- Pamats
- Visbiežāk izmantotās Sabouraud dekstrozes agara kombinācijas ar antibiotikām
- Sagatavošana
- Sabouraud dekstrozes agars
- Sabouraud dekstrozes agars (Emmons modifikācija)
- Sabouraud dekstrozes agars (Emmons modifikācija) ar hloramfenikolu
- Hloramfenikola rezerves risinājums
- Sabouraud Emmons dekstrozes agars ar cikloheksimīdu
- Cikloheksimīda izejas risinājums
- Sabouraud dekstrozes agars (Emmons) ar hloramfenikolu un cikloheksimīdu
- Citas antibiotikas, kuras var pievienot
- Īpaši apsvērumi
- QA
- Lietojumprogrammas
- Primārā kultūra
- Sporulācija
- Saglabāšana
- Mikrokultūras
- Cilvēka mikoloģijā
- Dzīvnieku mikoloģija
- Vides mikoloģija
- Rūpnieciskā mikoloģija
- Augu mikoloģija
- Atsauces
Agars Saburo , kas pazīstams arī kā Saburo dekstrozes agars, ir ciets vide, it īpaši bagātināts izolēšanai un attīstības sēnīšu, piemēram, rauga un pelējumu un dermatofītu.
Tāpēc šai barotnei nevar trūkt mikrobioloģijas laboratorijas, lai pētītu patogēno vai oportūnistisko sēnīšu klātbūtni no klīniskiem vai neklīniskiem paraugiem. Tāpat tas ir ideāli piemērots tādu šķiedru baktēriju kā Streptomyces un Nocardias augšanai. Tās pielietojums ir ļoti plašs, jo to var izmantot cilvēku, dzīvnieku, augu un rūpniecības mikoloģijā.
A. Nepieciešams Sabourauda agars. B. Sabourauda agars, kas iesēts ar raugu. Avots: Autores uzņemti fotoattēli MSc. Marielsa gil
Šo barotni 1896. gadā izveidoja ievērojamais dermatologs Raimonds Sabourauds, kurš kļuva par visā pasaulē atzītu speciālistu galvas ādas traucējumos, ko galvenokārt izraisa dermatofīti.
Tā izveidošana bija tik svarīga, ka kopš tā laika tiek izmantota un saglabājas mūsdienās, kaut arī ar dažām modifikācijām.
Lai arī baktērija ir īpaša sēnītēm, šajā barotnē var augt, tāpēc paraugiem ar jauktu floru jāpievieno antibiotikas to sagatavošanā, lai kavētu baktēriju floras, kas var būt, klātbūtni.
Antibiotika ir jāizvēlas uzmanīgi un ņemot vērā atgūstamo sēnīšu veidu, jo dažu vielu klātbūtnē tās tiek kavētas.
Pamats
Sabouraud dekstrozes agars ir barotne, kuras sākotnējais sastāvs ir vāji selektīvs, jo tā skābais pH ir 5,6 ± 0,2, tomēr baktērijas joprojām var attīstīties, galvenokārt ilgstošās inkubācijās.
Barotne satur kazeīna peptonu un dzīvnieku audu aizkuņģa dziedzera sagremojumu, kas nodrošina oglekļa un slāpekļa avotu mikroorganismu augšanai.
Tas satur arī augstu glikozes koncentrāciju, kas darbojas kā enerģijas avots, veicinot sēnīšu augšanu virs baktērijām. Tas viss sajaukts ar agara agaru, sastāvdaļu, kas tai piešķir pareizo konsistenci.
No otras puses, Sabouraud dekstrozes agars var būt selektīvs, ja tam pievieno antibiotikas.
Ar antibiotikām tas ir īpaši noderīgi brūču, atvērtu čūlu vai jebkura tāda parauga paraugos, kurā ir aizdomas par lielu baktēriju piesārņojumu.
Visbiežāk izmantotās Sabouraud dekstrozes agara kombinācijas ar antibiotikām
-Saburauda agars ar hloramfenikolu: ideāli piemērots raugu un pavedienu sēnīšu atjaunošanai.
- Sabourauda agars ar gentamicīnu un hloramfenikolu: šajā barotnē aug gandrīz visas pavedienu sēnes un raugi, un tas kavē lielu baktēriju daudzumu, ieskaitot Enterobacteriaceae, Pseudomonas un Staphylococcus.
- Sabouraud agars ar cikloheksimīdu: tas ir īpaši noderīgs paraugiem no ādas vai elpošanas ceļiem, ja vien aizdomas ir dimorfiskas sēnes.
Cikloheksimīds jālieto piesardzīgi; Lai arī to lieto, lai kavētu patogēnu vai vides sēņu un raugu augšanu, kas paraugā var būt kā piesārņotāji, tas kavē arī dažu sēnīšu, piemēram, Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp un citu oportūnistisko sēnīšu, augšanu.
- Sabouraud agars ar hloramfenikolu un cikloheksimīdu: to galvenokārt izmanto dermatofītu un dimorfisko sēnīšu izolēšanai. Tam ir tāds trūkums, ka tas nomāc dažas oportūnistiskas sēnes, piemēram, Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes vai C. neoformans.
- Sabouraud agars ar hloramfenikolu, streptomicīnu, penicilīnu G un cikloheksimīdu: tas ir ideāli piemērots paraugiem, kas ir ārkārtīgi piesārņoti ar baktērijām un saprofītiskām sēnītēm, bet tā trūkums ir arī tas, ka papildus iepriekš minētajām oportūnistiskajām sēnītēm tas kavē Actinomyces un Nocardias augšanu.
Sagatavošana
Ja jums ir sastāvdaļas atsevišķi, to var pagatavot šādi:
Sabouraud dekstrozes agars
Svērt:
- 40 gr dekstrozes
- 10 g peptona
- 15 gr agara-agara
- Izmēra 1000 ml destilēta ūdens
Visas sastāvdaļas sajauc, pH noregulē līdz 5,6. Šķīdinātās vielas izšķīdina, vārot, 20 ml barotnes izplata caurulēs ar izmēru 25 x 150 mm bez malas un vēlams ar kokvilnas vāciņu.
Caurules ar kokvilnas vāciņu. Avots: Autores uzņemts foto MSc. Marielsa gil
Atkarībā no pieejamības var izmantot arī citus cauruļu izmērus.
Tos autoklāvā 10 minūtes spiediena atmosfērā (121 ° C). Nevajadzētu pārsniegt autoklāvēšanas laiku. Izkāpjot no autoklāva, caurules ar balsta palīdzību tiek slīpi, līdz tās sacietē flautas knābā.
Vēl viens veids ir izšķīdināt sastāvdaļas, karsējot, līdz tā vārās. Autoklāvā 10 minūtes tajā pašā flakonā un pēc tam izdalot 20 ml Petri traukos.
Ja jums ir Sabouraud dekstrozes agara barotne, kas jau satur visas sastāvdaļas, sveriet komercuzņēmuma noteikto daudzumu uz vienu litru ūdens. Pārējās darbības ir tādas pašas kā aprakstītas iepriekš.
Sabouraud dekstrozes agars (Emmons modifikācija)
Svērt:
- 20 gr dekstrozes
- 10 g peptona
- 17 gr agara-agara
- Izmēra 1000 ml destilēta ūdens
Visas sastāvdaļas sajauc, pH tiek noregulēts līdz 6,9. Rīkojieties tāpat kā iepriekšējā gadījumā.
Ir komerciālas mājas, kas piedāvā barotni ar visām sastāvdaļām. Šajā gadījumā nosver un sagatavo, kā aprakstīts uz ieliktņa.
Sabouraud dekstrozes agars (Emmons modifikācija) ar hloramfenikolu
Hloramfenikola rezerves risinājums
- Nosver 500 mg hloramfenikola bāzes
- Izmēra 100 ml 95% etanola
- sajauc
Sabouraud dekstrozes agara barotni (Emmons) sagatavo, kā aprakstīts iepriekš, un pirms autoklāvēšanas katram barotnes litram pievieno 10 ml hloramfenikola rezerves šķīduma.
Sabouraud Emmons dekstrozes agars ar cikloheksimīdu
Cikloheksimīda izejas risinājums
- Nosver 5 gr cikloheksimīda
- Izmēra 100 ml acetona
- sajauc
Sabouraud dekstrozes agara barotni (Emmons) sagatavo, kā jau aprakstīts, un pirms katra autoklāvēšanas katram barotnes litram pievieno 10 ml cikloheksimīda rezerves šķīduma.
Sabouraud dekstrozes agars (Emmons) ar hloramfenikolu un cikloheksimīdu
Sabouraud dekstrozes agara barotni (Emmons) sagatavo, kā aprakstīts iepriekš, un pirms katra autoklāvēšanas katram barotnes litram pievieno 10 ml hloramfenikola rezerves šķīduma un 10 ml cikloheksimīda rezerves šķīduma.
Citas antibiotikas, kuras var pievienot
No 20 000 līdz 60 000 penicilīna vienību uz barotnes litru.
30 mg streptomicīna uz litru barotnes.
Abas ir jāiestrādā pēc barotnes autoklāvēšanas, nedaudz atdzesētas (50–55 ° C).
0,04 g neomicīna uz litru barotnes.
0,04 g gentamicīna uz barotnes litru.
Īpaši apsvērumi
Drošības labad ir vēlams sēt Sabouraud dekstrozes agaru ķīļveida mēģenēs (slīpi flautas knābā), nevis Petri trauciņos, lai izvairītos no sporu izkliedes un ieelpošanas.
Ir svarīgi, lai Sabouraud agara mēģenes būtu pārklātas ar kokvilnu, nevis ar skrūvējamu vāciņu, jo ir pierādīts, ka daļēji anaerobi apstākļi kavē sporu veidošanos dažos celmos, piemēram, Coccidioides immitis. Arī lielākā daļa sēnīšu ir aeroba.
Ja izmantojat skrūvējamo vāciņu, neaizveriet hermētiski.
QA
Sagatavotajiem materiāliem jāveic kvalitātes kontrole, lai pārbaudītu to pareizu darbību. Šim nolūkam tiek sēti atsevišķi kontroles celmi.
Sabouraud dekstrozes agaram ar hloramfenikolu var izmantot Candida albicans ATCC celmus, kuriem jābūt ar izcilu augšanu. Citu plāksni inokulē ar Escherichia coli celmiem, kas ir pilnībā jānovērš.
Inkubēta plāksne tiek arī inkubēta, kurā nedrīkstētu augt mikroorganismi.
Sabouraud dekstrozes agaram ar hloramfenikolu un cikloheksimīdu var izmantot Trichophyton mentagrophytes celmus, un tiem vajadzētu labi attīstīties. Citu plāksni inokulē ar Aspergillus flavus celmu, kurā jābūt mazam vai vispār nepieaugtam. Bez tam inokulēta plāksne tiek inkubēta, lai pierādītu tās sterilitāti.
Sabouraud dekstrozes agaram ar cikloheksimīdu izmanto Candida albicans, Trichophyton rubrum vai Microsporum canis celmus, kuriem jāuzrāda laba augšana.
Tāpat ir iekļauts Aspergillus flavus celms, kam ir maza augšana vai tā vispār nav. Visbeidzot inkubējiet neinokulētu plāksni, lai kontrolētu sterilitāti.
Lietojumprogrammas
Primārā kultūra
Klasiskais Sabouraud dekstrozes agars satur 4 gramus dekstrozes un ir lielisks kā primārā izolācijas barotne, jo tas parāda katras sēnītes raksturīgo morfoloģiju.
Tas ir arī lielisks pigmenta ražošanas demonstrēšanai. Tomēr tas nav labākais sporulācijas novērošanas līdzeklis.
Nav ieteicams arī audzēt Blastomyces dermatitidis, ko kavē lielā esošās glikozes koncentrācija.
No otras puses, kultivēšanā jāņem vērā daži apsvērumi.
Dažas sēnes vislabāk aug istabas temperatūrā, piemēram, pelējuma, citas - 37 ° C, piemēram, dažas rauga, un citas var augt abās temperatūrās (dimorfās sēnes).
Šī iemesla dēļ vienam un tam pašam paraugam dažreiz ir jāizmanto vairākas Sabouraud agara plāksnes, jo bieži vien tiek veikta atkārtota sēšana, lai vienu plāksni inkubētu istabas temperatūrā, bet otru - 37 ° C.
Piemēram, Sporothrix schenckii sēj divās plāksnēs; vienu inkubē istabas temperatūrā, lai iegūtu pelējuma fāzi, un otru inkubē 37 ° C, lai iegūtu rauga fāzi, bet pēdējā vidē ir jāpievieno 5% asiņu.
Citos gadījumos, piemēram, micetomas paraugos, sēj divas Sabouraud agara plāksnes, vienu ar hloramfenikolu un otru ar cikloheksimīdu. Pirmais ļaus augt sēnīšu izcelsmes mikotomu izraisītājiem (Eumycetoma), bet otrais - baktēriju izcelsmes mycetoma izraisītājiem, piemēram, aktinomycetomas.
Sporulācija
Emmons Modified Sabouraud dekstrozes agars satur 2 gramus dekstrozes un to izmanto ne tikai izolēšanai, bet arī sēņu sporēšanai un saglabāšanai.
Šajā barotnē var atgūt Blastomyces dermatitidis celmus.
Saglabāšana
Lai saglabātu sēņu kultūras, tās var uzglabāt ledusskapī (2–8 ° C). Saglabāšanas laiks var mainīties no 2 līdz 8 nedēļām. Pēc šī laika viņiem jābūt subkulturāliem, lai atkārtotu procesu.
Dažas sēnes vislabāk uztur istabas temperatūrā, piemēram, Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum un Microsporum audounii.
Celma uzturēšanu var pagarināt, lai izvairītos no pleomorfisma, ja dekstrozi pilnībā noņem no agara un ja agara daudzumu barotnē samazina, lai izvairītos no sausuma.
Mikrokultūras
Dažu pavedienu sēnīšu identificēšanai ir jāveic mikrokultūras, izmantojot Sabouraud agaru vai citus īpašus līdzekļus, lai novērotu seksuālās un aseksuālās reprodukcijas struktūras.
Cilvēka mikoloģijā
To galvenokārt izmanto sēnīšu slimību diagnosticēšanai, īpaši to, kas ietekmē ādu un tās stiprinājumus (matus un nagus).
Paraugi var būt izdalījumi, eksudāti, āda, mati, nagi, krēpas, CSF vai urīns. Parasti izolēti patogēni ir dermatofīti, sēnītes, kas izraisa zemādas un sistēmiskas mikozes.
Dzīvnieku mikoloģija
Dzīvniekus bieži ietekmē sēnīšu infekcijas, tāpēc Sabouraud agars ir tikpat noderīgs dzīvnieku mikoloģijā kā tas ir cilvēkiem.
Piemēram, dermatofīti bieži var ietekmēt dzīvniekus. Tas ir gadījumā ar Microsporum canis var activum, kas bieži inficē suņus, kaķus, zirgus, cūkas un pērtiķus. Tāpat Microsporum gypseum inficē suņus, kaķus un mājlopus.
Putni, piemēram, cāļi, gaiļi un vistas, ir skarti ar Microsporum gallinae.
Arī citas sēnes, piemēram, Zymonema farciminosum, ir dzīvnieku slimības cēlonis, galvenokārt zirgiem, mūļiem un ēzeļiem, izraisot ievērojamu iekaisumu limfātiskajos traukos.
Sporothrix schenkii un Histoplasma capsulatum ietekmē mājas dzīvniekus un cilvēkus.
Vides mikoloģija
Daudzas patogēnas vai oportūnistiskas sēnes jebkurā laikā var koncentrēties noteiktā vidē, īpaši klīniku un slimnīcu operāciju zālēs un intensīvās terapijas nodaļās. Tāpēc ir nepieciešams tos kontrolēt.
Citas neaizsargātas telpas ir bibliotēkas un vecās ēkas, kuras var ietekmēt vides sēņu koncentrācija.
Vides pētījumos sēņu izolēšanai izmanto Sabouraud dekstrozes agaru.
Rūpnieciskā mikoloģija
Sabouraud dekstrozes agara nevar trūkt, lai pētītu piesārņojošās sēnes, cita starpā, kosmētikas, pārtikas, dzērienu, ādas, tekstilizstrādājumu ražošanā.
Augu mikoloģija
Augus cieš arī no sēnīšu izraisītām slimībām, kas ietekmē dažādas augu daļas, kas var pat beigt ražu, radot lielus zaudējumus lauksaimniecībā.
Atsauces
- Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mikožu mikrobioloģiskā diagnostika un pretsēnīšu jutīguma pētījumi. Spānijas Infekcijas slimību un klīniskās mikrobioloģijas biedrības ieteikumi. Pieejams vietnē coesant-seimc.org
- ValteK laboratorija. (2009). Sabouraud dekstrozes agars ar cikloheksimīdu. Pieejams vietnē andinamedica.com.
- Navarro O. (2013). Veterinārā mikoloģija. Nacionālā agrārā universitāte. Nikaragva.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Argentīna. Redakcija Panamericana SA
- Casas-Rincón G. Vispārējā mikoloģija. 1994. Venecuēlas Centrālās universitātes 2. izdevums, bibliotēkas izdevumi. Venecuēlas Karakasa.