Agars Hektoen vai Hektoen zarnās šķīstošais agar cietā nesēja ir selektīvs un diferenciālo kultūra. To Hektoena institūtā izveidoja Kings un Megers, lai izolētu Shigella un Salmonella ģints enteropatogēnās baktērijas.
Barotne sastāv no proteozes peptona, rauga ekstrakta, žults sāļiem, laktozes, saharozes, salicīna, nātrija tiosulfāta, nātrija hlorīda, dzelzs citrāta, amonija citrāta, bromtimola zilā, skābes fuksīna un agara. Šis sastāvs ļauj atšķirt Shigella un Salmonella ģints no pārējām baktērijām, kuras spēj augt šajā barotnē.
A. Jaunava Hektoena agars B. Sējējs Hektoena agars. Avots: Flickr.com/Oriģinālais augšupielādētājs bija Philippinjl franču Vikipēdijā.
Lai gan ir arī citi barotnes ar tādu pašu funkciju kā Hektoen agars, tai ir lielākas priekšrocības salīdzinājumā ar citām barotnēm, it īpaši, ja vēlaties atjaunot Shigella sugas.
Abu dzimumu sugas cilvēkiem rada nopietnas kuņģa un zarnu trakta problēmas, jo tiek patērēts piesārņots ēdiens; tāpēc pārnešana notiek fekāli - perorāli. Tāpēc Hektoen agara lietošana galvenokārt tiek norādīta izkārnījumu un pārtikas paraugu mikrobioloģiskajā analīzē.
Pamats
Hektoen agars satur peptonus un rauga ekstraktu kā barības vielu avotu, nodrošinot būtiskus mikrobu attīstības elementus.
Tomēr tajā ir arī žults sāļi, kas darbojas, kavējot dažu baktēriju, īpaši grampozitīvu un dažu gramnegatīvu, augšanu. Tieši šī iemesla dēļ to uzskata par selektīvu nesēju.
No otras puses, Hektoen agars ir diferenciāla vide. Šo īpašību piešķir fermentējamu ogļhidrātu, piemēram, laktozes, saharozes un salicīna, klātbūtne kopā ar pH indikatoru sistēmu, ko attēlo bromtimola zils un skābs fuksīns.
Visām baktērijām, kuras var augt šajā barotnē un kas nepieder Salmonella un Shigella ģintīm, attīstīsies lašu vai apelsīnu kolonijas, izņemot Proteus ģints. Tas notiek viena vai vairāku klāt esošo ogļhidrātu fermentācijas dēļ, kas paskābina barotni, kas liek pagriezties pH indikatoram.
Šigella un Salmonella ģints no savas puses nespēj raudzēt nevienu no esošajiem ogļhidrātiem, kā enerģijas avotu izmantojot tikai peptonus, kas sārmaina barotni, un tāpēc to kolonijas ir zili zaļas.
Šajā barotnē var atšķirt arī baktērijas, kas spēj radīt sērūdeņradi (bezkrāsainu gāzi). Nātrija tiosulfāts darbojas kā sēra avots, bet dzelzs citrāts ir izstrādātājs. Abi savienojumi ļauj veidot melnas dzelzs sulfīda nogulsnes, kas parāda reakciju.
Melnās nogulsnes kolonijas centrā ar caurspīdīgu halu ap to rada zivju acs izskatu. Šī īpašība liecina par Salmonella ģints klātbūtni.
Visbeidzot, nātrija hlorīds uztur osmotisko līdzsvaru, un agars nodrošina barotnes cietu konsistenci.
Sagatavošana
Nosver 76 g dehidrētas barotnes un izšķīdina litrā destilēta ūdens. Enerģiski krata maisījumu un pēc tam ļauj tam atpūsties 10 līdz 15 minūtes. To var sildīt un vārīt, dodot rotācijas kustības līdz pilnīgai izšķīdināšanai. Šī vide nav autoklāvāta.
Kad barotne sasniedz temperatūru aptuveni 45 ° C, 20 ml tilpumu tieši ielej sterilos Petri traukos.
Agaram ļauj sacietēt. Tajā laikā tie ir gatavi lietošanai. Ieteicams tos nekavējoties lietot. Ja tas nav iespējams, līdz lietošanai tie tiek turēti ledusskapī.
Pirms sēšanas plāksnes iepriekš jāizņem no ledusskapja, lai tās sasildītos līdz istabas temperatūrai.
Barotnes pH jābūt 7,5 ± 0,2. Dehidrētās barotnes krāsa ir purpursarkana, un sagatavotā barotne ir brūngani zaļa.
Izmantojiet
Lai meklētu Shigella un Salmonella ģints baktērijas izkārnījumos un pārtikas paraugos, ieteicams izmantot Hektoen agaru.
Iespēja šīs baktērijas izolēt ir ievērojami palielināta, ja paraugs iepriekš ir bagātināts īpašos buljonos, piemēram, selenīta buljonā, cistīna selenīta buljonā, tetrationāta buljonā utt.
Sējmateriālam jābūt stipram, un sēšanu veic ar šķipsnu palīdzību. Plāksnes inkubē 37 ° C temperatūrā no 24 līdz 48 stundām aerobiozē.
Ieteicams inkubēt 48 stundas, jo koloniju raksturojums un diferenciācija šajā laikā ir skaidrāka.
QA
Kvalitātes kontrolei šajā barotnē izmanto sertificētus baktēriju celmus, piemēram: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 un Shigella sonnei ATCC 25931.
Gaidāmie rezultāti ir šādi: Salmonella typhimurium un Salmonella enteritidis jāattīstās zili zaļās kolonijās ar melnu centru vai bez tā. Kamēr Shigella sugas augs kā zili zaļas kolonijas.
Var iekļaut arī Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 un Staphylococcus aureus ATCC 25923 celmus.
Šajos gadījumos novērotās pazīmes ir šādas: E. coli un K. pneumoniae šajā barotnē veidosies laša-oranžas kolonijas, un ap tām būs tādas pašas krāsas nogulsnes. Tā kā Proteus attīstīsies zili zaļas kolonijas ar melnu centru vai bez tā.
Kamēr jānovērš S. aureus un E. faecalis, E. faecalis reizēm izdodas izaugt par ļoti mazām, dzeltenām kolonijām.
No otras puses, tā kā šī barotne nav autoklāvēta, ir svarīgi novērtēt barotnes sterilitāti. Tāpēc no katras sagatavotās partijas vienu līdz divas neinokulētās plāksnes 24 stundas inkubē 37 ° C temperatūrā aerobiozē.
Acīmredzot nekāda veida izaugsme uz šķīvja nav gaidāma.
Ierobežojumi
-Šajā barotnē var attīstīties Proteus sugas, un to koloniju īpašības var sajaukt ar Salmonella vai Shigella sugām. Šī iemesla dēļ jebkura aizdomīga kolonija jāapstiprina ar bioķīmiskajiem testiem.
-Šīs barotnes lietošana ir jāpapildina ar citiem mazāk selektīviem agariem, jo, ja mikroorganisms tiek atrasts nelielā koncentrācijā, tas šajā vidē var neattīstīties.
- Pagatavošanas laikā nepārkarsējiet, jo pārmērīgs karstums maina barotnes sastāvu.
-Parasti var parādīties laktozes fermentējošās Salmonella kolonijas, kuras var palikt nepamanītas.
Atsauces
- Wikipedia līdzautori. Hektoen enterālais agars. Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2019. gada 13. marts, 23:38 UTC. Pieejams: .wikipedia.org / Piekļuve 2019. gada 16. martam.
- BD laboratorijas. BD Hektoen enteriskais agars (HE agars). 2013.Pieejams vietnē: bd.com
- Britannia laboratorijas. Hektoen enteriskais agars. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo laboratorijas. Hektoena agars. Pieejams vietnē: f-soria.es
- Difco & BBL rokasgrāmata, Hektoen Enteric Agar. 2. izdevums. Pieejams: bd.com/europe