CLED AGARS: PAMATOJUMS, LIETOJUMS UN SAGATAVOŠANA - BIOLOĢIJA - 2025

CLED agar (Cistīns-Laktoze-elektrolītu nepilnīga) ir ciets barotni diferenciāļa, ko izmanto, lai diagnosticētu urīnceļu infekciju. Barotnes sastāvs ir paredzēts urīna patogēnu augšanai un ir ideāls koloniju veidojošo vienību (CFU) kvantitatīvai noteikšanai.

CLED barotne nav selektīva, jo tajā var augt gramnegatīvi un grampozitīvi mikroorganismi. Bet tā nav problēma, jo lielāko daļu UTI izraisa tikai viena veida mikroorganismi.

CLED agars

Polimikrobu infekciju gadījumā var iegūt 2 vai 3 dažādas baktērijas, taču tas ir ļoti reti un lielākoties ir inficēti paraugi.

Starp gramnegatīvajām baktērijām, kas var augt šajā barotnē, ir baktērijas, kas pieder Enterobacteriaceae ģimenei, un citi zarnu trakta baktērijas, urīna paraugos visbiežāk izdalot šādus uropatogēnus: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, cita starpā.

Tāpat starp grampozitīvajām baktērijām, kuras var augt šajā barotnē, ir Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp un pat raugi, piemēram, Candida albicans komplekss.

Tomēr barotnes ķīmiskā sastāva dēļ tas neļauj augt dažiem prasīgiem uroģenitālās sistēmas patogēniem, piemēram, Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis.

CLED agara pamatojums

CLED barotnē kā enerģijas avots ir gaļas ekstrakts, kazeīna aizkuņģa dziedzera hidrolizāts un želatīna hidrolizāts. Tie nodrošina barības vielas nevajadzīgu baktēriju attīstībai.

Tas satur arī cistīnu - aminoskābi, kas ļauj augt kolibaktērijām, kas izceļas ar mazu izmēru.

Tāpat tas satur laktozi kā raudzējamu ogļhidrātu, šī iemesla dēļ šī barotne ir atšķirīga; spēja atšķirt fermentējošās baktērijas no nelaktozes fermentācijas.

Fermentējošās baktērijas izraisa barotnes pH maiņu skābju veidošanās dēļ, veidojot dzeltenās kolonijas, savukārt nefermentējošās baktērijas barotnē nerada izmaiņas, tāpēc tās iegūst sākotnējā agara krāsu - zaļu.

Fermentācijas reakcija tiek atklāta, pateicoties pH indikatora klātbūtnei, kas šajā barotnē ir bromtimola zilā krāsā.

No otras puses, barotnes zemā elektrolītu koncentrācija kavē Proteus ģints tipisko invazīvo augšanu, ko sauc par barības efektu. Tas rada priekšrocības salīdzinājumā ar citiem barotnēm, jo ​​tas ļauj uzskaitīt CFU, arī tad, ja ir Proteus ģints.

Tomēr zema elektrolītu koncentrācija kavē dažu Šigella ģints sugu augšanu, un tas ir neizdevīgs salīdzinājumā ar citiem barotnēm.

CLED agara (Bevis) pamatojums

Pastāv šīs barotnes variants vai modifikācija, ko izdarījis Beviss, kurš sākotnējā kompozīcijā iestrādāja skābo fuksīnu (Andrades indikators). Tas darbojas kopā ar bromtimola zilo, lai atšķirtu fermentāciju no nefermentējošām baktērijām.

Atšķirība starp parasto un modificēto barotni ir krāsa, ko uzņem kolonijas. Laktozi fermentējošu baktēriju gadījumā kolonijas kļūst sarkanīgi oranžas ar rozā vai sarkanu halo, savukārt nefermentējošās ir zilgani pelēkas.

Lietojumprogrammas

CLED agaru izmanto tikai urīna paraugu sēšanai. Šo barotni īpaši bieži izmanto Eiropas laboratorijās, savukārt Amerikā to lieto mazāk.

Lai iegūtu ticamus rezultātus, paraugu ņemšanai jāatbilst noteiktiem parametriem, tostarp:

• Pirms paraugu ņemšanas nelietojiet antibiotikas.
• Vēlams vispirms ņemt urīnu no rīta, jo tas ir koncentrētāks, kad paraugu nav iespējams paņemt ar invazīvām metodēm.
• Pirms parauga ņemšanas labi nomazgājiet dzimumorgānus.
• Izmetiet pirmo urinēšanas plūsmu un pēc tam ievietojiet trauku.
• Savāc 25 līdz 30 ml urīna labi marķētā sterilā traukā.
• Nekavējoties nogādājiet laboratorijā, ko ieskauj ledus.
• Tas jāapstrādā 2 stundu laikā pēc izdošanas vai maksimāli 24 stundas jāatdzesē 4 ° C temperatūrā.

Sēšanas urīna paraugi

Urīna paraugs jāatšķaida 1:50.

Atšķaidīšanai ievieto 0,5 ml pacienta urīna un atšķaida ar 24,5 ml sterila fizioloģiska šķīduma.

Izmēra 0,1 ml atšķaidīta urīna un virsmu izklāj ar drigalski lāpstiņu uz CLED barotnes. Šī ir labākā sēšanas metode koloniju skaitīšanai. Šī iemesla dēļ to izmanto urīna paraugos, jo rezultāti jāizsaka CFU / ml.

Lai kvantitatīvi noteiktu iegūtās kolonijas, rīkojieties šādi: saskaitiet kolonijas uz plāksnes un reiziniet ar 10 un tad ar 50. Tas dod CFU daudzumu / ml urīna.

Interpretācija

To skaits pārsniedz 100 000 CFU / ml - norāda uz urīna infekciju

To skaits ir mazāks par 1000 CFU / ml - nav infekcijas

Skaits ir starp 1000–10 000 CFU / ml –– Šaubīgs, iespējams piesārņojums, atkārtojiet paraugu ņemšanu.

ID

Kolonijām, kas audzētas uz CLED agara, vajadzētu būt gramam, un atkarībā no mikroorganisma morfotintorijas īpašībām tiek veikta noteikta subkultūra.

Piemēram, ja tas ir gramnegatīvs bacilis, tas tiks iesēts MacConkey agarā, kur tiek apstiprināta laktozes fermentācija vai nē. Turklāt, lai veiktu oksidāzes testu, tiek pievienots barības agars.

Gadījumā, ja gramā atklājas grampozitīvi kokči, to var subkulturēt uz sāļa mannīta agara un barības agara. Pēdējā tiek veikts katalāzes tests. Visbeidzot, ja tiek novēroti raugi, to sēj uz Sabouraud agara.

Daudzas laboratorijas izvairās no CLED barotnes izmantošanas un urīna paraugu ņemšanai labprātāk izmanto tikai asins agaru, MacConkey un barības vielu agaru.

Sagatavošana

Kolbā ar vienu litru destilēta ūdens izšķīdina 36,2 g CLED agara pulvera. Pēc 5 minūšu stāvēšanas uzkarsē atkārtoti suspendēto agaru, nepārtraukti maisot, lai vārītos 1 minūti.

Pēc tam autoklāvā 15 minūtes sterilizē 121 ° C temperatūrā. Laika beigās to izņem no autoklāva un ļauj atdzist līdz 45 ° C temperatūrai. Pēc tam katrā sterilā Petri traukā pasniedz 15-20 ml.

Plākšņu pasniegšanas procedūra jāveic laminārās plūsmas pārsegā vai Bunsena degļa priekšā, lai izvairītos no piesārņojuma.

Pasniegtās plāksnes atstāj sacietēt, sakārtotas apgrieztā statīvā un līdz lietošanai uzglabā ledusskapī (2–8 ° C).

Sagatavotās barotnes galīgajam pH jābūt 7,3 ± 0,2.

Atsauces

1. Ieteikumi urīnceļu infekcijas mikrobioloģiskai diagnostikai. čil. infektols. 2001; 18 (1): 57-63. Pieejams vietnē: scielo.org.
2. Panchi J. Mikrobu izraisītāja identificēšana, kas izraisa urīnceļu infekcijas pacientiem ar urīnpūšļa kateterizāciju. 2016. bakalaura darbs, lai iegūtu bakalaura grādu klīniskajā laboratorijā. Ambato Tehniskā universitāte. Ekvadora.
3. Britannia laboratorijas. CLED vidēja. Pieejams vietnē: britanialab.com.
4. Renylab laboratorijas. Lietošanas instrukcijas, CLED agars. 2013. gads pieejams vietnē: es.renylab.ind.br.
5. Kultētas laboratorijas. Mikrobioloģijas pamat rokasgrāmata. Pieejams vietnē: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. CLED agara opcija urīna kultivēšanas rutīnā. Perspektīvs un salīdzinošs novērtējums. Diagnosticēt mikrobiolu Inficēt Dis. 1992. gads; 15 (4): 287–90.
7. Garsija P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktiskā klīniskā mikrobioloģija. Kadisas Universitāte, 2. izdevums. UCA publikāciju dienests.