- Pamats
- Peptoni un rauga ekstrakts
- Glikoze
- L-lizīns
- PH indikators (bromkrezola violets)
- Dzelzs amonija citrāts un nātrija tiosulfāts
- Pārbaudes interpretācija
- Lizīna dekarboksilēšana
- Lizīna dezaminēšana
- Sērūdeņraža (H
- Rezultātu ieraksts
- Sagatavošana
- Lietojumprogrammas
- Atsauces
Agars LIA (Lizīns Dzelzs) ir bioķīmisks testu izmanto, lai noteiktu baktērijas no Enterobacteriaceae dzimtas. Šo nesēju izveidoja Edvards un Fife, balstoties uz Falkova formulu.
Sākotnēji šis tests bija buljons, kas satur peptonus, rauga ekstraktu, glikozi, L-lizīnu, bromkrezola purpuru un destilētu ūdeni. Edvards un Fife pievienoja agara agaru, dzelzs amonija citrātu un nātrija tiosulfātu.
Pozitīvs un negatīvs lizīna dekarboksilācijas tests. Avots: Autora foto un diagrammas īpašums MSc. Marielsa gil
Pārbaude galvenokārt sastāv no lizīna dekarboksilāzes enzīma pierādīšanas, kas spēj reaģēt ar aminoskābes L-lizīna karboksilgrupu. Aminoskābes deaminēšana var notikt arī fermenta lizīna deamināzes klātbūtnes dēļ.
Turklāt barotnes sastāvs parāda dažu baktēriju ģinšu spēju ražot sērūdeņradi. Visbeidzot, ir arī iespējams novērot, vai vidē rodas vai nerodas gāze.
Pamats
Peptoni un rauga ekstrakts
Tāpat kā lielākajā daļā barotnes, lizīna dzelzs agars satur komponentus, kas nodrošina baktēriju augšanai nepieciešamo barības vielu avotu. Šīs sastāvdaļas attēlo peptoni un rauga ekstrakts.
Glikoze
Tāpat šis agars satur glikozi kā raudzējamu ogļhidrātu. Ir zināms, ka visas Enterobacteriaceae ģimenes baktērijas raudzē glikozi.
Šis solis ir izšķirošs, jo tas būs atbildīgs par barotnes paskābināšanu, kas ir būtisks nosacījums enzīma lizīna dekarboksilāzes, ja tāda ir, iedarbībai uz tās substrātu.
Dažās baktēriju ģintīs var novērot gāzes veidošanos glikozes fermentācijas dēļ.
Par gāzi liecina, kad mēģenē pārvieto agaru, atstājot tukšu vietu tā apakšā vai sadalot barotni divās vai vairākās daļās.
L-lizīns
Kad lizīns ir dekarboksilēts, veidojas diamīns (cadaverīns) un oglekļa dioksīds.
Dekarboksilēšana notiek koenzīma piridoksāla fosfāta klātbūtnē. Šī reakcija ir neatgriezeniska.
PH indikators (bromkrezola violets)
Visas pH izmaiņas, kas barotnē rodas dažādās reakcijās, nosaka ar purpura bromkrezola pH indikatoru.
Šajā nozīmē, kad notiek paskābināšanās, barotne kļūst dzeltena, un, kad notiek alkalizācija, barotne atgriežas sākotnējā purpursarkanā vai purpursarkanā krāsā.
Kad lizīna deamināzes enzīma klātbūtnes dēļ notiek lizīna deaminēšana, uz virsmas veidojas sarkanīga krāsa, kas raksturīga Proteus, Providencia ģints un dažām Morganella sugām.
Tas ir saistīts ar faktu, ka deaminācijas procesa laikā veidojas alfa-ketokarbonskābe, kas skābekļa klātbūtnē reaģē ar amonija citrātu, kas izraisa iepriekšminēto krāsu.
Dzelzs amonija citrāts un nātrija tiosulfāts
No otras puses, par baktērijām, kas ražo sērūdeņradi, liecinās nātrija tiosulfāta (sēra avots) un dzelzs amonija citrāta klātbūtne, kas ir H 2 S attīstītājs.
Baktērijām, kurām ir tiosulfāta reduktāzes enzīms, ir spēja rīkoties, samazinot klāt esošo nātrija tiosulfātu, veidojot sulfītu un sērūdeņradi (H 2 S).
Pēdējā ir bezkrāsaina gāze, bet, reaģējot ar dzelzs sāli, veido melno metālu sulfīdu, kas ir nešķīstošs savienojums (redzamas melnas nogulsnes).
Tomēr, spēja veidot H 2 S ar šo līdzekli nav uzticama, jo daži lizīns dekarboksilāzes negatīvas baktērijas spēj ražot H 2 S netiks veido melno nogulsnes, kā skābuma vidēja traucē. Tāpēc ieteicams pārbaudīt ar citiem materiāliem, kas satur dzelzi.
Pārbaudes interpretācija
Lizīna dekarboksilēšana
Caurules jāizlasa pēc 24 inkubācijas stundām, pretējā gadījumā pastāv risks nepareizi interpretēt reakciju, ziņojot par nepatiesām negatīvām.
Jāatceras, ka pirmā reakcija, kas notiks, būs glikozes fermentācija, tāpēc visas mēģenes pēc 10 līdz 12 stundām kļūs dzeltenas.
Ja inkubācijas laika beigās (24 stundas) tiek novērots dzeltens fons ar purpursarkanu vai violetu virsmu, reakcija ir negatīva. Virsmas purpursarkanā krāsa atbilst barotnes sārmainībai, izmantojot peptonus.
Pozitīva reakcija ir tāda, kurā mēģenes dibens un virsma ir pilnīgi purpursarkani, tas ir, tā atgriežas sākotnējā krāsā.
Tāpēc tas, kurš nosaka testa pozitivitāti, ir barotnes pamats vai fons. Ja rodas šaubas par krāsu, to var salīdzināt ar LIA mēģeni, kas nav inokulēta.
Lizīna dezaminēšana
Caurulei, kas parāda lizīna deamināciju, būs sarkanbrūna krāsa un dzeltens (skābs) fons vai visa caurule sarkanbrūna krāsa.
Šī reakcija tiek interpretēta kā negatīva attiecībā uz lizīna dekarboksilēšanu, bet pozitīva - par lizīna deaminēšanu.
Šī reakcija ir definēta un interpretēta uz rāmja.
Sērūdeņraža (H
Pozitīvu reakciju novēro melnu nogulsņu parādīšanās visā barotnē vai tās daļā. Parasti starp slīpuma malu un pamatni.
Ja nogulsnes notiek visā mēģenē, tas neatklāj citas reakcijas, kas notiek pa vidu.
Rezultātu ieraksts
Interpretējot testu, rezultātus reģistrē šādi:
Vispirms nolasa slīpumu, tad apakšā vai blokā, tad H 2 S ražošanā un, visbeidzot, gāzes ražošanā.
Piemērs: K / A + (-). Tas nozīmē:
- K: sārmains slānis (purpursarkanā krāsā)
- A: Skābs fons (dzeltens), t.i., negatīva dekarboksilēšanas reakcija un negatīva deaminēšana.
- +: Sērūdeņraža iegūšana
- (-): bez gāzes.
Sagatavošana
Nosver 35 g dehidrētas dzelzs agara lizīna barotnes un izšķīdina to vienā litrā destilēta ūdens.
Karsē, līdz agars pilnībā izšķīst. Lai to izdarītu, ļaujiet tam vārīties minūti, bieži maisot. Sadaliet 4 ml barotnes 13/100 mēģenēs ar kokvilnas vāciņiem.
Sterilizējiet 15 minūtes autoklāvā 121 ° C temperatūrā. Noņemiet no autoklāva un ļaujiet stāvēt leņķī tā, lai paliktu dziļa pamatne un īss slīps.
Uzglabāt ledusskapī 2-8 ° C temperatūrā. Pirms baktēriju celma sēšanas ļaujiet tam sasilt.
Dehidrētās barotnes krāsa ir bēša, un sagatavotā barotne ir sarkanīgi purpursarkanā krāsā.
Sagatavotās barotnes galīgais pH ir 6,7 ± 0,2
Barotne kļūst dzeltena, ja pH ir 5,2 vai zemāka, un ir violeta, ja pH ir 6,5 un augstāks.
Lietojumprogrammas
Šo testu kopā ar citiem bioķīmiskajiem testiem izmanto Enterobacteriaceae dzimtas baktēriju identificēšanai.
Barotnei tiek iesēta ar taisnu cilpu vai adatu, mēģenes apakšpusē tiek izdarīts viens vai divi caurdurumi, un pēc tam barotnes virsmu iedala zigzagā.
Inkubē 24 stundas 35-37 ° C temperatūrā aerobiozē. Ja nepieciešams, atstāj inkubēt vēl 24 stundas.
Galvenokārt ir lietderīgi atšķirt laktozes negatīvās Citrobacter sugas no Salmonellas sp.
Avots: Koneman E, Allens S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
Atsauces
- Mac Faddin J. (2003). Bioķīmiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. ed. Redakcija Panamericana. Buenosairesa. Argentīna.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
- Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
- Britannia laboratorijas. Lizīna dzelzs agars. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
- BD laboratorijas. BBL lizīna dzelzs agara slīpumi. 2007. Pieejams: bd.com
- Valtek laboratorijas. Vidējs LIA 2009. Pieejams vietnē andinamedica.com