BHI AGARS: PAMATS, SAGATAVOŠANA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

BHI agars vai Brain Heart Infusion agara vidē ir barības cieta kultūru. Spāņu valodā mēs to saucam par smadzeņu sirds infūzijas agaru. Tā ir neselektīva barotne, kas nozīmē, ka var attīstīties visu veidu grampozitīvas un gramnegatīvas baktērijas, kā arī dažas rauga un pavedienu sēnītes.

Tas sastāv no teļa smadzeņu un sirds infūzijas, peptiskas hidrolizāta no dzīvnieku audiem, kazeīna aizkuņģa dziedzera hidrolizāta, nātrija hlorīda, glikozes, dinātrija fosfāta un agara.

BHI plāksnes. Avots: Autores uzņemts foto MSc. Marielsa Gil.

Jāatzīmē, ka BHI agars ir viens no bakterioloģijas laboratorijās visbiežāk izmantotajiem barotnēm. To var izmantot bez piedevām kā primāro kultūru, koloniju subkultūru, kas iegūta no citiem selektīviem barotnēm, vai celmu uzturēšanai laboratorijā.

No otras puses, tā ir ideāla barotne, kuru var izmantot kā bāzi bagātinātu barotņu, piemēram, asins agara un šokolādes agara, sagatavošanā. Abas ir ideāli piemērotas mikroorganismu izolēšanai no uztura viedokļa. Tomēr jāatzīmē, ka, tā kā tas satur glikozi, tas nav piemērots hemolīzes modeļa novērošanai.

Tāpat BHI agaru var izmantot speciālu barotņu sagatavošanai grūti audzējamo patogēno mikroorganismu izolēšanai parastās barotnēs, starp tām: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae un Histoplasma capsulatum.

Ar antibiotiku piedevu BHI agars kļūst par selektīvu barotni sēnīšu izolēšanai.

Pamats

Tā ir barojoša barotne mēreni prasīgu mikroorganismu izolēšanai, un tās bagātināšanu var palielināt, pievienojot asinis un citus uztura bagātinātājus.

Tā ir neselektīva barotne, tāpēc tā ļauj augt lielākajai daļai grampozitīvo un gramnegatīvo baktēriju, kā arī dažām sēnēm. Tomēr to var padarīt selektīvu, pievienojot antibiotikas.

Barotne satur teļa smadzeņu un sirds infūziju, dzīvnieku audu peptisko hidrolizātu un kazeīna aizkuņģa dziedzera hidrolizātu; Visi šie savienojumi darbojas kā vitamīnu, aminoskābju, slāpekļa un oglekļa avoti.

Glikoze ir ogļhidrāts, kas nodrošina enerģiju mikroorganismiem, kad tie to ir raudzējuši. Tikmēr nātrija hlorīds un nātrija fosfāts uztur osmozes līdzsvaru un nodrošina neitralitātei tuvu pH līmeni. Visbeidzot, agars iegūst vidēju cietu konsistenci.

Sagatavošana

Nosver 52 gramus dehidrētas barotnes un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens. Uzkarsē maisījumu siltuma avotā līdz vārīšanās temperatūrai, šķīdināšanas procesa laikā bieži maisot.

BHI agara plāksnes vai ķīļus var pagatavot bez piedevām.

Ķīļi

Ķīļu pagatavošanai kalpojiet preparātam, līdz puse no katras mēģenes ir piepildīta, pārklājiet un 15 minūtes sterilizējiet autoklāvā 121 ° C temperatūrā, atstājot, gulējiet uz pamatnes, līdz tie sacietē. Vēlāk līdz lietošanai uzglabāt ledusskapī.

BHI ķīļi bakterioteka ārstēšanai. Avots: Autores uzņemts foto MSc. Marielsa Gil.

Plāksnes

Izšķīdināto maisījumu 15 minūtes autoklāvā 121 ° C temperatūrā, ļaujot tam atdzist līdz 50 ° C, un 20 ml barotnes pasniedz sterilos Petri traukos. Viņiem ļauj sacietēt, tos apgriež un līdz lietošanai uzglabā ledusskapī. Pirms sēšanas ļaujiet plāksnēm sasilt līdz istabas temperatūrai.

Barotnes pH līmenim jābūt 7,4 ± 0,2.

Neapstrādāta barotne ir smilškrāsas krāsā, un sagatavotā barotne ir gaiši dzintara krāsā.

Asins agara sagatavošana

Pēc barotnes sterilizācijas atdzesē līdz apmēram 45 līdz 50 ° C temperatūrai, pēc tam pievieno asinis (50 ml), viegli samaisa, lai homogenizētos, un aseptiski pasniedz 20 ml katrā Petri traukā. Ja uz plāksnes veidojas burbuļi, vieglāka liesma ātri jāpārlaiž pār burbuļiem, lai tos novērstu.

Tāpat īpašus barotnes var pagatavot, pievienojot atbilstošās piedevas, kad maisījums sasniedz temperatūru no 45 līdz 50 ° C.

Barotne paliek ķiršu sarkanā krāsā.

Lietojumprogrammas

Lietojiet bez piedevām

BHI agars bez piedevām ir noderīgs kā primārā kultūra un zemu vai vidēju mikroorganismu tīru celmu sēšana to turpmākai identificēšanai.

Tā kā tā ir gaišas krāsas vide, tā ir ideāli piemērota pigmentu novērošanai, un, tā kā tajā nav traucējošu vielu, tai var veikt dažus bioķīmiskos testus, piemēram, oksidāzi un katalāzi, vai arī no šī kolonijas var veikt citus bioķīmiskos testus. agars.

Tāpat BHI agara ķīļus plaši izmanto celmu uzturēšanai noteiktu laiku laboratorijā (bakterioteka).

Plāksnes vai ķīļus, uz kuriem ar baktēriju celmiem apsēj virsmu, inkubē 37 ° C temperatūrā no 24 līdz 48 stundām. Tikmēr sēnītēs temperatūra un inkubācijas laiks būs atkarīgs no meklētā sēnītes veida.

Kā bāzes agars citu barotņu sagatavošanai

Izmantojot šo bāzi, var sagatavot bagātinātus un selektīvus materiālus.

Bagātināts

Tās galvenā funkcija ir kalpot par pamatu asins agara sagatavošanai ikdienas lietošanai mikrobioloģijas laboratorijās. Īpaši BHI bāze veicina Streptococcus sp. Tomēr tam ir trūkums, ka tas nav piemērots hemolīzes modeļu novērošanai, jo tajā ir glikoze.

To izmanto arī trušu vai zirgu asiņu agara pagatavošanā Haemophilus sp. Lai iegūtu labākos rezultātus, var pievienot bagātināšanas papildinājumu (IsoVitaleX).

Ja paraugi nāk no elpošanas ceļiem, agaram var pievienot bacitracīnu, lai kavētu pavadošo floru un palielinātu Haemophilus sp.

Corynebacterium diphtheriae izolēšanai var pagatavot arī asins agaru (jēra vai cilvēka) ar cistīna tellurītu. Tāpat Francisella tularensis izolēšanai ir lietderīgi sagatavot trušu asiņu agaru, pievienojot cistīnu un glikozi.

Asins agara plātņu sēšana notiek izsmelšanas laikā, un tās inkubē 35-37 ° C temperatūrā 24-48 stundas mikroaerofilitātē (5-10% CO ₂ ).

Izvēles

Šī barotne ar antibiotiku pievienošanu var aizstāt Sabouraud agaru sēnīšu izolēšanai.

BHI agara kombinācija ar hloramfenikolu - gentamicīnu vai penicilīnu -, streptomicīnu un zirga asinīm ir ideāli piemērota Histoplasma capsulatum izolēšanai.

Atkarībā no izdalāmā mikroorganisma, ieteicams veikt inkubāciju 35-37 ° C vai istabas temperatūrā aerobiozes gadījumā. Dažreiz inkubācija ir nepieciešama abos temperatūras diapazonos, šim nolūkam izmantojot 2 plāksnes.

Dažas sēnes, piemēram, Trichophyton mentagrophytes, inkubē istabas temperatūrā līdz 7 dienām.

QA

No katras sagatavotās partijas ir ieteicams 24 stundas inkubēt 1 plāksni vai ķīli 37 ° C temperatūrā un pārliecināties, ka tajā nav augšanas; Tas ir īpaši svarīgi, gatavojot asiņu agaru, jo tā ir viegli piesārņota barotne.

No otras puses, barotnes kvalitāti var novērtēt, inokulējot zināmus vai sertificētus standarta celmus un novērojot to attīstību.

Šajā nozīmē, lai novērtētu BHI agaru bez piedevām, var izmantot Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 vai Candida albicans ATCC 10231 celmus. Tos inkubē 37 ° C aerobiozē no 24 līdz 48 stundām. Visos gadījumos gaidāma apmierinoša izaugsme.

Asins agara plātņu novērtēšanai var sēt Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 vai Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 celmus.

Baktēriju celmus inkubē 37 ° C mikroaerofilitātē 24 stundas, bet sēnīti istabas temperatūrā inkubē mitrā kamerā līdz 7 dienām. Visos gadījumos gaidāma apmierinoša izaugsme.

Atsauces

1. Britannia laboratorijas. Smadzeņu sirds infūzijas agars. 2015. Pieejams vietnē: britanialab.com.
2. BD laboratorijas. Smadzeņu sirds infūzijas (BHI) agars. 2013.Pieejams vietnē: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Smadzeņu sirds infūzijas agars. 2009. gads.
4. Neogēnu laboratorija. Smadzeņu sirds infūzijas agars. Pieejams vietnē: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Asins agars: pamats, pielietojums un sagatavošana. 2018.Pieejams vietnē: lifeder.com.
6. Wikipedia līdzautori. Smadzeņu sirds infūzija. Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2018. gada 19. septembris, 03:58 UTC. Pieejams vietnē: wikipedia.org. Piekļuve 2019. gada 2. martam.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.