Mannīts sāls agars vai MANITOL sāls ir ciets vidēja selektīvs un diferenciālo kultūra. To Chapman izveidoja patogēno grampozitīvo cocci, īpaši Staphylococcus aureus, izolēšanai.
Tomēr ir lietderīgi arī citu sugu starpā izdalīt Staphylococus epidermidis, kas dažkārt var būt kā oportūnistisks patogēns, un Staphylococcus saprophyticus, kas ir atzīts urīna patogēns.
A. Fiola ar sagatavotu sāļo mannīta agara barotni. B. Sālītas mannīta agara plāksnes, kas iesētas ar fermentējošiem un nefermentējošiem mannīta baktēriju celmiem. Avots: A un B: Autora uzņemti fotoattēli MSc. Marielsa Gil.
Daži Enterococcus spēj augt šajā barotnē, kā arī daži grampozitīvi sporas veidojošie stieņi.
Šī barotne ir ļoti noderīga klīnisko paraugu analīzē, bet to izmanto arī pārtikas mikrobioloģiskos pētījumos un rūpniecisko produktu, piemēram, kosmētikas, zāļu, kvalitātes kontrolē.
Sāļais mannīta agars sastāv no liellopu gaļas, tripteina, mannīta, nātrija hlorīda, fenola sarkanā un agara ekstraktiem un peptoniem.
Pamats
Mannīta agars ir selektīvs, pateicoties tā augstajai sāls koncentrācijai. Sāļums darbojas kā inhibējoša viela un novērš gramnegatīvo baktēriju augšanu.
Tas ir arī atšķirīgs ogļhidrātu mannīta un fenola sarkanā pH indikatora klātbūtnes dēļ. No tā baktērijas, kas spēj raudzēt mannītu, rada skābes, paskābinot barotni, pārvēršot kolonijas un barotni dzeltenā krāsā.
No otras puses, kolonijās, kas neraudzē mannītu, barotnē aug barības vielas, ko nodrošina gaļas ekstrakti un peptoni un tripteins. No turienes baktērijas ekstrahē oglekli, slāpekli, vitamīnus un minerālvielas, kas nepieciešami to augšanai.
Kolonijas šajā gadījumā var būt vājas vai spēcīgi rozā, un barotne paliek tādā pašā krāsā vai mainās uz fuksiju.
Agars ir viela, kas nodrošina barotnes konsistenci.
Sagatavošana
Lai pagatavotu litru sāļa mannīta agara, ar kolbu nosver 111 g dehidrētās barotnes no vēlamā tirdzniecības uzņēmuma un izšķīdina 1000 ml destilēta ūdens.
Karsē ar biežu barotnes maisīšanu, lai uzlabotu izšķīšanas procesu. Vāra minūti.
Kolbu 15 minūtes ievieto autoklāvā 121 ° C temperatūrā.
Pēc laika flakonu noņem no autoklāva, ļauj tam atpūsties un pasniedz no 15 līdz 20 ml uz steriliem Petri trauciņiem, kad temperatūra ir aptuveni 50 līdz 55 ° C.
Atļauts sacietēt, apgrieztā secībā pasūtīt plāksterēs un līdz lietošanai turēt ledusskapī. Pirms parauga iesēšanas pagaidiet, kamēr plate sasniedz istabas temperatūru.
Plātnes sēj ar slīpēšanu vai ar sējmašīnu ar drigalski lāpstiņu. Sagatavotās barotnes galīgajam pH jābūt 7,4 ± 0,2
Dehidrētās barotnes krāsa ir gaiši bēša, un sagatavotās barotnes krāsa ir oranži sarkana.
Lietojumprogrammas
Pateicoties augstajai selektivitātei, šī barotne ir ideāli piemērota paraugu sēšanai ar jauktu floru, kurā tiek meklēts Staphylococus aureus kā šīs ģints galvenais patogēns.
Šajā nozīmē viens no biežākajiem lietojumiem ir rīkles eksudātu un deguna izdalījumu mikrobioloģiskajā analīzē, īpaši, lai noteiktu asimptomātiskus S. aureus nesējus.
Dažas valstis ir ieviesušas šo analīzi kā obligātu prasību cilvēkiem, kuri vēlas strādāt par pārtikas pārdevējiem.
Šī kontrole neļauj pieņemt darbā cilvēkus, kas ir S. aureus nesēji, tādējādi izvairoties no masveida saindēšanās ar pārtiku, pateicoties stafilokoku enterotoksīniem piesārņotas pārtikas patēriņam.
To cita starpā var iekļaut arī brūču infekciju, asins kultūru, CSF, bronhoalveolāro skalošanu.
Sālīts mannīta agars ir noderīgs koloniju atkārtotai izolēšanai no urīna kultūrām no CLED agara vai asins agara, kura gramos klasteros ir atklāti grampozitīvi kokiki.
Tas ir derīgs arī pārtikas, dzeramā ūdens, augsnes mikrobioloģiskajā analīzē, cita starpā.
QA
Kad ir sagatavota šķīvju partija ar sāļo mannīta agaru, ieteicams veikt kvalitātes kontroli. Kontroles celmus sēj, lai parādītu, vai ir augšana vai nav.
Kā pozitīvu kontroli var izmantot zināmos Staphylococcus aureus celmus. Tam vajadzētu augt apmierinoši, attīstoties dzeltenām kolonijām, un barotnei ir arī tāda pati krāsa.
Tāpat ir ērti iekļaut zināmo Staphylococcus epidermidis celmu. Tam vajadzētu augt pietiekami attīstoties rozā kolonijām, un barotne paliek tādā pašā krāsā vai kļūst tumšāka līdz spēcīgākai rozā krāsai.
Kā negatīva kontrole tiek izmantoti celmi, kuriem šajā barotnē nevajadzētu augt. Piemēram, var audzēt zināmu Escherichia coli vai Klebsiella pneumoniae celmu. Paredzētais rezultāts ir pilnīga kavēšana, tas ir, bez izaugsmes.
Bez tam jāinkubē neinokulēta plāksne. Tajā nedrīkst būt ne augšana, ne krāsas maiņa.
Ir svarīgi, lai plāksne netiktu izmantota, ja cita starpā ir bojāšanās pazīmes, piemēram, piesārņojums, dehidratācija, krāsas maiņa.
Noslēguma domas
Izmantojot sāļo mannīta agara barotni, jāņem vērā daži svarīgi aspekti:
- Dzelteno koloniju augšanas iegūšana neliecina, ka tā ir Staphylococcus aureus. Jāatceras, ka daži Enterococcus celmi spēj augt šajā barotnē un raudzēt mannītu, kā arī daži sporas veidojoši grampozitīvi stieņi.
Tāpēc ir svarīgi veikt gramu kolonijai un veikt katalāzes pārbaudi.
- No otras puses, ir jāņem vērā, ka mannītu var raudzēt arī citas Staphylococcus sugas, izņemot aureus. Tāpēc ir svarīgi subkultūru kolonizēt barības vielu buljonā, lai ņemtu no turienes un veiktu koagulāzes testu.
Starp Staphylococcus sugām, kas ir klīniski nozīmīgas cilvēkiem, kuri raudzē mannītu, ir: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, among others.
Citi var izraisīt mainīgu reakciju, tas ir, dažreiz pozitīvu un dažreiz negatīvu. Daži no tiem ir S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius.
-Koagulāzes testa veikšanai nav ieteicams kolonijas ņemt tieši no mannīta agara, jo augsta sāls koncentrācija barotnē var ietekmēt rezultātu.
-Visbeidzot, ieteicams inkubēt plāksnes, kas iesētas ar sāļo mannītu, līdz 48 stundām, jo daži S. aureus celmi var lēnām raudzēt mannītu, lai gan tas nav ļoti bieži.
Atsauces
- Britannia laboratorijas. Sāļš mannīta agars. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
- "Sāļš mannīta agars". Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2018. gada 31. oktobris, 19:08 UTC. 2019. gada 17. janvāris, plkst. 20:55, pieejams vietnē: es.wikipedia.org.
- Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. (5. izd.). Argentīna, Panamericana SA redakcija
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Argentīna. Redakcija Panamericana SA
- BD laboratorijas. BD mannīta sāls agars. 2013.Pieejams vietnē: bd.com.