ŽULTS ESKULĪNA AGARS: PAMATOJUMS, SAGATAVOŠANA UN LIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Žults esculin agars ir selektīvs, un starpība vidēji cieta kultūra. To izmanto kā diagnostikas testu, lai noteiktu noteikta mikroorganisma spēju augt barotnē, kas satur žulti, kā arī sadalīt glikozīda eskulīnu eskuletīnā un glikozē.

Šo diagnostisko testu izmanto, lai atšķirtu Streptococcus ģints sugas, kas pieder D grupai (žults eskulīna pozitīvs), no citām Streptococcus grupām, kuras uz šo testu reaģē negatīvi.

Žults eskulīna agara plāksne, kas iesēta ar Enterococcus celmu (testa rezultāts ir pozitīvs). Avots: nav sniegts mašīnlasāms autors. Filipinjl pieņēma (pamatojoties uz autortiesību pretenzijām).

Jāatzīmē, ka daži no viridans grupas Streptococcus var hidrolizēt eskulīnu, bet nespēj augt žults klātbūtnē 40% koncentrācijā, tāpēc šajā barotnē šīs grupas reakcija ir negatīva.

No otras puses, žults eskulīna barotne ir noderīga arī Listeria monocytogenes vai Aerococcus sp sugu diagnozei, jo šie mikroorganismi ir žults eskulīna pozitīvi.

Esculin žults agars sastāv no peptona, gaļas ekstrakta, vērša žults, esculin, dzelzs citrāta, agara un destilēta ūdens. Dažās komercmājās barības sastāvā ir nātrija azīds.

Barotni var pagatavot laboratorijā, ja jums ir visi savienojumi atsevišķi, vai arī to var pagatavot no komerciālās dehidrētās barotnes.

Pamats

Žults eskulīna barotnē ir peptoni un gaļas ekstrakts, abi savienojumi nodrošina nepieciešamās barības vielas mikroorganismu augšanai.

Tas satur arī eskulīnu; Šis savienojums ir glikozīds, ko veido vienkārša monosaharīda (glikozes) savienojums ar savienojumu, ko sauc par 6,7-dihidroksikumarīnu vai esculetin (aglucone), kas savienots ar acetāla vai glikozīda saiti.

Pārbaudes pamatā ir parādīšana, vai baktērijas spēj hidrolizēt eskulīnu. Ja tas notiek, eskulīns sadalās eskuletīnā un glikozē. Esculetina reaģē ar barotnē esošo dzelzi, veidojot tumši brūnu, gandrīz melnu savienojumu.

Tas nozīmē, ka dzelzs citrāts darbojas kā reakcijas attīstītājs. Šī īpašība padara žults eskulīna agaru par diferenciālu barotni.

Žults no savas puses ir inhibitors, kas novērš dažu mikroorganismu augšanu, tāpēc baktērijai, pirms sadalīt eskulīnu, jāspēj augt žults klātbūtnē. Tādēļ šo barotni uzskata par selektīvu.

Baktērijas, kas šajā vidē var attīstīties, galvenokārt ir tās, kas dzīvo zarnu vidē.

Šajā ziņā daži komercuzņēmumi barotnei pievieno nātrija azīdu, lai vēl vairāk kavētu enterālo gramnegatīvo baktēriju augšanu, palielinot barotnes selektivitāti Streptococcus augšanai.

Visbeidzot, agars barotnei piešķir cietu konsistenci, un savienojumu šķīdinātājs ir ūdens.

Sagatavošana

Žults eskulīna agara sagatavošana mājās

Svērt:

5 g peptoni

3 g gaļas ekstrakta

40 g liellopa žults

1 g eskulīna

0,5 g dzelzs citrāta

15 g agara

1000 ml destilēta ūdens

Pievienojot nātrija azīdu, sver un pievieno maisījumam 0,25 g / litrā.

Izšķīdina sastāvdaļas litrā destilēta ūdens, karsē, līdz savienojumi ir pilnībā izšķīduši. Sadaliet 5 ml 16 x 125 mm skrūvējamā vāciņa mēģenēs. Autoklāva 15 minūtes 121 ° C, 15 mārciņas spiediena.

Izņem no autoklāva un noliec mēģenes uz balsta, lai agars sacietētu platā flautas knābā.

Līdz lietošanai uzglabāt ledusskapī. Pirms sēšanas uzkarsē līdz istabas temperatūrai.

Var sagatavot arī žults eskulīna agara plāksnes; šajā gadījumā viss maisījums tiek autoklāvēts kolbā un pēc tam sadalīts sterilos Petri traukos. Ļaujiet tām sacietēt un uzglabāt ledusskapī.

Barotnes pH jābūt 6,6 ± 0,2.

Žults eskulīna agara sagatavošana no komerciālas barotnes

Nosver ieliktnī norādīto daudzumu. Dažādās biznesa mājās tas var atšķirties. Pēc tam rīkojieties tāpat, kā aprakstīts iepriekš.

Barotnes pH jābūt 6,6 ± 0,2. Dehidrētās barotnes krāsa ir gaiši bēša, un sagatavotā barotne ir tumši dzintara.

Komerciāla žults eskulīna vide. Avots: Autores uzņemts foto MSc. Marielsa Gil.

Lietojumprogrammas

Žults eskulīna barotne galvenokārt tiek izmantota, lai atšķirtu D grupas streptokoku (žults eskulīna pozitīvs) no pārējām Streptococcus grupām (žults eskulīna negatīvs).

Apvienojot hipersaltātu buljona augšanas testu ar žults eskulīna testu, var identificēt īpašu D grupas streptokoku grupu, ko sauc par Enterococcus.

Šī īpašā Streptococcus grupa pieder iepriekšminētās ģints D grupai, un tie, tāpat kā pārējie D grupas locekļi, spēj hidrolizēt eskulīnu žults klātbūtnē, bet tie ir arī spējīgi attīstīties hipersāļotā barotnē (BHI ar hlorīda 6,5% nātrijs), īpašība, kas rada atšķirību.

Tāpēc streptokokus, kas hidrolizē esculin žulti, bet neaug hipersaltā buljonā, sauc par D grupas streptokokiem, kas nav enterokoki.

Sēj

Barotni vēlams inokulēt no tīra Todd-Hewitt 24 stundu buljona.

Pievienojiet 2 pilienus barotnes virsmai ar Pasteur pipeti un izklājiet barotnē ar platīna cilpu.

Inkubē 48 stundas 35 ° C temperatūrā, kamēr ir ievērots inkubācijas laiks, to var uzraudzīt, lai redzētu, vai ir pozitīva reakcija. Ja laika beigās reakcija paliek negatīva, to var inkubēt līdz 72 stundām.

Interpretācija

Pozitīva reakcija : flautas knābī parādās tumši brūna, gandrīz melna krāsa (mēģenes testa gadījumā) vai agara melna nokrāsa ap kolonijām (plāksnes testa gadījumā).

Negatīva reakcija : barotne nav melna vai mazāk nekā pusē mēģenes pēc 72 stundu inkubācijas ir melns izskats. No otras puses, baktēriju augšana barotnē bez melnas krāsas parādīšanās jāuzskata par negatīvu testu.

QA

Lai novērtētu barotnes kvalitāti, pozitīvajai kontrolei jābūt pieejamai Enterococcus faecalis ATCC 29212 celmam, bet kā negatīvu kontroli - Streptococcus celmam, kas nepieder D grupai.

Ierobežojumi

-Mēdiji, kas nesatur nātrija azīdu, ļauj augt zarnās esošajām gramnegatīvajām baktērijām. Daži no tiem var melnināt vidu.

- Dažās tirdzniecības mājās ir pievienota zema žults koncentrācija (10%), un šī iemesla dēļ daži Streptococcus, kas nepieder D grupai, var attīstīties barotnē un hidrolizēt eskulīnu, kas var radīt kļūdas interpretācijā.

Atsauces

1. Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
3. Mac Faddin J. (2003). Bioķīmiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. ed. Redakcija Panamericana. Buenosairesa. Argentīna.
4. Lab. Britannia. Eskulīna žults ar azīda agaru. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
5. "Žults eskulīna agars." Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2017. gada 22. augusts, 17:30 UTC. 2019. gada 22. aprīlis, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Žults eskulīna agara slānis. 2015.Pieejams vietnē: bd.com
7. Neogēnu laboratorijas. Žults eskulīna agars. Pieejams vietnē: foodsafety.neogen.com