Agars Endo vai Endo vide ir stabila vide, diferenciālis un ar zināmu selektivitātes kultūru. Sākotnējo formulu Endo izveidoja 1904. gadā, lai atšķirtu laktozes fermentāciju no nefermentējošām baktērijām. Sākotnēji tas bija paredzēts Salmonella typhi izolēšanai, bet vēlāk barotnes mērķis pievērsās koliformu meklēšanai.
Endo agara princips ir palicis, bet tā formulējums gadu gaitā ir piedzīvojis neskaitāmas izmaiņas. Pašlaik barotne sastāv no dzīvnieku audu peptiskā sagremojuma, laktozes, nātrija hidrogēnfosfāta, nātrija sulfīta, pamata fuksīna un agara.
A: Virgin Endo agars B: Endo agars ar sēklām, agara vidū jūs varat pamanīt E. coli celma metālisko spīdumu. Avots: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Galvenā barotnes lietošana ir saistīta ar gramnegatīvo baktēriju, kas pieder Enterobacteriaceae ģimenei un citām tuvām ģimenēm, izolāciju un diferenciāciju.
Ilgu laiku to izmantoja koliformu noteikšanai ūdens, piena un pārtikas produktu paraugos, taču šodien šo barotni izmanto citi cilvēki ar līdzīgām funkcijām. Tomēr dažas mikrobioloģijas laboratorijas izmanto šo agaru Enterobacteriaceae izolēšanai no klīniskas izcelsmes paraugiem.
Pamats
Endo agars satur peptonus, kas kalpo par aminoskābju, slāpekļa, oglekļa un enerģijas avotu, kas nepieciešami nevajadzīgu mikroorganismu augšanai.
No otras puses, agara nedaudz selektīvo raksturu nodrošina nātrija sulfīta un pamata fuksīna pievienošana; abi komponenti daļēji vai pilnīgi kavē vairums grampozitīvu baktēriju augšanu.
Diferenciālo raksturu piešķir fermentējamo ogļhidrātu klātbūtne, kas šajā gadījumā ir laktoze un pamata fuksīns, kas arī kalpo kā pH indikators.
Gramnegatīvās baktērijas, kas aug uz šī agara un spēj fermentēt laktozi, veidos spēcīgas rozā kolonijas; būdami Escherichia coli patognomoniski, veidojas tumši sarkanas kolonijas ar zaigojošu zaļganu metālisku spīdumu. Tas ir saistīts ar augsto skābju ražošanu no ogļhidrātu fermentācijas.
Jāatzīmē, ka barotne ap kolonijām arī iegūst izteikti rozā krāsu. Tā kā nelaktozes fermentējošie gramnegatīvie stieņi veido gaiši sārtas kolonijas, kas līdzīgas vidējai vai bezkrāsainai.
Dimālija hidrogēnfosfāts līdzsvaro barotnes pH, un agars ir sastāvdaļa, kas nodrošina cietu konsistenci.
Sagatavošana
Endo agars
Nosver 41,5 g dehidrētas barotnes un izšķīdina 1 litrā destilēta ūdens. Karsē maisījumu, bieži maisot, līdz barotne ir pilnībā izšķīdusi. Sterilizējiet autoklāvā 121 ° C temperatūrā ar 15 mārciņu spiedienu 15 minūtes.
Izņemot no autoklāva, ļauj tam atdzist līdz apmēram 45-50 ° C temperatūrai, pirms pasniegšanas maisījumu krata, lai homogenizētos. Ielejiet 20 ml sterilos Petri traukos.
Pirms uzglabāšanas ledusskapī, ļaujiet plāksnēm sacietēt, apgrieziet to un uzglabājiet plaquero vai aptiniet ar tumšu papīru. Ir ļoti svarīgi aizsargāt sagatavoto barotni no tiešas gaismas. Labākā prakse ir sagatavot precīzu summu, kas jums būs nepieciešama.
Ja plāksnes uzglabā ledusskapī, pirms lietošanas tām jāļauj sasilt.
Barotnes pH jābūt no 7,2 līdz 7,6, un sagatavotās barības krāsa ir gaiši rozā.
M-Endo agara variants
Ir vēl viena Endo agara versija (m-Endo), kas seko Makkartija, Delaney un Grasso formulai, kas satur vairāk savienojumu un atšķiras preparāta formā.
Šajā variantā ir: laktoze, triptoze, kazeīna fermentatīvs sagremojums, dzīvnieku audu fermentatīvs sagremojums, nātrija hlorīds, kālija hidrogēnfosfāts, nātrija sulfīts, rauga ekstrakts, vienvērtīga kālija fosfāts, bāzes fuksīns, nātrija deoksiholāts, laurilsulfāts nātrijs un agars.
Šajā gadījumā nosver 51 g dehidrētas barotnes un suspendē 1 litrā destilēta ūdens, kas satur 20 ml etanola.
Nedaudz karsē, maisot, līdz barotne pilnībā izšķīst. To nedrīkst pārkarsēt un autoklāvot. Kad maisījums ir viendabīgs, pasniedz sterilos Petri traukos un ļauj sacietēt.
Izmantojiet
Dažās valstīs to joprojām izmanto, lai uzskaitītu kopējo un fekālo koliformu daudzumu pārtikas un ūdens paraugos, īpaši Escherichia coli klātbūtni kā galveno fekāliju piesārņojuma rādītāju.
M-Endo agaru iesaka Amerikas Sabiedrības veselības asociācija (APHA) dezinfekcijas un notekūdeņu attīrīšanas programmu uzraudzībai un kontrolei, kā arī dzeramā ūdens kvalitātes novērtēšanai.
Pēc parauga bagātināšanas ar Laurilsulfāta buljonu no 2 līdz 4 stundām visplašāk izmantotā metode ir membrānas filtrēšana.
To var izmantot arī kā EMB agara aizstājēju pārtikas un ūdens mikrobioloģiskajā analīzē ar visiespējamāko skaitļu metodi (MPN), it īpaši pilnīgā apstiprināšanas posmā, lai apstiprinātu E. coli klātbūtni no duļķainiem EK buljoniem.
QA
Lai novērtētu sagatavotās Endo agara partijas kvalitāti, sēj zināmus vai sertificētus kontroles celmus.
Starp celmiem, ko var izmantot šim mērķim, ir: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC147 un 14CCCC 1202, Proteus miCoCoCoCoCoC12022 un Proteus miCoCoCoCoCoCoCoCoCoCoCoCoCoCoCoCoCoCoCoC12022. .
Celmiem izsēj izsmelšanu un 24 stundas inkubē 37 ° C temperatūrā aerobiozē.
Gaidāmie rezultāti ir:
- Escherichia coli: spēcīgas sarkanas kolonijas ar metālisku spīdumu.
- E. cloacae un K. pneumoniae kolonijām jābūt rozā mucoidām.
- S. typhimurium, S. flexneri un P. mirabilis gadījumā kolonijas parasti ir gaiši rozā vai bezkrāsainas.
- Visbeidzot, sagaidāms, ka E. faecalis tiks daļēji inhibēts, tāpēc tā augšanai jābūt vājai ar ļoti mazām, spēcīgi rozā kolonijām.
Ierobežojumi
-Endo barotnei ir zema selektīvā jauda, tāpēc ir iespējams, ka var augt daži grampozitīvi mikroorganismi, piemēram, Staphylococcus, Enterococcus un pat raugi.
- Šajā barotnē var veidoties citas baktērijas, kas nepieder Enterobacteriaceae ģimenei, piemēram, Pseudomonas sp un Aeromonas sp. Šiem celmiem ir bezkrāsainas neregulāras kolonijas.
-Šī sagatavotā barotne ir ļoti jutīga pret gaismu, tāpēc ilgstoša iedarbība uz to pasliktina indikatoru sistēmu, neatgriezeniski sabojājot barotni.
- Barotnes sastāvdaļas uzskata par kancerogēnām, tāpēc jāizvairās no tieša kontakta.
- Dehidrētā barotne ir ļoti higroskopiska, un tā jāuztur oriģinālajā traukā istabas temperatūrā, cieši noslēgtā un sausā vidē.
Atsauces
- BD laboratorijas. Endo agars. 2013.Pieejams vietnē: bd.com
- Neogēnu laboratorijas. M Endo agars. Pieejams vietnē: foodsafety.neogen.com
- Endo agars. Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2017. gada 7. septembris, 08:27 UTC. 2019. gada 28. februāris, 22:55. Pieejams: en.wikipedia.
- MercK laboratorija. Endo agars. 2019. Pieejams vietnē: merckmillipore.com
- Tehnisko lapu laboratorijas. M –Ando Agar LES. 2015.Pieejams vietnē: liofilchem.net