Koši zaļais agars. 2015. gads.
3. BD laboratorija. BD briljantzaļais agars. 2013. gads.
4. Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. (5. izd.). Argentīna, Panamericana SA redakcija
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Argentīna. Redakcija Panamericana SA