Agars biggy ir cieta vidēja selektīvs un atšķirīgu kultūru. Tas bija paredzēts, lai izolētu un palīdzētu identificēt galvenās Candida sugas. Tās nosaukums BIGGY nāk no akronīma angļu valodā Bismuth Glucose Glycine Yeast.
Sākotnējo formulu izveidoja Nickerson, tāpēc šo barotni sauc arī par Nickerson agaru. Pašlaik to veido rauga ekstrakts, glicīns, dekstroze, amonija citrāts, bismuta citrāts, nātrija sulfīts un agars.
BIGGY agara grafiskais attēlojums. Avots: Flickr.com
BIGGY agars ir formulēts kompleksu C. albicans, C. tropicalis, C. krusei un C. kefyr sugu diferenciācijai, bet aug arī citas sugas, piemēram, Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum. un Saccharomyces cerevisiae.
Tam ir laba jutība un specifiskums, tomēr, salīdzinot ar citiem datu nesējiem ar līdzīgu funkciju, tas ir otrajā vietā, pārspējot CHROMagar. Šī iemesla dēļ daudzas laboratorijas dod priekšroku pēdējiem, kaut arī tas ir daudz dārgāks.
Būtu skaidri jānosaka, ka BIGGY agara, kā arī citu līdzīgu līdzekļu izmantošana palīdz ātri uzskatīt iespējamo, bet nekad apstiprinošo. Tāpēc ir jābūt pieejamām papildu identifikācijas metodēm; piemēram, Vitek 32 un API 20 identifikācijas sistēmas.
Pamats
BiGGY agars tiek uzskatīts par daļēji selektīvu barotni raugu, īpaši Candida ģints, izolēšanai, lai arī var augt citas ģints.
Tā ir arī diferenciāla vide, jo atkarībā no iesaistītajām sugām tiks novērotas atšķirīgas īpašības pēc izskata, krāsas, formas un lieluma. Tas tiek uzskatīts par hromogēnu barotni dažādu krāsu attīstības dēļ kolonijās.
Rauga koloniju krāsa ir saistīta ar bismuta sulfīta klātbūtni agarā. Nikkersons saprata, ka Candida ģints raugi ekstracelulāri samazina bismuta sulfītu, pārveidojot to par bismuta sulfīdu (nešķīstošu melnu vielu). Tā rezultātā veidojas gaiši brūnas līdz melnas kolonijas.
Šis agars satur rauga ekstraktu un dekstrozi, kas nodrošina pamata uzturvielu un enerģijas avotu rauga attīstībai. Glicīns ir rauga augšanas stimulants, savukārt tas kavē noteiktu baktēriju augšanu.
Šajā pašā nozīmē amonija un bismuta citrāts, kā arī nātrija sulfīts darbojas kā baktēriju augšanas inhibitori. Agars ir līdzeklis, kas nodrošina vidēju cietu konsistenci.
Sagatavošana
Nosver 45 g dehidrētas barotnes un izšķīdina litrā destilēta ūdens. Maisījumu krata un karsē, vārot 1 minūti līdz pilnīgai izšķīdināšanai. Šī barotne nav autoklāvējama.
Pēc atdzesēšanas ūdens vannā līdz aptuveni 45 ° C ielej 20 ml uz steriliem Petri traukiem.
Dehidrētās barotnes krāsa ir dzeltenīgi pelēka, un sagatavots ir dzeltenīgi balts gēls, kurā var novērot nelielas flokulējošas nogulsnes.
PH jābūt 6,8 ± 0,2.
Sagatavotā barotne jāuzglabā ledusskapī (4 ° C) un jāsargā no gaismas. Tā kā tā ir vide, kuru nevar autoklāvot, tā ir jāizmanto pēc iespējas ātrāk. To ieteicams lietot pirms 3 dienām pēc pagatavošanas.
Izmantojiet
Plāksnes inkubē istabas temperatūrā (25 ° C) 24, 48 un 72 stundas, un inkubācijas laiku var pagarināt līdz 5 dienām.
Katrai Candida sugai ir noteiktas īpašības, kas padara tās atšķirīgas no citām. Barotnes ražotāji katrai sugai apraksta šādas īpašības:
-Candida albicans komplekss: uz šī agara attīstās kā gludas, apaļas, brūnas vai melnas kolonijas ar nelielu micēlija apmali. Izņemot to, ka tumšā krāsa neizkliedējas līdz vidum.
-Candida tropicalis: gaišas, mazas, tumši brūnas kolonijas ar melnu centru un nelielu micēlija apmali. Pēc 72 stundu inkubācijas tumšā krāsa izkliedējas pa vidu, kas ir raksturīga šai sugai.
-Candida krusei attīstās lielas, plakanas, rupjas izskata kolonijas ar brūnu līdz melnbaltu apmali.
-Candida parakrusei: vidēja lieluma kolonijas, lielākoties raupjas, plakanas. Krāsa var mainīties no spilgti tumši sarkanbrūna līdz gaiši sarkanbrūnai. Koloniju robežai ir plašs, dzeltenīgs micēlijs.
-Candida stellatoidea: attīstās vidējas, plakanas kolonijas, tumši brūnas, gandrīz melnas. Mycelial attīstība ir ļoti maza.
2003. gadā Yücesoy un Marol veiktais pētījums parādīja, ka CHROMagar barotnei ir labāka jutība un specifiskums dažādu Candida sugu diferenciācijai un identificēšanai nekā BIGGY agaram.
QA
Sterilitātes kontrolei neinokulētās plates inkubē 25 ° C temperatūrā tumsā no 24 līdz 48 stundām, paredzams, ka nekāda veida augšana vai krāsas maiņa nenotiek.
Barotnes kvalitātes kontrolei ieteiktie ATCC celmi ir:
Candida albicans ATCC 60193 komplekss, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Visos no tiem sagaidāma augšana, kā aprakstīts iepriekš.
Var izmantot arī šādus celmus:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 un Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Pirmajos divos ir sagaidāma pilnīga inhibīcija, bet daļēji audzēšanas gadījumā kolonijas būs krēmkrāsas.
Paredzams, ka S. aureus gadījumā tas tiks pilnībā nomākts, bet, ja tas aug daļēji, tā kolonijas ir baltas.
Ierobežojumi
Dažas baktērijas spēj augt šajā barotnē un var pat kļūt tumšā krāsā, imitējot Candida koloniju, bet, nosmērējot koloniju un novērojot to mikroskopā, to viegli izmet.
Tabula: Dažu raugu koloniju raksturojums uz BIGGY agara saskaņā ar Yücesoy M un Marol S. darbu.
Avots: Yücesoy M, Marol S. CHROMAGAR candida un BIGGY agara darbība rauga sugu identificēšanai. Ann Clin mikrobiol antimikrobi. 2003; 2 (8): 1-7
Atsauces
- Yücesoy M, Marol S. CHROMAGAR candida un BIGGY agara darbība rauga sugu identificēšanai. Ann Clin mikrobiol antimikrobi. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Tehniskā datu lapa BIGGY agars. Pieejams vietnē: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY agars. Pieejams vietnē: foodsafety.neogen.com
- Conda Pronadisa laboratorijas. BIGGY agars. Pieejams vietnē: condalab.com
- BD laboratorijas. BD BiGGY agars (bismuta glikozes glicīna rauga agars). 2011.Pieejams vietnē: bd.com