SIMMONSA CITRĀTA AGARS: PAMATOJUMS, SAGATAVOŠANA UN LIETOŠANA - BIOLOĢIJA - 2025

Agars Simmons citrāts tas ir ciets vidēja izmanto kā bioķīmiskos identifikācija testa mikroorganismiem, sevišķi gram - negatīvo nūjiņām. Oriģinālo mediju 1923. gadā izveidoja Kosers.

Koser citrāta barotne sastāvēja no buljona, kas satur nātrija fosfātu, amonija fosfātu, monokālija fosfātu, magnija sulfātu un nātrija citrātu.

A. Dehidrēts Simmons citrāta agara tirdzniecības vide B. Sagatavots Simmons citrāta agars. Avots: A. Foto ieguvis MSc. Marielsa Gil B. Roto2esdios, no Wikimedia Commons

Kā redzams, barotnē vienīgais oglekļa avots ir citrāts, un slāpeklis ir amonija fosfāts, izlaižot olbaltumvielas un ogļhidrātus kā šo elementu avotu, tie parasti atrodas citos barotnēs.

Tāpēc baktērijas, kas inokulētas šajā barotnē, var vairoties tikai tad, ja tās spēj absorbēt oglekli no citrāta. Tests bija pozitīvs, ja barotnē bija duļķainība, tomēr tā trūkums bija tāds, ka varēja rasties nespecifiska duļķainība.

Šo problēmu atrisināja Simmons, pievienojot bromimola zilo un agaru Kosera sākotnējai formulai. Lai arī princips ir vienāds, to interpretē atšķirīgi.

Pamats

Dažām baktērijām ir spēja izdzīvot, ja nenotiek fermentācija vai pienskābes rašanās, un tām jāiegūst enerģija, izmantojot citus substrātus. Šajā testā vienīgais piedāvātais oglekļa avots ir citrāts.

Baktērijas, kas šādos apstākļos spēj izdzīvot, citrātu ātri metabolizē alternatīvā veidā tradicionālajam ceļam, izmantojot trikarbonskābes ciklu vai citrāta fermentācijas ciklu.

Citrāta katabolisms, ko veic baktērijas, satur fermentatīvu mehānismu bez koenzīma A iejaukšanās. Šis enzīms ir pazīstams ar citrināzes (citrāta oksaloacetāta lāzes) vai citrāta desmolāzes nosaukumu. Reakcijai nepieciešams divvērtīgs katjons, kuru tādā gadījumā piegādā magnijs.

Reakcijā rodas oksaloacetāts un piruvāts, kas vidējā sārmainā pH vidē veido organiskās skābes, kas veidojas, izmantojot slāpekļa avotu. Šīs organiskās skābes izmanto kā oglekļa avotu, veidojot karbonātus un bikarbonātus, vēl vairāk alkalizējot vidi.

Sēšanas režīms

Simmonsa citrāta barotnei jābūt viegli inokulētai zivju astei, izmantojot taisnu cilpu vai adatu, un inkubēt 24 stundas 35-37 ° C temperatūrā. Pēc laika rezultāti tiek novēroti.

Sēšana tiek veikta tikai uz agara virsmas. Neveiciet punkciju.

Interpretācija

Ja barotne paliek sākotnējā krāsā (zaļā krāsā) un nav redzamu pieaugumu, tests ir negatīvs, bet, ja barotne kļūst zila, tas norāda uz sārmainu produktu klātbūtni, ko nosaka ar pH indikatoru. Šajā gadījumā tests ir pozitīvs.

Citrāts (+) un (-). Avots: MSc. Marielsa gil

Tas notiek tāpēc, ka, ja baktērija izmanto citrāta oglekli, tā arī spēj uzņemt amonija fosfāta slāpekli, ar kuru tā izdala amonjaku, alkalizējot barotni.

No otras puses, ja barotnē tiek novērota baktēriju augšana, bet krāsas izmaiņas nemainās, tests ir jāuzskata arī par pozitīvu, jo, ja notiek augšana, tas nozīmē, ka baktērijas spēja izmantot citrātu kā oglekļa avotu, lai arī pH šobrīd nemainās (dažreiz tas var aizņemt laiku).

Ja ir kādas šaubas par galīgās krāsas interpretāciju, to var salīdzināt ar citrāta mēģeni, kas nav inokulēta.

Sagatavošana

Vienam litram ūdens nosver 24,2 g dehidrētas barotnes. Sajauciet un ļaujiet tai atpūsties apmēram 5 minūtes. Pabeidziet barotnes izšķīšanu, karsējot 1 vai divas minūtes, bieži kratot.

Ielej 4 ml mēģenēs un 15 minūtes autoklāvā 121 ° C temperatūrā. Izkāpjot no autoklāva, ar balsta palīdzību nolieciet tā, lai agars sacietētu flautas knābja formā ar nelielu bloku vai dibenu un vairāk slīpi.

Citrāta barotnes galīgais pH ir 6,9 (zaļā krāsā). Šī barotne ir ļoti jutīga pret pH izmaiņām.

Ja pH ir 6 vai zemāks, barotne kļūst dzeltena. Baktēriju testā šī krāsa netiek novērota.

Ja pH ir 7,6 vai augstāks, vide kļūst dziļi Prūsijas zila.

Izmantojiet

Simmonsa citrāta agaru izmanto noteiktu mikroorganismu, īpaši baktēriju, kas pieder Enterobacteriaceae ģimenei, un citu baktēriju, kas nesatur glikozi, fermentēšanai.

Avots: Koneman E, Allens S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.

Noslēguma domas

Simmonsa citrāta vide ir ļoti delikāts pārbaudījums, jo, ja tiek pieļautas noteiktas kļūdas, var iegūt nepatiesus pozitīvus rezultātus.

Jāuzmanās šādi:

Sējmašīna

Nevajadzētu izgatavot ļoti biezu vai piekrautu baktēriju sējmateriālu, jo tas var izraisīt dzeltenās krāsas dzeltenās krāsas krāsas veidošanos stādīšanas vietā, neietekmējot pārējo barotni, bet tas var likt domāt, ka notiek augšana. Tas nenozīmē testa pozitivitāti.

Arī biezs sējmateriāls var radīt kļūdaini pozitīvu, jo mirstošo baktēriju šūnu sienās sagatavotie organiskie savienojumi var atbrīvot pietiekami daudz oglekļa un slāpekļa, lai pagrieztu pH indikatoru.

Tāpēc ideāli ir sēt, izmantojot adatu, nevis platīna rokturi, lai izvairītos no liekā materiāla uzņemšanas.

Sēj

No otras puses, kad tiek iesēts bioķīmisko testu kopums attiecīgā mikroorganisma identificēšanai, ir svarīgi, lai citrāta tests būtu pirmais, kas inokulēts, lai izvairītos no olbaltumvielu vai ogļhidrātu pārnešanas no citas barotnes.

Šādos apstākļos ir iespējams iegūt kļūdaini pozitīvu rezultātu, jo jebkura no šīm vielām, kas ieviesta kļūdas dēļ, tiks metabolizēta un izraisīs pH izmaiņas.

Vēl viens veids, kā izvairīties no vielu pārnešanas, ir kārtīgi sadedzināt cilpu un veikt jaunu sējmateriālu starp vienu un otru testu.

Pieskaroties kolonijai, ir jāveic arī piesardzība, lai veiktu sējumu, jo iepriekšminētā skaidrojuma dēļ ir jāizvairās no agara daļas vilkšanas no kultūras, no kuras nāk baktērijas.

Šajā ziņā Matsens, Šeriss un Brensons iesaka pirms citrāta testa inokulēšanas sējmašīnu atšķaidīt fizioloģiskā šķīdumā, lai izvairītos no citu oglekļa avotu pārnešanas.

Krāsas intensitāte

Jāņem vērā, ka pēc testa pozitīvās krāsas intensitāte var atšķirties atkarībā no tirdzniecības ēkas.

Turklāt ir mikroorganismi, kuru pozitīvs rezultāts ir 24 stundas, bet ir arī citi celmi, kuru pH izmaiņas prasa 48 stundas vai vairāk.

Atsauces

1. Mac Faddin J. (2003). Bioķīmiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. ed. Redakcija Panamericana. Buenosairesa. Argentīna.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
3. Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
4. BD laboratorijas. BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015.Pieejams vietnē: bd.com
5. Britannia laboratorijas. Simmonsa citrātu agars. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
6. Valtek diagnostikas laboratorijas. Simmonsa citrātu agars. 2016.Pieejams vietnē: andinamedica.com.