EMB agars ir selektīvs un starpība vidēji izmanto cieto kultūras izolācijai Gram negatīvas nūjiņas, īpaši Enterobacteriaceae un citiem gram negatīvām baktērijām brīvus. To sauc arī ar saīsinājumu EAM, kas apzīmē eozīna-metilēnzilo.
Šo barotni 1916. gadā izveidoja Holts-Hariss un Teaga. Tas satur peptonu, laktozi, saharozi, dikālija fosfātu, agaru, eozīnu, metilēnzilo un ūdeni. Tas ir ļoti līdzīgs MacConkey Agar, it īpaši, ja tiek izmantots Levina modificētais EMB agars, kas nesatur saharozi.
Escherichia coli metāla spīdums uz EMB agara Avots: Karmena Moreno Gonzaleza, no Wikimedia Commons
Faktiski katra laboratorija izlemj, vai strādāt ar vienu vai otru, jo tās pilda vienu un to pašu funkciju, kaut arī bioķīmiski tās ir atšķirīgas.
Tam pat ir tāds pats trūkums kā klasiskajam Makkonkija agaram Proteus ģints barības veidošanās ziņā. Tāpēc, lai izvairītos no šīs parādības, agara koncentrāciju var palielināt līdz 5%.
Pamats
Izvēles
EMB agars ir smalki selektīvs, jo satur anilīna krāsvielas (eozīnu un metilēnzilo), kas darbojas kā inhibitori, novēršot vairumam grampozitīvu baktēriju un dažām gardām gramnegatīvām stieņiem.
Tomēr šim agaram ir trūkums, ka dažas grampozitīvas baktērijas var pretoties inhibējošo vielu klātbūtnei un augt kā mazas bezkrāsainas punctate kolonijas, piemēram, Enterococcus faecalis un dažas Staphylococcus.
Var arī augt daži raugi, piemēram, Candida albicans komplekss, kas radīs ļoti mazas rozā kolonijas. No šī rauga hlamidosporas var veidoties pat tad, ja paraugs ir dziļi iesēts.
Diferenciālis
No otras puses, EMB agars ir arī diferenciāla barotne, jo šīm krāsvielām (eozīnam un metilēnzilajam) ir īpašība veidot nogulsnes skābā pH, tāpēc tās kalpo par tās ražošanas indikatoriem.
Tādējādi vāji laktozi vai saharozi fermentējošās baktērijas 24 līdz 48 stundu laikā rada purpursarkanās kolonijas. Piemēram, Klebsiella, Enterobacter un Serratia ģints.
Baktērijas, kas spēcīgi raudzē laktozi, piemēram, Escherichia coli, vai saharozi, piemēram, Yersinia enterocolitica vai Proteus penneri, veido zaļgani melnas nogulsnes, piešķirot šīm sugām raksturīgu metāla spīdumu.
Jāatzīmē, ka, ja tiek izmantota EMB levīna barotne (bez saharozes), Yersinia enterocolitica un Proteus penneri radīs skaidras kolonijas.
Baktērijas, kas neraudzē laktozi vai saharozi, baro ar peptoniem, kas nodrošina baktēriju augšanai nepieciešamās aminoskābes un slāpekli un rada skaidras kolonijas. Piemēram, ģints Salmonella un Shigella, cita starpā.
Tāpat ir svarīgi atzīmēt, ka Acinetobacter ģintī var būt lavandas zilās kolonijas, pat ja tas nav laktozes fermentētājs vai saharoze, bet tam piemīt īpašība metilēnzilo fiksēt uz savas šūnas sienas. Tas var notikt arī ar citām oksidējošām baktērijām.
Sagatavošana
Sākotnējā dehidrētā barotne ir gaiši smilškrāsas krāsā.
Lai pagatavotu šo barotni, 36 grami dehidrētas barotnes ir jāsver un suspendē kolbā, kurā ir viens litrs destilēta ūdens.
Pēc tam, kad maisījumam ļauj 5 minūtes atpūsties, kolbu novieto siltuma avotā, enerģiski un nepārtraukti sajaucot, līdz tā vārās un pilnībā izšķīst.
Pēc tam jau izšķīdinātā barotne jāsterilizē, izmantojot autoklāvu 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.
Laika beigās to noņem no autoklāva un atstāj uz īsu brīdi stāvēt. Pēc tam, vēl siltā (45-50 ° C) temperatūrā, katrā sterilajā Petri traukā pasniedz 15-20 ml agara. Barotnei jābūt lakmus zilā krāsā.
Pēc pasniegšanas šķīvjus atstāj nedaudz nesegtu, līdz agars nedaudz atdziest. Pēc tam tos pārklāj un ļauj pilnībā sacietēt. Pēc tam tos sakārto apgrieztu plākšņu turētājos un līdz lietošanai uzglabā ledusskapī (8 ° C).
Lai izvairītos no piesārņojuma, šo procedūru vēlams veikt laminārās plūsmas pārsegā vai Bunsena degļa priekšā.
Ir svarīgi paturēt prātā, ka katrs tirdzniecības nams norāda daudzumu, kas jāsver, lai sagatavotu barotni.
Barotnes galīgajam pH jābūt 7,2 ± 0,2
Lietojumprogrammas
Šo barotni izmanto urīna un fekāliju vai jebkura veida klīnisko paraugu sēšanai, it īpaši, ja ir aizdomas par neizdevīgu gramnegatīvu baciļu klātbūtni, piemēram, baktērijas, kas pieder Enterobacteriaceae ģimenei un kuras šajā barotnē aug ļoti labi.
Shigella un Salmonella ģints enteropatogēnās baktērijas izceļas ar to bezkrāsainām vai viegli dzintara krāsas kolonijām.
Pieaug arī citi nelaktozi fermentējoši bacili, piemēram, Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter.
Tāpat šī barotne ir ļoti noderīga pārtikas un ūdens mikrobioloģiskajā analīzē, jo tā ir ideāli piemērota pilnīgai apstiprinošajai fāzei koliformu noteikšanā, tas ir, lai apstiprinātu E. coli klātbūtni duļķainos EK buljonos no visticamākā skaitļa tehnika (MPN).
QA
Lai pārbaudītu, vai svaigi sagatavotā barotne darbojas labi, var stādīt kontroles celmus, lai novērotu koloniju īpašības un pārliecinātos, ka tās dod, kā paredzēts.
Šim nolūkam var izmantot ATCC celmus vai labi identificētus E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa celmus un dažas grampozitīvas baktērijas, piemēram, S. aureus.
Paredzams, ka E. coli radīs labi attīstītas zili-melnas kolonijas ar zaļu metālisku spīdumu. Tā kā Enterobacter aerogenes un Klebsiella sp vajadzētu dot labi attīstītas zilgani melnas gļotādu kolonijas.
No otras puses, Salmonella typhimurium un Shigella flexneri jāattīstās lielām kolonijām, bezkrāsainām vai ar nelielu dzintara krāsu.
Visbeidzot, Pseudomonas aeruginosa ģints aug kā neregulāra lieluma bezkrāsainas kolonijas, turpretī grampozitīvām baktērijām vajadzētu būt pilnībā inhibētām vai augt reti ar ļoti mazām kolonijām.
Noslēguma domas
Dažreiz sterilizācija samazina metilēnzilā krāsu, iegūstot vidēji oranžu krāsu. Lai metilēnzilā oksidētos un atgūtu purpursarkano krāsu, tā viegli jāsamaisa, līdz krāsa atgūstas.
Arī pēc sterilizācijas krāsviela var izgulsnēties, tāpēc pirms Petri trauku pasniegšanas tā labi jāsamaisa.
Atsauces
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B un Velázquez O. 2009. Pārtikas produktu mikrobioloģiskās analīzes paņēmieni. 2. ed. UNAM Ķīmijas fakultāte. Meksika.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Potenciāli patogēno Escherichia coli celmu raksturojums un izplatība, kas izolēti no cāļu broileriem no putnu fermām Peru. Rev. veterinārs. Peru 2012 23 (2): 209.-219. Pieejams vietnē: scielo.org.
- Laboratorios Conda SA eozīns un metilēnzilā agars. 2010. Pieejams vietnē condalab.com
- Britannia laboratorijas. Levine EMB (ar eozīnu un metilēnzilo) 2011.Pieejams vietnē: britanialab.com
- BD laboratorijas. BD EMB agars (eozīna metilēnzilā agars), modificēts. 2013.Pieejams vietnē: bd.com
- Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. (5. izd.). Argentīna, Panamericana SA redakcija
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Argentīna. Redakcija Panamericana SA