KARTUPEĻU DEKSTROZES AGARS: PAMATOJUMS, SAGATAVOŠANA UN LIETOŠANA - BIOLOĢIJA - 2025

Kartupeļu dekstrozes agara ir vidēja, ciets non - selektīvs uzturvielu kultūra. Tajā var augt baktēriju un sēnīšu sugas, taču to lietošana ir īpaši paredzēta pavedienveida sēnīšu un raugu izolēšanai. Tas ir arī pazīstams kā PDA barotne angļu valodas izteicienam Potato Dextrose Agar.

Tas ir īpaši noderīgi fitopatogēno sēņu, tas ir, tādu, kas ietekmē augus, izolēšanai. Lai sētu paraugus no inficētiem dārzeņiem, var izmantot citus līdzekļus, piemēram, Sabouraud agaru vai malta-agaru, tomēr ikdienas lietošanai priekšroka dodama kartupeļu dekstrozes agaram, lai iegūtu lielāku sporulāciju.

Aspergillus niger un Sinemas attiecīgi kartupeļu dekstrozes agarā. Avots: Alextrevelian 006 angļu Vikipēdijā / Joselrojas

To izmanto arī sēnīšu koloniju skaitīšanai kosmētikas, farmaceitisko produktu un dažu piena produktu paraugos. Tāpat tas ir piemērots, lai sētu ādas atgriezumus, meklējot dermatofītus, kuri šajā barotnē aug ļoti labi, veidojot raksturīgos pigmentus.

Kartupeļu dekstrozes barotne ir ļoti vienkārša un viegli pagatavojama barotne laboratorijā. Kā norāda nosaukums, tas satur kartupeļu, dekstrozes un agara agara infūziju. Lai novērstu baktēriju augšanu un palielinātu selektivitāti pret sēnīšu sugām, var pievienot arī inhibējošas vielas.

Pamats

Kartupeļu dekstrozes agars ir barotne, kas nodrošina barības elementus, kas nepieciešami pavedienu sēnīšu un raugu attīstībai.

Kartupeļu infūzijas un glikozes kombinācija nodrošina perfektu enerģijas avotu apmierinošai sēnīšu augšanai. Kamēr agars ir tas, kurš nodrošina barotnes konsistenci.

Barotne vien neaizkavē baktēriju augšanu, tāpēc tā ir neselektīva barotne. Lai tas būtu selektīvs, tam jāpievieno inhibējošas vielas, piemēram, vīnskābe vai antibiotikas.

Sagatavošana

- Kartupeļu dekstrozes agara mājās gatavots (nekomerciāls) sagatavošana

Petri ēdieni

To sagatavo šādi:

Pirmkārt, kartupeļus mazgā ļoti labi, noņemot tiem piederošo augsni. Tos sagriež plānās šķēlēs ar visu un čaumalu. Nosver 200 gramus kartupeļu un pusstundu vāra litrā destilēta ūdens.

Laika beigās visu maisījumu filtrē vai izkāš caur marli.

Iegūto šķidrumu piepilda ar destilētu ūdeni līdz vienam litram. Uzlējumam pievieno 20 g agara agara un 20 g dekstrozes, labi samaisa un autoklāvā 121 ° C temperatūrā ar 15 mārciņu spiedienu 15 minūtes.

Ļauj atdzist līdz 50 ° C un pasniedz sterilos Petri traukos. Sagatavotās plāksnes uzglabā ledusskapī.

Ķīļi

Var pagatavot arī kartupeļu dekstrozes agara ķīļus.

Šajā gadījumā pirms sterilizācijas autoklāvā 12 līdz 15 ml barotnes ievieto mēģenēs, vēlāk tās tiek autoklāvētas un atstājot tās atrodas uz īpašiem balstiem, līdz tā sacietē. Uzglabāt ledusskapī.

Barotnes pH līmenis ir 5,6 ± 0,2, tomēr dažās laboratorijās pievieno 10% vīnskābes, lai pazeminātu pH līdz 3,1 ± 0,1, lai kavētu baktēriju augšanu.

Šajā pašā nozīmē citas laboratorijas dod priekšroku antibiotiku pievienošanai, lai padarītu to selektīvu sēnīšu audzēšanai un novērstu baktēriju augšanu.

-Kartuālā kartupeļu dekstrozes agara pagatavošana

Nosver 39 g tirdzniecībā pieejamās dehidrētās barotnes un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens. Ļaujiet tai atpūsties 5 minūtes.

Maisījumu karsē, bieži maisot, līdz tas pilnībā izšķīst. Pēc tam to sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Var sagatavot plāksnes vai ķīļus. Rīkojieties, kā aprakstīts iepriekš.

PH līmenis ir 5,6 ± 0,2. Ja vēlams pH līmenis 3,1, pirms pasniegšanas plāksnēm jāpievieno 14 ml sterila 20% vīnskābes.

Neapstrādāta barotne ir smilškrāsas, un sagatavotā barotne ir gaiši dzintara ar nedaudz duļķainu vai opalescējošu izskatu.

Lietojumprogrammas

Augu paraugu sēšanas process kartupeļu dekstrozes agarā

-No krāsotām lapām

Lapas sagriež gabaliņos.

50 cm3 glāzē ar 50% spirta ievieto lapu gabaliņus (iekrāsotus un veselīgus gabaliņus), lai dezinficētu virsmu 20 līdz 30 sekundes. Izmetiet spirtu un pievienojiet 20% nātrija hipohlorītu 40 līdz 50 sekundes, ja tās ir plānas lapas, un palieliniet laiku līdz 80 sekundēm, ja tā ir miza un apaļkoki.

Izmetiet nātrija hipohlorītu un ar sterilām knaiblēm ņemiet dezinficētos gabalus un novietojiet tos uz barotnes virsmas (ne vairāk kā 10 gabalu). Iestatiet datumu un inkubējiet 20-30 ° C temperatūrā.

-Augļiem un bumbuļiem

Ja augļi ir gaļīgi, atveriet sēnītes skartos augļus un ņemiet gabaliņus ar sterilu skalpeli no slimajām un veselīgajām daļām un novietojiet tos uz agara virsmas.

Ja augļi ir citrusaugļi, piemēram, citrons vai apelsīns, tie jāatver un jāsēj sēklas.

Ja tiek ietekmēta augļa virsma un novērotas sporas, ideāli ir rīvēt rīvi uz šķīvja; Tas sastāv no sporu pieskāriena ar sterilizētu un atdzesētu “L” formas lāpstiņu un pēc tam zigzaga izveidošanu uz agara 2–3 reizes.

-Graudiem

Tos dezinficē, kā aprakstīts lapās, un vēlāk ievieto uz agara.

-Zariem un kātiem

Mizu nokasa, vēlāk veselās un slimās daļas gabaliņus ņem un sēj tieši uz agara.

Sētās plāksnes inkubē aerobos apstākļos 20-30 ° C temperatūrā 72 stundas.

Ādas, matu vai nagu masas paraugu sēšanas process kartupeļu dekstrozes agarā

Paraugu ņemšana jāveic ar skalpeļa asmeni Nr. 11, lai nogrieztu skartos matus, ādas zvīņas vai nagus, meklējot dermatofītus. Pirms parauga ņemšanas vietu dezinficē ar 70% spirta.

-Ādas paraugs

Zvīņainos bojājumos bojātā mala ir jānokasina, jo tur, visticamāk, atrodas sēne.

Eksudatīvu bojājumu gadījumā paraugu ņem ar sausu vai mitru tamponu. Nekavējoties sējiet uz kartupeļu dekstrozes agara vai Sabouraud agara. Izvairieties no transporta līdzekļiem.

Vēl viena paraugu ņemšanas metode ir Mariat un Adan Campos paklāju kvadrātveida tehnika. Šajā gadījumā skarto zonu 5 reizes berzē ar sterilās vilnas gabalu turpmākai audzēšanai.

Paraugu var ievietot tieši barotnē.

-Matu paraugs

Atkarībā no patoloģijas skarto daļu var nogriezt vai izraut. Ievieto paraugu barotnē.

-Kaulu paraugs

Konkrētu skartā nagu daļu var nokasīt vai sagriezt. Tas būs atkarīgs no savainojuma veida.

Pirms sēšanas paraugu sagriež 1 mm gabaliņos, lai palielinātu varbūtību, ka sēne saskaras ar barotni.

Identifikācijas procedūra

Uz šķīvja iegūtās kolonijas tiek izolētas mēģenēs, kurās ir kartupeļu dekstrozes agars, lai pēc tam veiktu koloniju makroskopisko pētījumu (izskats, krāsa, konsistence, attīstības pakāpe).

Mikroskopisko pētījumu (struktūru un to veidojumu novērošanu) var veikt ar mikrokultūru palīdzību vai tiešu novērošanu mikroskopā starp priekšmetstikliņu un priekšmetstikliņu.

Koloniju skaits

Šo barotni var izmantot arī, lai noteiktu sēnīšu un rauga daudzumu augu, pārtikas, kosmētikas vai zāļu paraugos. Šim nolūkam izmanto kartupeļu dekstrozes agaru, kas papildināts ar antibiotikām, piemēram: (hloramfenikolu, hlortetraciklīnu vai abus).

Ielej 1 ml parauga - vēlams atšķaidīta - sterilā un tukšā Petri traukā, tad izkausē kartupeļu dekstrozes agara kārtu un ļauj atdzist līdz 45 ° C. Ielejiet uz Petri trauka un pagrieziet līdz homogenizācijai. Ļaujiet tai atpūsties, līdz tā sacietē.

Inkubē aerobi 20-25 ° C (veidnes) vai 30-32 ° C (raugi) 5 līdz 7 dienas vai ilgāk, atkarībā no meklētā sēnītes veida un parauga veida. Inkubēšanai abos temperatūras diapazonos var izmantot divas plāksnes.

Sēnīšu koloniju skaitīšana pārtikas paraugā. Kartupeļu dekstrozes agars, kas papildināts ar antibiotikām. Avots: Pxhere.com foto / 777267

Sēnīšu celmu uzturēšana

Kartupeļu dekstrozes agaru var izmantot dzīvotspējīgu sēnīšu celmu uzturēšanai vairākus gadus.

Šim nolūkam sēne tiek audzēta uz kartupeļu dekstrozes agara ķīļiem un, kad sēne ir izaugusi, to pārklāj ar minerāleļļu. Eļļa jāterilizē autoklāvā 45 minūtes, un tās viskozitāte ir aptuveni 300 līdz 330 Saybolt. Eļļai jābūt 1 līdz 2 cm virs konusveida gala.

QA

No katras sagatavotās partijas ņem 1 vai 2 plāksnes un inkubē 48 stundas 25 ° C temperatūrā vai 96 stundas 20 ° C temperatūrā. Laba sterilitātes kontrole ir tāda, kurā koloniju attīstība netiek novērota.

Var izmantot arī zināmus vai sertificētus kontroles celmus, piemēram:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Visos gadījumos gaidāma laba izaugsme.

Atsauces

1. Britannia laboratorijas. Glikozes agara kartupelis. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
2. Neogēnu laboratorijas. Kartupeļu dekstrozes agars. Pieejams vietnē: foodsafety.neogen.com
3. Insumolab laboratorija. Kartupeļu dekstrozes agars. Pieejams: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
5. Casas-Rincón G. Vispārējā mikoloģija. 1994. Venecuēlas Centrālās universitātes 2. izdevums, bibliotēkas izdevumi. Venecuēlas Karakasa.
6. Aceituno M. Nacionālās ražošanas laboratorijas kompakto pulverveida acu ēnu mikrobioloģiskās kvalitātes novērtēšana saskaņā ar atsauces metodi Pharmacopea Usp 2005. Promocijas darbs kvalificējas farmācijas ķīmiķa nosaukumam. Gvatemalas San Karlosa universitāte.
7. Cuétara M. Virsmas paraugu apstrāde. Iberoamerikāņu žurnāls par mikoloģiju. 2007; lpp. 1.-12