TCBS agars ir līdzeklis selektīviem un diferenciālās cieto kultūrā, izolēšanai un audzēšanu baktēriju ģints Vibrio, īpaši Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus un V. vulnificus kā lielāko patogēnu šāda veida.
Akronīms TCBS apzīmē tiosulfāta citrāta žults saharozi. Šis agars ir arī pazīstams kā Vibrios selektīva barotne. Sākotnējo formulu izveidoja Nakanishi, un vēlāk to pārveidoja Kobayashi.
Tirdzniecības TCBS barotne un TCBS agara plāksne, kas iesēta ar Vibrio cholerae. Avots: 1. foto: autores autors MSc. Marielsa Gil / Foto 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, Indija
Tas sastāv no rauga ekstrakta, gaļas peptona, tripteina, nātrija citrāta, nātrija tiosulfāta, vērša žults, saharozes, nātrija hlorīda, dzelzs citrāta, bromtimola zilā, timola zilā un agara.
Šis sastāvs ļauj pienācīgi attīstīt Vibrio sugas no ūdens, pārtikas un fekāliju paraugiem; izņemot Vibrio hollisae, kas šajā barotnē neaug. Turklāt TCBS barotne spēj kavēt citu pavadošo baktēriju, īpaši koliformu, augšanu.
Sakarā ar nopietnām kuņģa-zarnu trakta un ārpus zarnu trakta problēmām, ko rada dažas Vibrio ģints sugas, tās diagnoze ir ļoti svarīga. Cilvēki galvenokārt tiek inficēti, ēdot neapstrādātu vai nepietiekami termiski apstrādātu pārtiku no jūras vai piesārņotiem ūdeņiem, kā arī ar brūču infekciju.
Tāpēc klīniskajās laboratorijās šķidro izkārnījumu paraugu izkārnījumu kultūras pētījumos jāiekļauj TCBS agars, it īpaši ar rīsu ūdens parādīšanos. It īpaši, ja pacients ziņo, ka ir bijis saskarē ar jūras ūdeni vai patērējis gliemenes vai zivis.
Pamats
Rauga ekstrakts, gaļas peptoni un tripteins ir barotne no šīs barotnes. Tomēr TCBS agars ir nelietderīga vide lielākajai daļai baktēriju.
Tā augsto selektivitāti piešķir, pievienojot nātrija citrātu un vērša žulti; abi ir inhibitori, kas arī barotnei nodrošina sārmainu pH līmeni, ierobežojot pavadošās floras augšanu un sekmējot V. cholerae augšanu, starp citām sugām. Jāatzīmē, ka Vibrio cholerae ir ļoti jutīga pret skābumu.
Savukārt nātrija hlorīds osmotiski līdzsvaro barotni. Turklāt, tā kā tā koncentrācija ir augsta, tā darbojas arī kā inhibējoša viela, veicinot halogēno baktēriju augšanu.
Saharoze ir raudzējamais cukurs, kas kopā ar bromtimola zilo un timolu zilo pH rādītājiem piešķir barotnei atšķirīgu raksturu. Šī iemesla dēļ ar šo barotni ir iespējams atšķirt saharozes fermentācijas celmus no nefermentējošajiem.
Saharozes fermentācijas celmu kolonijas iegūst dzeltenu krāsu un skābes ražošanas dēļ barotni pārvērtīs no zaļas līdz dzeltenai. Neraudzētāji kļūst caurspīdīgi, un barotne paliek sākotnējā krāsā (zaļa).
Tāpat šī barotne satur nātrija tiosulfātu kā sēra avotu un dzelzs citrātu kā jaunattīstības līdzekli. Abās parādītas baktērijas, kas spēj radīt sērūdeņradi (bezkrāsainu gāzi). H 2 S veidojas no tiosulfāts un pēc tam uz reakcijai ar dzelzs citrātu redzamā melnas nogulsnes.
Visbeidzot, agars ir tas, kas barotnei nodrošina cietu konsistenci.
Sagatavošana
Nosver 89 g dehidrētas barotnes un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens. Palīdziet izšķīdināšanai, karsējot un bieži maisot. Maisījumu var vārīt ne ilgāk kā 2 minūtes.
Šī vide nav autoklāvāta. Pēc izšķīšanas to pasniedz tieši uz sterilām plāksnēm. Kad tie sacietē, tos apgrieztā veidā sakārto uz trombocītiem un līdz lietošanai uzglabā ledusskapī (2–8 ° C).
Barotnei pēc pagatavošanas jābūt pH 8,6 ± 0,2.
Dehidrētās barotnes krāsa ir gaiši smilškrāsas vai zaļgani smilškrāsas, un barotnes krāsa ir meža zaļa vai zilgani zaļa.
Pirms paraugu iesēšanas ir svarīgi ļaut plāksnēm sasilt.
Izmantojiet
Visizplatītākais Vibrios izolācijas paraugs ir caurejas izkārnījumi.
Izkārnījumu paraugi, ja tos nevar uzreiz iesēt selektīvā barotnē, jāpārvadā ar Cary Blair barotni.
Lai palielinātu kultūras jutīgumu, fekālijas var izlaist cauri peptona ūdenim ar pH 8,4 kā bagātināšanas vidi ne ilgāk kā 8 stundas, no turienes tos subkulturē līdz TCBS barotnei.
Jāņem vērā arī tas, ka daži Vibrios celmi var izraisīt septicēmiju pacientiem ar imūnsistēmas nomākumu, tāpēc tos var izolēt no asins kultūrām. Tāpat var analizēt ūdens un pārtikas paraugus no jūras, ja ir holēras slimības uzliesmojumi.
Sēj
Pētījuma parauga sējmašīnai jābūt pamanāmai, sēšanu veic ar sijāšanas metodi izsmelšanas ceļā. Plāksnītes inkubē 24 stundas 37 ° C temperatūrā.
Paredzamās Vibrio cholerae kolonijas ir vidēja lieluma, gludas, necaurspīdīgas, ar plānām malām un dzeltenu krāsu saharozes fermentācijas dēļ.
V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii un daži V. vulnificus sugas aug līdzīgā veidā. Citas klīniski nozīmīgas Vibrios sugas, piemēram, V. parahaemolyticus, neraudzē saharozi, attīstoties kā olīvu zaļās kolonijas.
TCBS agara plāksne ar Vibrio parahaemolyticus. Avots: isis325 Flickr
No otras puses, jāpatur prātā, ka šajā vidē var augt daži Aeromonas un Plesiomonas celmi, kas ir oksidāzes (+), veidojot dzeltenās kolonijas, kas var maldināt klīnicistu. Kaut arī daži Pseudomonas celmi aug arī oksidāzes (+) kā zaļas kolonijas, piemēram, V. parahaemolyticus.
Ierobežojumi
Oksidāzes testu, kas ir pozitīvs attiecībā uz Vibrio ģinti, nekad nevajadzētu veikt no kolonijām, kas iegūtas no TCBS agara, jo iegūtais rezultāts būs kļūdaini negatīvs. Savienojumi vidū stipri traucē šo testu. Tāpēc tas jāizgatavo no subkultūrām uz asins agara.
QA
Lai pierādītu, ka barotne ir labā stāvoklī, ieteicams sēt zināmus vai sertificētus kontroles celmus un novērot, vai augšana atbilst paredzētajām īpašībām.
Šim nolūkam varat izmantot:
-Vibrio cholerae - apmierinoša augšana (dzeltenas kolonijas, caurspīdīgas robežas).
-Vibrio parahaemolyticus - apmierinoša augšana (kolonija ar zaļu centru un caurspīdīgu apmali).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - apmierinoša augšana (ap koloniju ir dzeltenas kolonijas ar vienas krāsas halogām).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - pilnīga vai daļēja inhibīcija (mazas dzeltenas vai caurspīdīgas kolonijas).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - daļēja vai pilnīga inhibīcija (zilās kolonijas).
-Escherichia coli ATCC 25922 - Pilnībā kavēta.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 -– Pilnīga vai daļēja inhibīcija. (Mazas kolonijas ar zaļu centru, caurspīdīgu robežu).
Neinokulētas barotnes inkubācijai jābūt nemainīgai.
Atsauces
- Difco Francisco Soria Melguizo laboratorijas. TCBS agars. 2009.Pieejams vietnē: f-soria.es
- BD laboratorija. BD. TCBS Agars 2003. Pieejams vietnē: bd.com
- Britannia laboratorijas. TCBS Medium. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
- Acumedia laboratorijas. TCBS agars. 2016.Pieejams vietnē: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
- Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.