ASINS AGARS: PAMATOJUMS, LIETOJUMS UN SAGATAVOŠANA - BIOLOĢIJA - 2025

Asinis agars ir cieta barotne bagātināts starpība, bet neselektīvie. To izmanto ļoti dažādu mikroorganismu atgūšanai un augšanai no klīniskiem paraugiem vai subkultūrām.

Lielākajai daļai laboratorijā saņemto klīnisko paraugu sēšanas jāiekļauj klasiskais asins agars; izņemot izkārnījumu paraugus, kur tas nav lietderīgi, ja vien tie nav sagatavoti ar noteiktām modifikācijām.

Asins agara plate

Šī barotne galvenokārt sastāv no bagātināta bāzes agara un 5% asiņu. Agara bāze var mainīties atkarībā no vajadzībām, bet to galvenokārt veido peptoni, aminoskābes, vitamīni, gaļas ekstrakts, nātrija hlorīds, agars, cita starpā.

Asinīm parasti ir nepieciešama saskare ar vivāriju, lai iegūtu asinis no dzīvniekiem, piemēram, aitām, trušiem vai zirgiem. Tomēr tas ne vienmēr ir iespējams, un dažreiz tiek izmantotas arī cilvēku asinis.

Asins agara barotni var pagatavot laboratorijā vai iegādāties gatavu no īpašiem uzņēmumiem. Šīs barotnes sagatavošana ir viena no delikātākajām, bez jebkādas neuzmanības tās pagatavošanas rezultātā tiks piesārņota partija.

Tāpēc jāveic visi iespējamie piesardzības pasākumi, un beigās jāveic kvalitātes kontrole, inkubējot 37 ° C temperatūrā 1 plāksni uz katriem 100 sagatavotajiem.

Pamats

Staphylococcus aureus kultivē uz asins agara. Nātana lasīšana Flikrī Nātana R. vietnē Twitter, izmantojot Wikimedia Commons Jau tika minēts, ka asins agaram ir raksturīga bagātināta, diferencēta un neselektīva vide. Katras šīs īpašības pamats ir paskaidrots turpmāk.

Asins agars ir bagātināta barotne, jo kā galvenā piedeva tajā ir 5-10% asiņu uz agara pamata. Abi savienojumi satur daudz barības vielu, un šī īpašība ļauj tajā augt lielākajai daļai kultivējamu baktēriju.

Šis pieaugums notiek bez ierobežojumiem; šī iemesla dēļ tā nav selektīva. Tomēr, ja šai barotnei pievieno savienojumus, kas novērš dažu mikroorganismu augšanu un dod priekšroku citiem, tas kļūst selektīvs. Tas ir gadījumā, ja tiek pievienoti noteikta veida antibiotikas vai pretsēnīšu līdzekļi.

Tāpat asins agars ir diferenciāla barotne, jo tas ļauj atšķirt 3 baktēriju veidus: beta-hemolītiskās, alfa-hemolītiskās un gamma-hemolītiskās.

Beta-hemolītiskie līdzekļi ir tie, kas spēj pilnībā izdalīt vai noārdīt sarkanās asins šūnas, veidojot skaidru halogēnu ap kolonijām, tāpēc tie rada ß vai ß-hemolīzi un mikroorganismus sauc par ß-hemolītiskiem.

Ss-hemolītisko baktēriju piemēri ir Streptococcus pyogenes un Streptococcus agalactiae.

Alfa-hemolītiskie līdzekļi ir tie, kas veic daļēju hemolīzi, kur hemoglobīns tiek oksidēts līdz methemoglobīnam, radot zaļganu krāsu ap kolonijām. Šo parādību sauc par α vai α-hemolīzi, un baktērijas klasificē kā α - hemolītiskas.

Α-hemolītisko baktēriju piemēri ir Streptococcus pneumoniae un Streptococcus no viridans grupas.

Visbeidzot, ir tā saucamās gamma-hemolītiskās vai nehemolītiskās baktērijas. Tie aug uz agara, neradot tajā izmaiņas, kas ir zināma kā γ-hemolīze, un mikroorganismi ir γ -hemolītiski.

Γ-hemolītisko baktēriju piemērs: daži D grupas Streptococcus celmi (Streptococcus bovis un Enterococcus faecalis).

Lietojumprogrammas

Asins agara barotne ir viena no mikrobioloģijas laboratorijā visbiežāk izmantotajām.

Starp mikroorganismiem, kas var augt asins agara barotnē, ir: stingras aerobās, fakultatīvās, mikroaerofīlās, anaerobās, grampozitīvās vai gramnegatīvās baktērijas, ātri augošās vai lēni augošās baktērijas.

Audzē arī dažas uzturvērtības prasīgas vai izvēlīgas baktērijas, kā arī sēnītes un raugi. Tāpat tas ir noderīgi subkultivēšanai vai atkārtotai aktivizēšanai celmiem, kas metaboliski ir ļoti vāji.

Tomēr asins tipa un bāzes agara izvēle būs atkarīga no iespējamā mikroorganisma, par kuru ir aizdomas, ka atveseļojas, un no tā, kā plate tiks izmantota (kultūra vai antiiogramma).

Asins grupas izvēle

Asinis var būt jēra, truša, zirga vai cilvēka.

Ieteicamākās ir jēra asinis, ar dažiem izņēmumiem. Piemēram, lai izolētu Haemophilus sugas, kurās ieteicamās asinis ir zirgu vai trušu asinis, jo jēra asinīs ir fermenti, kas kavē V faktoru.

Vismazāk ieteicamais ir cilvēks, tomēr to izmanto visvairāk, iespējams, tāpēc, ka to ir visvieglāk iegūt.

Asinis ir jādefinē, tās jāsaņem bez jebkāda veida piedevām un no veseliem dzīvniekiem. Cilvēka asiņu lietošanā jāņem vērā vairāki faktori:

Ja asinis nāk no indivīdiem, kuriem ir bijušas bakteriālas infekcijas, viņiem būs īpašas antivielas. Šādos apstākļos dažu baktēriju augšana, iespējams, tiek kavēta.

Ja to iegūst no asins bankas, tas satur citrātu, un dažas baktērijas tā klātbūtnē var nepieaugt. No otras puses, ja asinis nāk no pacientiem, kuri lieto antibiotikas, uzņēmīgo baktēriju augšanu var kavēt.

Un, ja asinis ir no diabēta slimnieka, glikozes pārpalikums traucē pareizu hemolīzes modeļa attīstību.

Pamata agara veida izvēle

Bāzes agars, ko izmanto asins agara pagatavošanai, var būt ļoti plašs. Starp tiem ir: barības vielu agars, smadzeņu sirds infūzijas agars, trippticāzes sojas agars, Müellera Hintona agars, Thayer Martin agars, Kolumbijas agars, Brucella agars, Campylobacter agars utt.

Asins agara lietojumi pēc bāzes barotnes, ko izmanto tā pagatavošanai

Uzturvielu agars

Šī bāze tiek izmantota vismazāk, jo tajā galvenokārt augs nevajadzīgas baktērijas, piemēram, zarnu trakta baktērijas, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp. Nav ieteicams izolēt Streptococcus.

Smadzeņu sirds infūzijas agars (BHI)

Tas ir viens no visplašāk izmantotajiem kā asins agara pamats, jo satur nepieciešamās barības vielas vairumam baktēriju, tai skaitā Streptococcus sp un citām prasīgām baktērijām, augšanai. Lai gan nav pareizi novērot hemolīzes modeļus.

Ar šo bāzi parasti izmanto jēra asinis.

Var sagatavot arī asiņu agara variantus, kuriem pievieno citus savienojumus, lai izolētu noteiktus mikroorganismus. Piemēram, Francisella tularensis izolēšanai var izmantot smadzeņu sirds infūzijas agaru, kas papildināts ar truša asinīm, cistīnu un glikozi.

Kamēr cistīna tellurīts ir noderīgs Corynebacterium diphteriae izolēšanai. Var izmantot cilvēku vai jēra asinis.

Ar pirmo beta-hemolīzi tiks uzskatīts par šauru halo, savukārt ar otro - halo būs daudz plašāks.

Tāpat šo bāzi kopā ar bacitracīnu, kukurūzas cieti, zirgu asinīm un citiem bagātināšanas papildinājumiem (IsoVitaleX) izmanto Haemophilus sp ģints izolēšanai no elpceļu paraugiem.

Turklāt, ja tiek pievienota antibiotiku hloramfenikola - gentamicīna vai penicilīna - streptomicīna kombinācija ar zirga asinīm, tas ir ideāli piemērots patogēnu sēņu izolēšanai pat ar lielāku ražu nekā Sabouraud glikozes agars. Tas ir īpaši noderīgi Histoplasma capsulatum izolācijā.

Trypticase sojas agars

Šī bāze ir visvairāk ieteicama, lai labāk novērotu hemolīzes modeli un veiktu tādus diagnostiskos testus kā optokvina taksoni un bacitracīns. To regulāri lieto klasiskajā asiņu agarā.

Izmantojot šo bāzi, jūs varat arī pagatavot speciālo asiņu agaru Corynebacterium diphteriae ar cistīna tellurīta un jēra asinīm .

Tāpat šī agara kombinācija ar jēra asinīm, kā arī kanamicīns-vankomicīns ir ideāli piemērota anaerobu, īpaši Bacteroides sp.

Müellera Hintona agars

Šī ar asinīm papildinātā bāze tiek izmantota, lai veiktu smalku mikroorganismu, piemēram, Streptococcus sp.

Tas ir noderīgs arī tādu baktēriju kā Legionella pneumophila izolēšanai.

Thayer Martins Agars

Šī barotne ir ideāli piemērota kā bāze asins agaram, ja ir aizdomas par Neisseria ģintīm, īpaši Neisseria meningitidis, jo N. gonorrhoeae neauga uz asins agara.

To lieto arī, lai pārbaudītu jutību pret Neisseria meningitidis.

Kolumbijas agars

Šī bāze ir lieliska Helicobacter pylori kuņģa biopsijas paraugu sēšanai.

Barotni sagatavo, pievienojot 7% ​​jēra asinis, kas defibrētas ar antibiotikām (vankomicīnu, trimetoprimu, amfotericīnu B un cefsulodīnu), lai ierobežotu citu baktēriju augšanu, kas var būt.

Tā pati bāze, kas papildināta ar cilvēka vai jēra asinīm, nalidiksīnskābi un kolistīnu, ir noderīga Gardnerella vaginalis izolēšanai. Tas ir arī ideāls, lai novērtētu tā paša mikroorganisma pretmikrobu jutību pret antibiotikām.

Turklāt to izmanto asins agara sagatavošanai anaerobu kultūrai, pievienojot aminoglikozīdus un vankomicīnu.

Šī bāze ļauj pareizi novērot hemolīzes modeļus.

Brucelas agars

Šī barotne, ko izmanto par asiņu agara bāzi, kā arī ar K vitamīna pievienošanu, ir ideāli piemērota anaerobo baktēriju audzēšanai. Šajā gadījumā ieteicams lietot jēra asinis.

Kampilobaktēriju agars

Campylobacter agars, kas papildināts ar 5% aitu asiņu un 5 antibiotikām (cefalotīns, amfotericīns B, trimetoprims, polimiksīns B un vankomicīns), ir barotne, ko izmanto Campylobacter jejuni izolēšanai izkārnījumu paraugos.

Sagatavošana

Katrā tirdzniecības namā ir norādījumi konteinera aizmugurē sagatavot litru barotnes. Atkarībā no izvēlētā bāzes agara var veikt atbilstošus aprēķinus, lai sagatavotu vēlamo daudzumu.

Nosver un izšķīdina

Pamata agars ir dehidrēts (pulveris), tāpēc tas jāizšķīdina destilētā ūdenī, kas noregulēts līdz pH 7,3.

Ar izvēlētā bāzes agara norādīto daudzumu nosver un attiecīgajā ūdens daudzumā izšķīdina kolbā, pēc tam karsē uz mērenas uguns un ar rotācijas kustībām sajauc, līdz viss pulveris ir izšķīdis.

Sterilizējiet

Pēc izšķīdināšanas 20 minūtes sterilizējiet autoklāvā 121 ° C temperatūrā.

Asins agregāts

Izkāpjot no autoklāva, kolbai ļauj atdzist, līdz temperatūra svārstās no 40 līdz 50 ° C; Tā ir temperatūra, kuru atbalsta cilvēka āda, un tajā pašā laikā agars vēl nav sacietējis.

Lai to izdarītu, flakonu pieskaras ar roku, un, ja karstums ir pieļaujams, tā ir ideāla temperatūra, lai pievienotu atbilstošu daudzumu defibrētu asiņu (50 ml uz katru litru agara). Viegli samaisiet, lai homogenizētos.

Asins agregācijas pārejai ir izšķiroša nozīme, jo, ja tas tiek veikts, kad barotne ir ļoti karsta, sarkanās asins šūnas sadalīsies un barotne netiks izmantota hemolīzes novēršanai.

Ja tas tiek pievienots pārāk auksts, tas salīp, un barotnes virsma nebūs gluda, lai būtu iespējama pareiza vērtēšana.

Ielejiet Petri traukos

Pasniedziet sterilos Petri traukos tūlīt pēc asiņu homogenizācijas. Katrā Petri traukā ielej apmēram 20 ml. Šī procedūra tiek veikta laminārās plūsmas pārsegā vai netālu no degļa.

Pasniedzot asins agaru Petri traukos, uz plāksnes virsmas nedrīkst palikt gaisa burbuļi. Ja tas notiek, Bunsena degļa liesma tiek ātri nodota virs plāksnes, lai tos novērstu.

Plātnēm ļauj sacietēt un līdz lietošanai uzglabā ledusskapī (2–8 ° C). Pirms asiņu agara plātņu izmantošanas tām jābūt atlaidinātām (ļauj tām sasniegt istabas temperatūru), lai tās varētu sēt.

Sagatavotās plāksnes ilgst apmēram 1 nedēļu.

Atsauces

1. Bayona M. Mikrobioloģiskie apstākļi Helicobacter pylori kultūrai. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94–99
2. Garsija P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktiskā klīniskā mikrobioloģija. Kadisas Universitāte, 2. izdevums. UCA publikāciju dienests.
3. "Asins agars." Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2018. gada 10. decembris, 14:55 UTC. 2018. gada 27. decembris, 01:49 lv.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Argentīna. Redakcija Panamericana SA
5. CEDIVET laboratorijas veterinārās diagnostikas centrs. Gvatemala. Pieejams vietnē: trensa.com.
6. Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. (5. izd.). Argentīna, Panamericana SA redakcija