Cetrimīds agars vai Cetrimīds ir selektīvs ciets barotni, kas paredzētas izolācijai Pseudomonas aeruginosa. Tas ir balstīts uz raksturīgo šīs sugas pigmentu ražošanas parādīšanu, un tas tika izgatavots no Tech agara modifikācijas, kuru izveidoja King, Ward un Raney.
Sākotnējā formula saturēja magnija hlorīda, kālija sulfāta sāļus, želatīna šķelšanu aizkuņģa dziedzerī un agara agaru. Formulas modifikācija sastāvēja no cetrimīda (cetil-trimetil-amonija bromīda) un glicerīna pievienošanas.
Cetrimīda agars ar sēklām Pseudomonas aeruginosa Avots: BiotechMichael, no Wikimedia Commons
Cetrimīda agars ir noderīgs paraugu mikrobioloģiskajiem pētījumiem, ja ir aizdomas par Pseudomonas aeruginosa klātbūtni. Jāatzīmē, ka šī baktērija ir ārkārtīgi svarīga, jo, lai arī tā ir daļa no normālas vides mikrobiotas, tā bieži uzvedas kā oportūnistisks patogēns.
Šī iemesla dēļ viena no biežākajām šī dīgļa izraisītajām problēmām ir nozokomiālās infekcijas, tas ir, tās, kas notiek slimnīcas vidē, uzbrūkot pacientiem, kuriem ir nomākta imūnsistēma.
No otras puses, šī mikroorganisma afinitātes dēļ ar mitrumu visneaizsargātākie piesārņojuma mērķi ir: elpošanas palīglīdzekļi, zāles, smidzinātāji, ūdens avoti, gaisa kondicionieri, dezinfekcijas līdzekļi, ziepju šķīdumi, injekciju šķīdumi, atvērtas brūces , katetri, urīnceļu kanāli, cita starpā.
Šajā ziņā cetrimīda agars ir noderīgs, lai veiktu iepriekš minēto elementu mikrobioloģisko kontroli un kultūras.
Pamats
Cetrimīda agara pamatā ir barotnes spēja veicināt P. aeruginosa augšanu, stimulēt tā pigmentu ražošanu un, savukārt, kavē citu mikroorganismu augšanu.
Šīs īpašības ir saistītas ar katras tā sastāvdaļas darbību. Klāt esošais želatīna peptons kalpo kā slāpekļa, vitamīnu un minerālvielu avots. Glicerīns vai glicerīns darbojas kā oglekļa avots.
No otras puses, cetrimīds (cetil-trimetil-amonija bromīds) ir viela, kas kavē baktēriju, izņemot P. aeruginosa, augšanu, ieskaitot citas sugas, kas pieder pie vienas ģints.
Inhibēšana notiek tāpēc, ka ceramīds darbojas kā katjonu mazgāšanas līdzeklis, spējot destabilizēt plazmas membrānu lielākajai daļai baktēriju, izņemot P. aeruginosa un dažas citas, kurām izdodas izdzīvot.
No otras puses, tas satur magnija hlorīdu un kālija sulfātu. Šie savienojumi stimulē fenotipisko ekspresiju, kas saistīta ar Pseudomonas aeruginosa spēju ražot dažādus pigmentus, to skaitā: piocianīnu, pyoverdin, pyorrubin, pyomelanin un fluoresceīnu. Visbeidzot, tas satur agara agaru, kas tam piešķir stabilu konsistenci.
Interpretācija
Šajā agarā iegūto augšanu interpretē šādi:
Apaļo, gludo koloniju ar regulārām malām novērošana ar zili zaļganu, zaļu, brūnu vai sarkanīgu pigmentu veidošanos, kā arī augļu aromāta (aminoacetofenona) izstarošanu ir paredzams rezultāts šīs baktērijas klātbūtnei minētajā paraugā.
No otras puses, spilgti zaļgani dzeltena pigmenta novērošana kolonijās norāda uz P. aeruginosa, kad plate tiek pakļauta ultravioletās gaismas iedarbībai.
P. aeruginosa koloniju fluorescence cetrimīda agarā ultravioletā gaismā.
Jāatzīmē, ka katra novērotā krāsa rodas īpaša pigmenta ražošanas dēļ. Zili zaļš pigments atbilst piocianīna ražošanai, zaļš - līdz pyoverdīnam, sarkanīgs - līdz pyorubīnam, brūns - līdz pyomelanine un spilgti dzeltenīgi zaļš fluorescence UV gaismā līdz fluoresceīnam.
Sagatavošana
Nosver 43 g dehidrētas barotnes un izšķīdina destilētā ūdenī. Pievienojiet 10 ml glicerīna. Pārnes maisījumu uz siltuma avotu. Ļaujiet tam vārīties dažas minūtes līdz pilnīgai izšķīdināšanai.
Autoklāva 15 minūtes 121 ° C temperatūrā. Ļauj nostāvēties un pasniedz sterilos Petri traukos, kad temperatūra ir aptuveni 50 ° C.
Ļauj sacietēt, apgrieziet, kārtojiet plāksnēs un līdz lietošanai uzglabā ledusskapī. Cetrimīda agara plāksnes pirms sēšanas jāizņem no ledusskapja un ļauj tām sasilt līdz istabas temperatūrai.
Barotnes galīgajam pH jābūt 7,2 ± 0,2.
Dehidrētās barotnes krāsa ir bēša, un preparāts ir necaurspīdīgs balts.
Lietojumprogrammas
Cetrimīda agarā var sēt visu veidu paraugus, kuros ir aizdomas par Pseudomonas aeruginosa klātbūtni. Tāpēc tas ir noderīgs visās mikrobioloģijas jomās (vides, rūpniecības, klīnikā, ūdenī un pārtikā).
Ir ļoti svarīgi analizēt slimnīcu vidi un tādējādi spēt piemērot koriģējošus pasākumus, jo šis mikroorganisms sasniedz pacientus ar inficētām iekārtām, zālēm, šķīdumiem un piederumiem, ko pacients lieto.
Tādā veidā mikroorganisms var inficēt imūnsistēmas nomāktu pacientu apakšējos elpošanas ceļus, urīnceļus un brūces.
P. aeruginosa koloniju skaitīšanu var veikt arī mikrobu ierobežojuma testos.
Sēj
Cetrimīda agaru var izmantot kā galveno kultūru. Plāksne tiek inokulēta vienā no tās malām, un no turienes tā izsmelšanas laikā tiek izplatīta uz pārējo plāksnes daļu. Šķidruma paraugus var sēt ar virsmu ar drigalski lāpstiņu.
Plāksnītes inkubē aerobos apstākļos 37 ° C temperatūrā 24 stundas.
Ierobežojumi
-Neliels procents Pseudomonas aeruginosas celmu nerada piocianīnu, tāpēc var interpretēt kļūdaini negatīvu.
- Šajā barotnē tiek inhibētas dažas klīniski nozīmīgas Pseudomonas sugas.
- Neraugoties uz aprakstītajiem Pseudomonas aeruginosa raksturlielumiem, tie jāapstiprina ar papildu identifikācijas testiem. Tests, kuru nedrīkst palaist garām, ir oksidāzes tests, tam ir jābūt pozitīvam.
-Dažas Enterobacteriaceae var augt šajā barotnē un attīstīt dzeltenu pigmentu, taču tas atšķiras no Pseudomonas aeruginosa ar to, ka tad, kad plate tiek pakļauta ultravioletai gaismai, nav fluorescences.
- Serratia marcescens izdodas izstrādāt un ražot rozā pigmentu.
-Ja ar cetrimīda agaru apsētās plāksnes kādu laiku tiek pakļautas istabas temperatūrai, P. aeruginosa celmi var zaudēt ultravioletā starojuma laikā novēroto fluorescenci, tomēr īpašums tiek atjaunots, ja tos atkal inkubē 37 ° C.
QA
Lai analizētu cetrimīda agara labos rādītājus, var izmantot tādus kontroles celmus kā: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 un Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Gaidāmie rezultāti ir:
- Labi aug P. aeruginosa, ar zili zaļu pigmentu un pozitīvu fluoresceīnu.
- Daļēji vai pilnībā tiks kavēta S. maltophilia un S. aureus.
- Paredzams, ka Escherichia coli tiks pilnībā kavēta.
Atsauces
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Pseudomonas aeruginosa klīnisko izolātu fenotipiskais un seroloģiskais raksturojums. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Conda Pronadisa laboratorijas. Cetrimīda agara bāze. 2014.Pieejams vietnē: condalab.com
- Britannia laboratorijas. Cetrimīda agars. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
- BD laboratorijas. BD Pseudosel agars (Cetrimīda agars). 2013.Pieejams vietnē: bd.com
- Fransisko Soria Melguizo laboratorija, CA, Cetrimide agars. 2009.Pieejams vietnē: http://f-soria.es