THAYER MARTIN AGARS: PAMATS, SAGATAVOŠANA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Agars Thayer Martin tas ir ļoti barojoša un ciets selektīvā barotne izolācijai Neisseria meningitidis un Neisseria gonorrhoeae; abi pazīstami kā patogēni vai klīniski svarīgi Neisserias.

Viena no vissvarīgākajām Thayer Martin Agara īpašajām īpašībām ir lielais uztura bagātinātāju saturs. Šī īpašība ir būtiska, jo Neisserias ir ļoti prasīgi mikroorganismi no uztura viedokļa un tāpēc neaudzē parastās barotnēs.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin biznesa vide. Avota 1. attēls: Autores uzņēmis maģistrantūru. Marielsa Gil, attēls 2. Pixinio.com baktēriju kolonizēts, modificēts, Thayer, Martin, agars.

No otras puses, tā kā šie mikroorganismi parasti atrodas nesterilos apgabalos, inhibitoru pievienošana ir nepieciešama, lai novērstu pavadošās floras augšanu, neietekmējot Neisseria ģints attīstību.

Šis agars sastāv no GC bāzes agara, hemoglobīna, papildu uztura bagātinātājiem un inhibējošo vielu kompleksa (antibiotikām un pretsēnīšu līdzekļiem). Komerciālās mājas katru no papildinājumiem pārdod atsevišķi.

Šajā barotnē sējamais paraugs būs atkarīgs no meklētā mikroorganisma. Neisseria gonorrhoeae gadījumā ideālie paraugi ir maksts un urīnizvadkanāla sekrēcijas. Kamēr Neisseria meningitidis paraugi ir CSF, rīkles un nazofarneksa eksudāti.

Pamats

Neisserias ir mikroorganismi, kas klasificēti kā kaitinoši, un tāpēc tos ir grūti izolēt. Tāpēc Thayer Martín ir sarežģīts līdzeklis, un katrs no tā komponentiem pilda funkciju, kas izskaidrota turpmāk:

GC bāzes agars

GC agars satur proteozes peptonu, kukurūzas cieti, nātrija hlorīdu, dikālija fosfātu, monokālija fosfātu un agara agaru. Tās sastāvdaļas nodrošina pamata barības vielas mikrobu attīstībai, neitralizē toksiskās taukskābes, palīdz uzturēt osmotisko līdzsvaru, nosaka pH un nodrošina barotnei stabilu konsistenci.

Hemoglobīns

Hemoglobīns nodrošina faktorus V un X (attiecīgi nikotinamīda adenīna dinukleotīdi NAD un hemīns). Šī iemesla dēļ šajā barotnē aug arī Haemophilus sugas. Hemoglobīnu tirdzniecībā var iegūt dehidrētā veidā vai barotnei var pievienot svaigas defibrētas liellopu asinis.

Bagātināšanas papildinājums

No otras puses, Thayer-Martin barotnei jāpievieno arī bagātināšanas papildinājums, jo bāzes agarā esošās barības vielas nav pietiekamas Neisseria ģints prasībām.

Visbiežāk izmantoto bagātināšanas papildinājumu sauc par isovitalex. Tas satur glutamīnu, adenīnu, NAD, kokarboksilāzi, guanīnu, dzelzs nitrātu, p-aminobenzoskābi, B12 vitamīnu, tiamīnu un glikozi. Visi šie savienojumi ir nepieciešami, lai pareizi attīstītu patogēnās Neisserias.

Inhibitori

Tā kā tā ir ļoti barojoša barotne, jāizmanto inhibitori, kas novērš mikroorganismu augšanu no parastās apgabala floras un tādējādi veicina Neisseria ģints izolāciju.

Inhibitoru kompleksu veido vankomicīns, kolistīns un nistatīns. Vankomicīns kavē grampozitīvo baktēriju augšanu, kolistīns novērš gramnegatīvo baktēriju, piemēram, Pseudomonas un dažu saprofītu Neisserias, augšanu, un nistatīns iedarbojas uz raugiem, piemēram, Candida albicans.

Tomēr Thayer Martins Agars vēlāk tika modificēts; izmaiņas sastāvēja no trimetoprima pievienošanas, agara daudzuma palielināšanas un papildu glikozes pievienošanas. Šīs izmaiņas ievērojami uzlaboja Neisseria gonorrhoeae sugu atjaunošanos.

Jāatzīmē, ka trimetoprims kavē Proteus ģints augšanu un no tā izrietošo barības veidošanos. Šajā ziņā Thayer Martin barotnei selektīvās īpašības piešķir tieši antibiotikas.

Sagatavošana

Oriģinālais Thayer Martin agars

-GC agars

Nosver 8,2 g dehidrētas GC barotnes un suspendē 100 ml. Sajauc un vāra 1 minūti, bieži maisot, lai pilnībā izšķīst. Sterilizējiet maisījumu autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

- 2% hemoglobīna

Suspendējiet 2 g dehidrēta hemoglobīna 2 vai 3 ml karsta destilēta ūdens, līdz veidojas vienveidīgs maisījums. Pievienojiet nedaudz pamazām ūdens, lai iegūtu 100 ml tilpuma. Pirms sterilizācijas suspensijai jābūt viendabīgai.

Sterilizējiet autoklāvā 15 minūtes.

- bagātināšanas piedeva

Pagatavojiet flakonu ar šķīdinātāju, ko piegādājis tas pats tirdzniecības uzņēmums. Labi samaisa. Lietojamā atšķaidītāja daudzums tiks norādīts komplekta instrukcijās.

-VCN kavēšanas papildinājums (vankomicīns, kolistīns, nistatīns)

Pagatavojiet flakonu ar komercsabiedrības piegādāto atšķaidītāju. Labi samaisa. Lietojamā atšķaidītāja daudzums tiks norādīts komplekta instrukcijās.

-Sagatavots

Uz katriem 100 ml GC agara rīkojas šādi:

Kad GC agars iziet no autoklāva, ļauj tam atdzist līdz aptuveni 50 ° C temperatūrai un pievieno 2 ml sagatavotā hemoglobīna šķīduma, 2 ml bagātināšanas papildinājuma (izobitalekss vai britalekss) un 2 ml kavējošā papildinājuma. Sajauc un pasniedz sterilos Petri traukos.

Ļaujiet sacietēt un uzglabāt ledusskapī līdz lietošanai.

Sagatavotās barotnes krāsa ir ķiršu sarkana. Barotnes galīgais pH ir 7,2 ± 0,2

Modificēts Thayer Martin agars

Nosver 8,2 g dehidrētas GC barotnes un suspendē 100 ml. Pievieno 1 g agara agara un pievieno 0,3 g glikozes. Sajauc un vāra 1 minūti, bieži maisot, lai pilnībā izšķīst. Sterilizējiet maisījumu autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Sagatavojiet hemoglobīna un bagātināšanas papildinājumu, kā aprakstīts iepriekš.

Izmantotais nomākšanas papildinājums ir VCNT (vankomicīns, kolistīns, nistatīns, trimetoprims).

-Sagatavots

Rīkojieties, kā aprakstīts sākotnējam Thayer Martin agaram.

Izmantojiet

Thayer Martin Agaram jāļauj sasilt pirms paraugu iesvītrošanas. Parasti lietotie paraugi ir rīkles, deguna, tamponu, maksts, urīnizvadkanāla un / vai taisnās zarnas izdalījumi un CSF.

Izmantojiet svaigus paraugus un uz agara izveidojiet stiprus sējmašīnas. Paraugi tiek iesēti tieši materiāla izvadīšanas laikā, un pēc tam izsūknēšana tiek uzvilkta uz virsmas.

Plāksnes inkubē 35-37 ° C temperatūrā 24 līdz 48 stundas mikroaerofīlā burkā (5% CO ₂ ). Inkubācijas laika beigās plāksnēm pārbauda mazas, pelēkas un dažreiz gļotādas izskata kolonijas.

Gram un apstiprinošus bioķīmiskos testus veic aizdomīgām kolonijām.

QA

Thayer Martin Agara kvalitātes kontrolei var izmantot šādus mikrobu celmus.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 un Neisseria meningitidis ATCC 13090; sagaidāma apmierinoša attīstība abos celmos.

Jāiekļauj arī šādi celmi: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 un Candida albicans ATCC 10231. Visās no šīm barotnēm ir paredzēta pilnīga vai daļēja inhibīcija.

Ierobežojumi

- Jāpatur prātā, ka barotnē var augt baktērijas, kas ir izturīgas pret izmantotajiem inhibitoriem.

-Ir Neisseria gonorrhoeae celmi, kas var būt jutīgi pret izmantotā vankomicīna koncentrāciju. Šī iemesla dēļ ieteicams lietot šokolādes agaru, kas papildināts ar izovalekselu, bet bez inhibitoriem.

-Tur ir nistatīnrezistenti rauga celmi, kas var augt šajā barotnē un traucēt patogēno Neisserias, īpaši gonokoku, izolāciju.

Atsauces

1. Valtek diagnostikas laboratorijas. Thayer-Martin Agars, 2016. gads. Pieejams: com
2. Britannia laboratorijas. Thayer Martin Medium Modified. 2010.Pieejams vietnē: britanialab.com
3. Wikipedia līdzautori. Thayer-Martin agars. Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2017. gada 26. oktobris, 16:33 UTC. Pieejams: wikipedia.org 4. Piekļuve 2019. gada 28. februārim.
4. Britannia laboratorijas. GC agars. 2010.Pieejams vietnē: britanialab.com.
5. Laboratorijas BBL ™ vidēja bagātināšana smalkiem mikroorganismiem. 1999. Pieejams: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.