CZAPEKA AGARS: PAMATOJUMS, SAGATAVOŠANA, PIELIETOJUMS UN IEROBEŽOJUMI - BIOLOĢIJA - 2025

CZAPEK (CZA) ir selektīvs cieta vide, kas īpaši paredzēti audzēšanas saprofīto baktērijas un sēnītes. To izveidoja poļu izcelsmes botāniķis Frīdrihs Johans Francs Czapeks un amerikāņu ķīmiķis Artūrs Velands Doks; šī iemesla dēļ šo agaru sauc arī par Czapek-Dox barotni.

Sākotnējā barotne bija šķidra, bet vēlāk pievienoja agaru, lai tā kļūtu par cietu barotni. Czapek barotni veido nātrija nitrāts, bikalija fosfāts, magnija sulfāts, kālija hlorīds, dzelzs sulfāts, saharoze, agars un destilēts ūdens.

Czapeka agars A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Avots: A. Medmyco / B. Foto: Dr David Midgley. Wikipedia.com

Czapeka agara pH ir 7,3, bet ir variants, kuram pievieno 10% pienskābes, kura pH līmenis saglabājas pie 3,5. Šo skābo barotni izmanto acidofilo mikroorganismu audzēšanai.

No otras puses, dažas tirdzniecības mājas modificēja Czapek agara sastāvu, mainot magnija sulfātu un bikalija fosfātu ar glicerofosfātu; šī modifikācija novērš magnija fosfāta nogulsnes veidošanos. Tāpat ir vēl viens variants, kam pievieno rauga ekstraktu.

Visbeidzot, Czapek agaru iesaka Amerikas Sabiedrības veselības asociācija APHA Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp un Penicillium sp. Šīs sugas raksturo vides mikroorganismi un oportūnistiski patogēni.

Pamats

Šī barotne satur saharozi; Šis ogļhidrāts kalpo kā oglekļa avots, bet nātrija nitrāts ir slāpekļa avots, bet atšķirībā no citiem barotnēm piegādātais slāpeklis ir neorganisks.

Šī iemesla dēļ Czapek barotne tiek uzskatīta par selektīvu, jo var augt tikai mikroorganismi, kas kā vienīgo slāpekļa avotu spēj izmantot neorganiskos savienojumus.

Kā barības vielas osmolaritātes regulējošā viela ir bikālija fosfāts. No savas puses magnija sulfāts, kālija hlorīds un dzelzs sulfāts nodrošina būtiskas minerālvielas saprofītu (brīvi dzīvojošu) mikroorganismu augšanai. Šī formula veido magnija fosfāta nogulsnes.

Visbeidzot, agara agars ir savienojums, kas barotnei nodrošina stabilu konsistenci, un ūdens ir visu sastāvdaļu šķīdinātājs.

Izmantojot modificēto Czapek agara formulu, nogulsnes neveidojas, un tas uzlabo dažu sēņu augšanas īpašības.

Skābes Czapek Agara ārkārtīgais skābums padara to par selektīvāku barotni, ļaujot augt tikai acidofīliem mikroorganismiem, kas spēj izmantot neorganisko slāpekli. Tikmēr Czapek-rauga agars uzlabo noteiktu sēņu darbību.

Sagatavošana

Vidējs Czapek-Dox

Nosver 49 g dehidrētas barotnes un izšķīdina destilētā ūdenī. Uzliek siltumu līdz vārīšanās temperatūrai. Bieži sakratiet maisījumu, līdz tas pilnībā izšķīst.

-Czapek Agara ķīļi

Izšķīdināto maisījumu sadala mēģenēs un 15 minūtes autoklāvā 121 ° C temperatūrā. Izņemot no autoklāva, pirms mēģenu nolikšanas homogenizē un ļauj sacietēt.

-Czapek agara plāksnes

Izšķīdināto maisījumu autoklāvā 15 minūtes 121 ° C temperatūrā un ļauj tam atdzist līdz 50 ° C, homogenizē un 20 ml ielej sterilos Petri traukos. Ļaujiet sacietēt, apgrieziet to un uzglabājiet ledusskapī līdz lietošanai.

PH līmenim vajadzētu būt 7,3 ± 0,2. Dehidrētā barotne ir baltā krāsā, un sagatavotā barotne ir gaiši dzintara, viegli duļķaina flokulējošu nogulsņu klātbūtnes dēļ.

Czapek barotne skābā pH

Pagatavo, kā jau aprakstīts, bet katram sagatavotās barotnes litram pievienojot 10 ml sterila 10% pienskābes. Modificētajai Czapek barotnei jābūt ar pH 3,5 ± 0,2.

Modificēts Czapek vidējs

Nosver 45,4 g dehidrētas barotnes un izšķīdina 1 litrā ūdens. Pārējais preparāta sastāvs ir tāds pats kā aprakstīts iepriekš. Dehidrētās barotnes krāsa ir balta, un sagatavotā barotne ir bālgana. Barotnes galīgais pH ir 6,8 ± 0,2.

Czapek-rauga barotne

Saukts arī par Czapek rauga ekstrakta agaru (CYA). Tas satur klasiskā Czapek agara un rauga ekstrakta elementus.

Izmantojiet

Barotni Czapek izmanto, lai cita starpā meklētu saprofītiskos mikroorganismus augsnes, dārzeņu, graudu, gaisa, kukaiņu paraugos.

Czapeka agars skābā pH tiek izmantots acidofilo mikroorganismu augšanai, savukārt modificētais Czapek agars ir īpaši noderīgs hlamidospooru veidošanai Candida albicans kompleksa sugās.

Visbeidzot, Czapek rauga agars ir ļoti noderīgs Aspergillus un Penicillium izolēšanai.

Sēj

-Čapeka agars

Lai meklētu aktinomicītus augsnē, rīkojieties šādi: paraugu 30 minūtes apstrādā ar fenolizētu ūdeni un pēc tam uz Czapeka agaru sēj 1 ml suspensijas. Inkubē 28 ° C temperatūrā 5 līdz 7 dienas.

Dārzeņu, graudu un kukaiņu paraugiem tos ievieto tieši uz agara. Jūs varat arī veikt atšķaidījumus un izslaukiet 0,1 ml uz agara virsmas.

-Modificēts Czapeka agars

Sēšanai izmanto taisnu cilpu vai adatu, to piesūcina ar tamponu un agaru inokulē, veicot punkciju, līdz tas pieskaras plāksnes pamatnei. Inkubē 24 stundas 28 ° C temperatūrā un mikroskopā pārbauda virs un zem plāksnes, lai redzētu, vai nav izveidojušās hlamidosporas.

Inkubācijas temperatūra un laiks

Inkubācijas temperatūra un laiks mainās atkarībā no izdalāmā mikroorganisma veida. Plāksnes parasti inkubē vienu līdz divas nedēļas temperatūras diapazonā no 20 līdz 25 ° C.

Tomēr dažiem celmiem ir īpaši nosacījumi. Piemēram, lielākā daļa Aspergillus ģints sugu optimāli aug 30 ° C temperatūrā; tomēr A. fumigatus aug 50 ° C temperatūrā.

Attiecībā uz vienas vai divu nedēļu inkubācijas laiku ir normāli, tomēr Candida albicans 25 ° C temperatūrā var attīstīties 24 līdz 48 stundās.

Dažu koloniju raksturojums šajā barotnē

-Penicillium atrovenetum

Tas attīstās 12 dienu inkubācijā 27 ° C temperatūrā. Viņu kolonijas ir mazas (25 mm).

Kolonijām ir samtains izskats, ar noteiktu baltu apmali un zili zaļu nokrāsu centrā, kas novecojot kļūst pelēka. Kolonijas aizmugurējā puse ir oranža, padarot vidusdaļu vienādu krāsu pigmenta ražošanas dēļ.

-Aspergillus niger

Tas attīstās ar baltu līdz dzeltenu micēliju un melnām sporām.

-Candida albicans

Attīstās krēmveida gaiši smilškrāsas kolonijas. Modificētajā Czapek agarā tas veido hlamidosporas.

-Aspergillus parasiticus

Tumši zaļš micēlijs attīstās 7 dienu laikā 25 ° C temperatūrā.

QA

Lai novērtētu barotnes kvalitāti, var stādīt sertificētus kontroles celmus, piemēram: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger apmēram 5 dienu laikā attīstās baltas līdz dzeltenas micēlija un melnas sporas, savukārt Candida albicans 24 stundu inkubācijas laikā 25 ° C temperatūrā būs apmierinoša izaugsme; kolonijas ir krēmkrāsas.

Ierobežojumi

Daži pētījumi atklāja, ka Actinomycetes reģenerācijai agars ar vislabāko ražu ir kartupeļu dekstrozes agars, otrajā vietā ir Czapek agars, bet Aspergillus un Penicillium reģenerācijai Czapek agars ir tas, kas nodrošina augstāko reģenerācijas līmeni.

Atsauces

1. Dávila M, et al. Antagonistiski aktinomicīti pret lauksaimnieciskas nozīmes fitopatogēnām sēnītēm. Sv. Meks. Zinātne. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Pieejams vietnē: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, kvieši Á. Aspergillus niger celmu, kas ražo ohratoksīnu A, izolēšana uzglabātā zaļā kafijā (Coffea arabica). Sv. Meks. Mic 2010; 32: 63-68. Pieejams vietnē.scielo.org.
3. Wikipedia līdzautori. Czapek vidēja. Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2019. gada 13. janvāris, 20:30 UTC. Pieejams: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa laboratorijas. Modificēts Czapek-Dox agars. Pieejams vietnē: condalab.com
5. Barotnes mikrokomplekts. Czapek-Dox agars. Diosponējams vietnē: Medioscultivo.com