ŠOKOLĀDES AGARS: PAMATS, LIETOŠANAS VEIDI UN PAGATAVOŠANA - BIOLOĢIJA - 2025

Šokolāde agars ir ciets barotni, kas bagātināts, non - selektīvs un non - diferenciāļa. To galvenokārt izmanto mikroorganismu izolēšanai, kas prasa uzturvērtību, kaut arī tajā var augt jebkura veida baktērijas.

Šī iemesla dēļ tā lietderība palielinās, īpaši sējot paraugus, kas parasti ir sterili, piemēram, CSF un locītavu šķidrumu. Lai gan tas ir iekļauts arī izvēlētajos polimikrobiālo paraugu sēšanas līdzekļos, tomēr šajos gadījumos ir nepieciešams pievienot antibiotikas, kas nomāc vienlaikus esošo floru.

Šokolādes agars ar baktēriju augšanu

Šai barotnei ir raksturīga brūna krāsa, kas ir ļoti līdzīga šokolādei, līdz ar to arī tās nosaukums. Preparāts ir ļoti līdzīgs asins agaram, tikai šajā gadījumā asinis ir jāuzsilda, lai sarkanās asins šūnas noārdītos.

Tā sagatavošana, tāpat kā asiņu agars, ir ļoti delikāta, jo ir viegli piesārņota. Šī iemesla dēļ daudzas laboratorijas dod priekšroku iegādāties šo nesēju, ko jau ir sagatavojuši komerciāli uzņēmumi, kas garantē tā kvalitāti.

Pamats

Šī barotne sastāv no uzturvielām bagāta agara pamatnes un sakarsētām asinīm. Sarkano asins šūnu hemolīze nodrošina faktoru X (hemīns) un faktoru V (NAD), kas nepieciešami dažu mikroorganismu, piemēram, Haemophilus ģints, augšanai. Tas ir ļoti noderīgs arī Neisserias sp.

Līdzīgi kā asiņu agars, atkarībā no vajadzības par bāzes agaru var izmantot dažādas barotnes. Starp izmantotajiem barotnēm ir smadzeņu sirds infūzija un triptazes sojas agars, lai gan visieteicamākie ir Kolumbijas agars, Müellers Hintons, GC agars un Thayer Martin agars.

Daži šokolādes agara varianti ietver tirdzniecībā pieejamu stiprinātu papildinājumu ar nosaukumu Isovitalex vai Polivitex.

Šīs piedevas satur B ₁₂ vitamīnu , L-glutamīnu, adenīnu, guanīna hidrohlorīdu, p-aminobenzoskābi, nikotinamīda adenīna dinukleotīdu (NAD), tiamīna pirofosfātu, dzelzs nitrātu, tiamīna hidrohlorīdu, cisteīna hidrohlorīdu, L-cistīnu un glikozi.

Ir svarīgi atzīmēt, ka šokolādes agars ir vairāk bagātināts nekā asiņu agars, taču tas neļauj novērot hemolīzes modeļus.

Lietojumprogrammas

Avots: pixnio.com. Autors:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Šokolādes agars, kas pagatavots ar Kolumbijas agaru

Šajā barotnē ir aizkuņģa dziedzera kazeīna un sirds sagremojums, gaļas peptiskais sadalījums, nātrija hlorīds, agars, rauga ekstrakts un kukurūzas ciete. Tas ir arī bagāts ar vitamīniem, minerālvielām un neaizvietojamām aminoskābēm.

Šī karsētā asins bāze ir ideāli piemērota Neisseria ģints baktēriju izolēšanai. No otras puses, ja barotnei tiek pievienots papildinājums Brucella, minēto mikroorganismu var izolēt. Rezultāti tiek uzlaboti, izmantojot zirga asinis.

Šokolādes agars, kas pagatavots ar GC bāzes agaru (gonokokiem)

Šajā barotnē ir peptoni, kukurūzas ciete, vienpakāpju un divbāzu buferi, nātrija hlorīds un agars.

Lielākajai daļai komerciāli sagatavotu šokolādes agara noformējumu ir šī bāze, un tie nesatur uzkarsētas asinis, bet drīzāk sintētisku hemīna maisījumu un augšanas faktoru, vitamīnu, minerālvielu, aminoskābju, V faktora un glikozes ķīmisku papildinājumu.

Šokolādes agars, kas pagatavots ar Müeller Hinton agaru

To lieto, lai pārbaudītu smalko mikroorganismu, piemēram, Streptococcus pneumoniae, jutīgumu pret antibakteriāliem līdzekļiem, izmantojot 5% uzkarsētas aitu asinis.

To izmanto arī Neisserias un Haemophilus primārajai izolēšanai, bet konkrētajā Haemophilus izolācijas gadījumā priekšroka tiek dota zirga asinīm, jo ​​tā ir bagātīgs X un V faktora avots.

No otras puses, ja sējamais paraugs nāk no nesterila apgabala, ieteicams pievienot antibiotikas, lai kavētu normālu apgabala floru.

Elpceļu paraugu piemērs, ja ir aizdomas par Haemophilus ģints baktērijām, bacitracīnu izmanto, lai kavētu Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus un saprofītisko Neisserias augšanu.

Dzimumorgānu dziedzera paraugu gadījumā, ja ir aizdomas par Haemophilus ducreyi, veiksmīgi izmantots šokolādes agars, kas pagatavots šādi: Müeller - Hinton agars ar 5% šokolādes zirga asinīm, 1% Isovitalex bagātināšanu un 3 μg / ml vankomicīna.

Šokolādes agars, kas pagatavots ar Thayer Martin agaru

Šī barotne ir īpaša Neisseria gonorrhoeae izolēšanai. Tam ir jāsatur antibiotikas, lai kavētu pavadošo floru. Tiek izmantotas jēra asinis.

Sagatavošana

Jums vajadzētu redzēt norādes par izmantojamā bāzes agara sagatavošanu. Tie ir atrodami dehidrētās barotnes trauka aizmugurē. Parasti tie apraksta, cik daudz jums jāsver, lai sagatavotu litru barotnes.

Precīzi nepieciešamo daudzumu var pagatavot laboratorijā, tas var būt vairāk vai mazāks par litru.

Aprēķini

Lai aprēķinātu, cik daudz svērt, lai sagatavotu vēlamo tilpumu, tiek izmantots trīs noteikums. Piemērs:

Ja par 1 litru ir nepieciešams nosvērt 40 gr un laboratorijai nepieciešami 800 ml, teikts:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

Formula būs šāda:

X = 32 gr (daudzums, kas jāsver par 800 ml).

Nosver un izšķīdina

Nepieciešamo daudzumu nosver un ievieto kolbā ar ūdeni.

Uzkarsē virs mērenas uguns un viegli ar rotācijas kustībām sajauc, līdz dehidrētā barotne pilnībā izšķīst, ļaujot tai vārīties 1 minūti.

Sterilizējiet

Kolbu ievieto autoklāvā, lai 20 minūtes sterilizētu barotni 121 ° C temperatūrā.

Asins agregāts

Izkāpjot no autoklāva, ļauj nostāvēties, līdz barotnes temperatūra ir aptuveni no 56 līdz 70 ° C, lai ievietotu asinis un samaisa, līdz barotne kļūst brūna.

Ja pievienojat piedevas, šis ir laiks to darīt. Pēc tam samaisiet un pasniedziet 20 ml katrā sterilajā Petri traukā.

Visa procedūra jāveic laminārā plūsmas pārsegā vai ap Bunsena degli.

Ļaujiet nostāvēties, līdz tie sacietē, un uzglabāt apgriezti ledusskapī.

Vēl viens veids, kā pagatavot šokolādes agaru, neizmantojot asinis

Bāzes barotni sagatavo, kā aprakstīts iepriekš, komerciāli iegūto dehidrēto hemoglobīnu izšķīdina un sterilizē autoklāvā.

Abiem šķīdumiem ļauj atdzist līdz 50 ° C, tos pievieno un pievieno papildinājumu. Samaisa aseptiskos apstākļos un pēc tam pasniedz sterilos Petri traukos.

QA

Ir svarīgi, lai asinis tiktu novietotas norādītajā temperatūrā, jo tas ir ideāli sarkano asins šūnu sašķidrināšanai un vienlaikus V faktora uzturēšanai, kas ir jutīgs pret temperatūru.

Uz agara virsmas nedrīkst palikt burbuļi. No katras 100 plākšņu partijas vienu vai divas plāksnes 24 stundas jāinkubē krāsnī 37 ° C temperatūrā, lai pārbaudītu to sterilitāti.

Lai iegūtu labākos rezultātus, neilgi pēc pagatavošanas jāizmanto šokolādes agars.

Kontroles baktēriju celmi jāuztur laboratorijā, lai novērtētu svaigas barotnes efektivitāti galveno klīniski nozīmīgo mikroorganismu izveicībai.

Atsauces

1. Garsija P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktiskā klīniskā mikrobioloģija. Kadisas Universitāte, 2. izdevums. UCA publikāciju dienests.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Argentīna. Redakcija Panamericana SA
3. Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. (5. izd.). Argentīna, Panamericana SA redakcija
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. GC-Biocen Agar bāzes barotnes izmantošanas iespējamība mikrobioloģijas laboratorijā. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Pieejams vietnē: scielo.sld.
5. Wikipedia līdzautori. Šokolādes agars. Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2018. gada 17. decembris, 19:54 UTC. Pieejams: en.wikipedia.org.