AGARA KUNGS: PAMATS, SAGATAVOŠANA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Agars MRS ir selektīvs ciets vidēja kultūra izmanto izolācijai un uzskaitīšanai pienskābes baktēriju, it īpaši no ģints Lactobacillus. Šo agaru 1960. gadā izveidoja Cilvēks, Rogosa un Šarpe, uz kuriem bija tāds pats nosaukums, taču tā sarežģītības dēļ bieži tiek izmantots saīsinājums MRS.

Tas sastāv no proteozes peptona, gaļas ekstrakta, rauga ekstrakta, glikozes, sorbitāna monoleāta, dikālija fosfāta, nātrija acetāta, amonija citrāta, magnija sulfāta, mangāna sulfāta un agara.

Man Rogosa un Sharpe Agar (MRS) ar sēklām Lactobacillus sp. Avots: Foto, kuru autori ziedojuši šim rakstam: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Fotoattēls, kas uzņemts izmeklēšanas laikā ar nosaukumu: Pienskābes baktēriju un bifidobaktēriju ar probiotisko potenciālu novērtējums mātes pienā un zīdaiņa izkārnījumos .

Šis sastāvs ļauj pienācīgi attīstīt pienskābes baktērijas no klīniskajiem paraugiem, piemēram, fekālijām, izdalījumiem no maksts, perorāliem paraugiem un mātes pienam, kā arī piena un gaļas ēdieniem.

To parasti neizmanto klīniskajās laboratorijās, jo pienskābes baktērijas reti tiek iesaistītas slimības procesos. Tomēr pārtikas mikrobioloģijas jomā MRS agaru lieto biežāk.

No otras puses, šo barotni izmanto daži pētniecības centri, kuru mērķis ir pienskābes baktēriju izpēte.

Pamats

Cilvēka, Rogosa un Šarpe agaram ir diezgan sarežģīts sastāvs. Sadalot katra tā komponenta funkciju, var izskaidrot tā pamatu.

Proteozes peptons, gaļas ekstrakts, rauga ekstrakts un glikoze ir barības vielas, kas nodrošina oglekļa, slāpekļa, vitamīnu un minerālu avotu, kas nepieciešami baktēriju augšanai. Turklāt glikoze ir universāls enerģijas avots, ko izmanto lielākajā daļā barotnes.

No otras puses, lai veicinātu pienskābes baktēriju augšanu, ir nepieciešami kofaktori (katjoni), kas ir svarīgi Lactobacillus un saistīto baktēriju metabolismā; Šie savienojumi ir nātrija, magnija un mangāna sāļi.

Tāpat sorbitāna monoleāts vai polisorbāts 80 ir svarīgs taukskābju avots, jo tie tiek absorbēti kā barības vielas.

Turklāt sorbitāna monoleāts un amonija citrāts darbojas, kavējot pavadošās floras, īpaši gramnegatīvo baktēriju, attīstību, nodrošinot šī agara selektīvo raksturu.

Visbeidzot, agars-agars nodrošina to, ka barotne iegūst cietu konsistenci.

Ir arī citi Man Rogosa Sharpe agara varianti; viens no tiem ir papildināts ar cisteīnu (MRSc), kas ir ļoti noderīgs citu mikroorganismu starpā bifidobaktēriju izolēšanai. No otras puses, ir MRS barotne, kas papildināta ar neomicīnu, paromomicīnu, nalidiksīnskābi un litija hlorīdu, kas ir īpaši piemēroti selektīvai bifidobaktēriju uzskaitei piena produktos.

Sagatavošana

Nosver 68,25 gramus dehidrētas barotnes un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens. Ļaujiet nostāvēties 5 minūtes. Lai pilnībā izšķīdinātu, bieži maisot, pagrieziet uz siltuma avotu un vāriet 1 līdz 2 minūtes. Sterilizējiet 15 minūtes autoklāvā 121 ° C temperatūrā.

Atstājot autoklāvu, ļaujiet dažas minūtes nostāvēties un, kamēr tas vēl karsts, izdaliet sterilos Petri trauciņos.

Ļauj sacietēt un apgriezt plāksnes, pasūtīt plākšņu plauktos un atdzesēt līdz lietošanai. Pirms lietošanas ļaujiet plāksnēm sasilt līdz istabas temperatūrai.

Barotnes pH jābūt 6,4 ± 0,2. Dažās tirdzniecības mājās pH līmenis ir no 5,5 līdz 5,9.

Dehidrētā barotne ir smilškrāsas krāsā un sagatavota tumši dzintara krāsā.

Gan dehidrētā barotne, gan sagatavotās plāksnes jāuzglabā 2–8 ° C temperatūrā.

Lietojumprogrammas

MRS agara plāksnes var sēt ar virsmu (izsmelšana vai Drigalski lāpstiņa). To var sēt arī pēc dziļuma. Plāksnes inkubējamas 37 ° C temperatūrā mikroaerofilitātē (4% O ₂ un 5-10% CO ₂ ) 24 līdz 72 stundas.

Sēšanas metodi izvēlas atbilstoši izvirzītajam mērķim (izolēšanai vai skaitīšanai).

Koloniju raksturojums

Lactobacillus domājamās kolonijas iegūst bālganu krāsu un šai agarai ir gļotādas vai krēmveida izskats. Pēc tam tie jāidentificē.

Pienskābes baktēriju izolēšana

Šim nolūkam izmanto virsmas sēšanu. Sējamajiem paraugiem nepieciešama iepriekšēja procedūra.

Mātes piena paraugiem ieteicams 10 minūtes centrifugēt 1 ml parauga ar ātrumu 14 000 apgr./min., Lai noņemtu tauku slāni. 900 μl tiek izmesti, un atlikušajos 100 μl nogulsnes suspendē un ielej uz MRS agara virsmas, un pēc tam tās vienmērīgi jāsadala ar Drigalski lāpstiņu.

Izkārnījumu paraugu gadījumā nosver vienu (1) gramu izkārnījumu un homogenizē 9 ml 0,1% sterila peptona ūdens, kas atbilst 1/10 atšķaidījumam. Pēc tam veic sērijveida atšķaidījumus, līdz ^{tiek iegūts} galīgais atšķaidījums ^10-4 .

Visbeidzot, ņem 100 µl ^10–2 , ^10–3 un ^10–4 atšķaidījumu, un katru atšķaidījumu iesēj uz MRS agara, vienmērīgi sadalot ar Drigalski lāpstiņu.

Pienskābes baktēriju skaits

Šajā gadījumā sēšanu veic pēc dziļuma.

Mātes piena paraugiem ņem 1 ml un ievieto sterilā koniskā plastmasas mēģenē. Aptuveni 40 ° C temperatūrā MRS agaru pievieno galīgajam tilpumam 25 ml, iegūstot viendabīgu maisījumu. Pēc tam to vienmērīgi ielej sterilos Petri traukos un ļauj nostāvēties līdz polimerizācijai.

Izkārnījumu paraugiem veic atšķaidījumus, kā aprakstīts iepriekš. Ņem 1 ml katra atšķaidījuma un ievieto sterilās koniskās plastmasas mēģenēs. Izkausētu MRS agaru pievieno tilpumam 25 ml.

Katra atšķaidījuma maisījumu vienmērīgi ielej sterilos Petri traukos. Visbeidzot, to atstāj atpūsties līdz polimerizācijai.

Koloniju skaits uz Man Rogosa un Sharpe (MRS) agara. Avots: šim rakstam ziedotais foto. Autori: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Pētījuma laikā uzņemts foto ar nosaukumu: Pienskābes baktēriju un bifidobaktēriju ar probiotisko potenciālu novērtējums mātes pienā un zīdaiņa fekālijās.

Pētniecības līmenis

Katru dienu arvien lielāka interese ir par pienskābes baktēriju izpēti; Pētnieki īpaši cenšas uzzināt par jauniem celmiem un to iespējām kā sākuma fermentiem standartizācijā piena produktu ražošanā, cita starpā.

Šajā ziņā Alvarado et al. (2007) izmantoja MRS agaru, lai veiktu pētījumu, kurā viņi izolēja, identificēja un raksturoja pienskābes baktērijas, kas atrodas Andu amatnieku kūpinātajā Venecuēlas sierā.

Sierā viņi atrada Lactococcus un Lactobacillus ģints baktērijas un secināja, ka izolētu celmu maisījumi ir piemēroti kā sākuma celmi sieru ražošanā no pasterizēta piena.

No otras puses, Sánchez et al. (2017) izmantoja MRS agaru, lai izpētītu pienskābes baktēriju klātbūtni sivēnu gremošanas traktā, lai tos izmantotu kā vietējās probiotikas, kas palielina veselīgu sivēnu produktivitāti.

Ar šo barotni viņiem izdevās izolēt četras sugas: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae un Pediococcus pentosaceus.

Tāpat Bāez et al. (2019) izmantoja MRS agaru, lai novērtētu pienskābes baktērijas (LAB) un bifidobaktērijas ar probiotisko potenciālu mātes pienā un zīdaiņa fekālijās.

Viņiem izdevās mātes pienā izdalīt 11 BAL un 3 Bifidobacteria sp un 8 BAL un 2 Bifidobacteria sp. fekālijās. Visi atbilda noteiktiem parametriem, kas pierāda viņus kā baktērijas ar probiotisko aktivitāti.

Autori secināja, ka gan mātes piens, gan ekskrementi no zīdaiņiem, kas tiek baroti tikai ar krūti, ir dabiski probiotisko baktēriju avoti.

QA

Lai novērtētu MRS agara kvalitāti, kontroles celmi, piemēram:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli.

Gaidāmie rezultāti ir apmierinoša pirmo 6 baktēriju augšana, savukārt E. coli un Bacillus cereus ir pilnībā jānovērš.

Atsauces

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Venecuēlas kūpināta Andu amatnieku siera pienskābes baktēriju izolēšana, identificēšana un raksturošana. Tās izmantošana kā sākuma kultūra. Cients. (Marakaibo) 2007; 17 (3): 301–308. Pieejams vietnē: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Pienskābes baktēriju izolēšana no sivēna gremošanas trakta. Rev. veterinārs. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Pieejams vietnē: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Pienskābes baktēriju un bifidobaktēriju ar probiotisko potenciālu novērtējums mātes pienā un zīdaiņu fekālijās Acevedo pašvaldībā, Miranda 2017. Bakalaura darbs, lai iegūtu bakalaura grādu Bioanalīze. Karabobo universitāte, Venecuēla.
4. Britannia laboratorija. MRS agars. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
5. Wikipedia līdzautori. MRS agars. Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2018. gada 10. janvāris, 19:44 UTC. Pieejams: wikipedia.org Piekļuve 2019. gada 17. februārim.
6. Roy D. Barotnes bifidobaktēriju izolēšanai un uzskaitīšanai piena produktos. Int J Pārtikas mikrobiols, 200128; 69 (3): 167–82.