KUKURŪZAS MILTU AGARS: FONS, SAGATAVOŠANA UN LIETOŠANA - BIOLOĢIJA - 2025

Kukurūzas miltus agars ir cieta barotni, zema uztura jaudu, noderīga uzsējums noteiktu sēnīšu un demonstrēt chlamydospores ar celmu Candida albicans sarežģīti. Angļu valodā tas ir pazīstams kā Corn Meal Agar.

Parastajai kukurūzas miltu barotnei ir ļoti vienkāršs sastāvs, tā satur kukurūzas miltus, agara agaru un ūdeni. Tā kā barības līmenis ir zems, tas ir ideāli piemērots sēnīšu, īpaši melno sēņu, celmu uzturēšanai mērenā laika periodā.

A. Candida albicans kompleksa grafiskais attēlojums uz kukurūzas miltu agara. B. Mikroskopā redzamas Candida albicans kompleksa hlamidosporas, kas izveidotas uz kukurūzas miltu agara. Avots: A. GrahamColm / B. Autors: CDC / Dr. Viljams Kaplāns, Pieklājība: Sabiedrības veselības attēlu bibliotēka.

Šajā barotnē tiek dota priekšroka Candida albicans kompleksa sporulācijai, ja agara sagatavošanas laikā pievieno 1% no Tween 80. Hlamidosporas veidošanās ir raksturīga šai sugai un praktiski vienīgā, kas ietekmē cilvēkus.

Ir arī citas sugas, kas veido hlamidosporas, bet tās, visticamāk, neietekmēs cilvēkus, piemēram, Candida australis, kas atrodas pingvīnu izkārnījumos, vai C. clausenii, kas ir reti sastopams saprofīts. Tāpat izņēmuma kārtā tās var veidot C. stellatoidea un C. tropicalis sugas.

No otras puses, glikozes pievienošana kukurūzas miltu barotnei veicina pigmentu veidošanos Trichophytom rubrum celmos.

Ir svarīgi uzsvērt, ka ir sēnītes, kas kukurūzas miltu agarā neveido hyfae vai pseudohyphae, piemēram, Cryptococcus neoformans, kas atšķiras no citām ģintīm.

Kukurūzas agaru var pagatavot mājās laboratorijā vai var izmantot arī komerciālos medijus.

Pamats

Kukurūzas milti ir substrāts, agars ir sacietēšanas līdzeklis, un ūdens ir šķīdinātājs.

Kukurūzas agaru var papildināt ar tween 80 (sorbitāna monooleāts vai polisorbāta poliesters 80). Šis savienojums samazina barotnes virsmas spraigumu tās emulģējošās spējas dēļ.

Tas arī rada naidīgu vidi, kas kavē pārspīlētu šūnu pavairošanu un stimulē hyphae augšanu, dodot priekšroku arī hlamidosporas veidošanai; pēdējais uzskatīja pretestības struktūras. Šī struktūra palīdz identificēt Candida albicans sugas.

Savukārt glikoze šajā barotnē palielina dažu sēņu pigmenta veidošanās spēju.

Jāatzīmē, ka kukurūzas miltu barotne ar glikozi nav noderīga hlamidosporas demonstrēšanai Candida albicans kompleksā.

Sagatavošana

Pašdarināts kukurūzas miltu agara pagatavošana

Nosver 47 g dzeltenās kukurūzas miltu un izšķīdina 500 ml destilēta ūdens. Uzkarsē līdz 60 ºC, maisot maisījumu apmēram 1 stundu. Pēc tam filtrē caur marles un kokvilnas gabalu, pēc izvēles to var atkal filtrēt, izejot no preparāta caur Whatman Nr. 2 filtrpapīru.

Ar destilētu ūdeni uzpilda līdz 1000 ml. Pievieno 17 g agara agara, karsē, līdz izšķīst. Autoklāvā 15 minūtes 121 ºC temperatūrā.

Pasniedziet sterilos Petri traukos. Uzglabāt ledusskapī.

Sagatavotās barotnes krāsa ir bālgana ar vienreizēju izskatu.

Ja vēlaties iepriekš aprakstītajā pagatavot kukurūzas miltus ar glikozi, pievienojiet 10 g glikozes.

Tirdzniecības kukurūzas miltu agars

Nosver 17 g dehidrētas barotnes un izšķīdina 1 litrā destilēta ūdens. Maisījumu var uzkarsēt, viegli kratot, lai tas pilnībā izšķīst. Sterilizē 15 minūtes autoklāvā 121 ºC temperatūrā pie 15 mārciņām.

Ielejiet sterilos Petri traukos. Ļaujiet sacietēt. Apgrieziet un uzglabājiet ledusskapī līdz lietošanai. Pirms lietošanas atdzesē.

25 ° C temperatūrā pH jābūt 6,0 ± 0,2.

Kukurūzas miltu agars ar Tween 80

Lai atbilstu ISO 18416, kukurūzas miltu agars jāsagatavo šādi:

Nosver 65 gramus litrā un pievieno 10 ml Tween 80. Karsē un vāra dažas minūtes, līdz izšķīst, uzmanot, lai pārāk nepārkarsētu. Sterilizējiet 121 ºC temperatūrā 15 minūtes.

Kukurūzas miltu agars ar glikozi

Lai uzlabotu Trichophyton rubrum koloniju hromogenitāti un atšķirtu tās no T. mentagrophytes, sākotnējai formulai var pievienot 0,2% glikozes. Jums nav nepieciešams Tween 80, jo glikoze kavē hlamidosporas veidošanos.

Izmantojiet

Galvenokārt kukurūzas miltu agara izmantošana ir paredzēta Candida celmu izpētei, palīdzot tos identificēt, raksturīgi novērot hlamidosporas albicans sugās. Tas ir, šī agara izmantošana ir šo raugu identifikācijas palīgmetode.

Šajā agarā var attīstīties gan saprofītiskas, gan patogēnas sugas, taču katra no tām veido raksturīgās micēlija struktūras. Piemēram, Torulopsis ģints sugas neražo micēliju un vairojas tikai ar blastokonidijām.

Tāpat Trichosporon un Geotrichum sugas rada artroconidia uz kukurūzas miltu agara, un dažreiz ir grūti atšķirt vienu no otra.

Geotrichum ģints Arthroconidia veido hifu pagarinājumu, kas atgādina hokeja nūju.

Trichophytom rubrum identificēšanai ir noderīga arī pigmentu ražošana, izmantojot kukurūzas miltu agaru, kas papildināts ar glikozi.

Sēj

Aizdomīgās Candida kolonijas, kas primārajā barotnē - Sabouraud agarā - iegūtas no klīniskajiem paraugiem, kosmētikas līdzekļiem, augsnēm, cita starpā, tiek kultivētas uz kukurūzas miltu agara. Barotni iesēj un inkubē 22 ° C temperatūrā no 24 līdz 48 stundām. Inkubācijas laiku var pagarināt, ja nepieciešams.

Chlamydospore demonstrācija

Šim nolūkam kukurūzas miltu agars ar Tween 80 jāinokulē, izmantojot Dalmau metodi. Šī metode sastāv no iespējamās kolonijas daļas ņemšanas ar platīna rokturi un trīs paralēlu griezumu izdarīšanu vidū, turot rokturi 45 ° leņķī. Izgriezumus vajadzētu atdalīt 1 cm attālumā viens no otra.

Pēc tam uz iepriekš iesvītrotā seguma objekta uz iesētajām svītrām novieto tā, lai puse būtu pārklāta, bet otra - nesegta.

Inkubē iesētās plāksnes 30 ° C temperatūrā 48–72 stundas un pēc tam mikroskopā pārbauda caur vāka slīdni.

Sēnīšu celmu uzturēšana

Celmu uzturēšanai iesētās un izaudzētās plāksnes tur ledusskapī (no 4 līdz 8 ºC). Tādā veidā tie var ilgt vairākas nedēļas un tikt izmantoti mācību vai pētniecības mērķiem.

QA

Sterilitātes kontrolei plāksni inkubē bez inokulācijas istabas temperatūrā, ir sagaidāms, ka neaugs vai nemainīsies krāsa.

Kvalitātes kontrolei var sēt tādus zināmus celmus kā: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Gaidāmie rezultāti ir daļēja S. aureus un E. coli inhibīcija. Lai gan pārējos celmos gaidāms apmierinošs pieaugums.

Apmēram 5 dienu inkubācijas laikā Aspergillus niger aug ar melnām un sporulētām kolonijām.

Candida albicans rauga kolonijas ar hlamidosporas ražošanu.

Saccharomyces cerevisiae ražo lielas rauga šūnas.

Ierobežojumi

Plāksnes apakšā veidojas dzeltenas nogulsnes, kuras nevajadzētu sajaukt ar kolonijām.

Atsauces

1. Neogēnu laboratorijas. Kukurūzas miltu agars. Pieejams vietnē: foodsafety.neogen.com.
2. Barotnes mikrokomplekts. Kukurūzas miltu agars. Pieejams vietnē: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Solís F. Rauga identifikācijas rokasgrāmata. Pieejams vietnē: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Perv Med.Exp. Sabiedrības veselība, 2002; 19 (4): 206-208. Pieejams vietnē: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Vispārējā mikoloģija. 1994. Venecuēlas Centrālās universitātes 2. izdevums, bibliotēkas izdevumi. Venecuēlas Karakasa.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
7. Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
8. Castillo E. Dažu makro un mikroskopisko metožu salīdzinošs pētījums Candida ģints izolēšanai un atpazīšanai. Kolumbijas farmācijas ķīmijas zinātņu rev. 1970; 3 (1): 33-57. Pieejams vietnē: Ciencias.unal.edu.co