BERDRA PĀRKERA AGARS: PAMATS, SAGATAVOŠANA UN IZMANTOŠANA - BIOLOĢIJA - 2025

Agars Baird Parker ir cieta vidēja selektīvs un atšķirīgu kultūru. Tas tika izveidots 1962. gadā koagulāzes pozitīvu stafilokoku (Staphylococcus aureus) noteikšanai un saskaitīšanai.

To veido aizkuņģa dziedzera kazeīna hidrolizāts, gaļas ekstrakts, rauga ekstrakts, litija hlorīds, glicīns, nātrija pirvāts, kālija tellurīts, agars un olu dzeltenuma emulsija.

Tipiskas Staphylococcus aureus kolonijas uz Baird Parker agara. Avots: Daizy John

Bairda Pārkera agara pamatā ir S. aureus spēja samazināt tellurītu un ražot lecitināzi. Abas īpašības rada koloniju ar īpašām šīs sugas īpašībām. Tāpēc tas ir ļoti efektīvs šī mikroorganisma noteikšanā.

Tipiskās S. aureus kolonijas ir melnas vai tumši pelēkas, ar bezkrāsainu apmali un gaišu halo, kas tos ieskauj, atšķirot tos no citiem mikroorganismiem. Šo patogēnu var atrast klīniskajos paraugos, ūdeņos, kosmētikā un neapstrādātos vai vārītos ēdienos.

Tā diagnostikai vai noteikšanai ir ārkārtīgi liela nozīme, ņemot vērā dažādās radītās patoloģijas, piemēram, saindēšanos ar pārtiku, applaucētas ādas sindromu, toksiskā šoka sindromu, abscesus, meningītu, septicēmiju, endokardītu.

Pamats

Barojošs spēks

Kazeīna, gaļas ekstrakta un rauga ekstrakta aizkuņģa dziedzera hidrolizāts ir barības vielu, vitamīnu un minerālvielu avoti, kas nepieciešami vispārējai mikrobu attīstībai, savukārt piruvāts un glicīns ir savienojumi, kas veicina Staphylococcus aureus specifisko augšanu.

Izvēles

Bairda Pārkera agars ir selektīvs, jo satur vielas, kas kavē pavadošās floras augšanu, vienlaikus veicinot S. aureus attīstību. Inhibējošie savienojumi ir litija hlorīds un kālija tellurīts.

Diferenciālis

Šī barotne ļauj atšķirt S. aureus no pārējiem koagulāzes negatīvajiem stafilokokiem. S. aureus spēja samazināt tellurītu līdz metāliskam melnajam telūram, veidojot melnas vai tumši pelēkas kolonijas.

Tāpat olu dzeltenums nodrošina substrātus, lai pierādītu enzīma lecitināzes un lipāzes klātbūtni. S. aureus ir lecitināzes pozitīvs, tāpēc ap koloniju tiks novērots dzidrs halogēns, kas norāda, ka lecitīns ir hidrolizējies.

Šajā ziņā spīdīgu melnu vai tumši pelēku koloniju parādīšanās uz šī agara norāda uz S. aureus klātbūtni.

Ja veidojas nokrišņu zona, tas norāda uz lipāzes aktivitāti. Daži S. aureus celmi ir lipāzes pozitīvi, citi negatīvi.

Gadījumā, ja S. aureus ir lipāzes pozitīvs, ap melno vai tumši pelēko koloniju tiks novērots necaurspīdīgs laukums, pēc tam lecitināzes iedarbības rezultātā - gaiši halogēns.

Baktēriju, izņemot S. aureus, kolonijas, kuras var augt šajā barotnē, veidosies bezkrāsainas vai brūnas kolonijas bez apkārtējām halogenām.

Netipiskas melnās kolonijas var redzēt arī ar bezkrāsas apmali vai bez tās, bet bez gaišas halo. Šīs kolonijas nav jāņem vērā, tās neatbilst S. aureus.

Sagatavošana

Olu dzeltenuma emulsija

Paņemiet svaigu vistas olu, labi mazgājiet un ievietojiet to 70% spirtā 2 līdz 3 stundas. Pēc tam olu aseptiski atver un balto daļu uzmanīgi atdala no dzeltenuma. Pēc tam ņem 50 ml dzeltenuma un sajauc ar 50 ml sterila fizioloģiska šķīduma.

Kālija tellurīts - 1 masas%

Dažās tirdzniecības mājās tiek pārdots lietošanai gatavs 1% kālija tellurīts. To pievieno barotnei, pirms barotne sacietē.

Lai pagatavotu šo šķīdumu laboratorijā, nosver un vienā ūdens daļā izšķīdina 1,0 g kālija tellurīta. Pēc tam ūdens daudzumu piepilda līdz 100 ml. Šķīdums jāsterilizē ar filtrācijas metodi.

Barotnes sagatavošana

Nosver 60 g dehidrētas barotnes un izšķīdina 940 ml destilēta ūdens. Ļaujiet maisījumam sēdēt apmēram 5-10 minūtes.

Uzklājiet siltumu, bieži maisot barotni, lai uzlabotu izšķīšanas procesu. Minūti uzkarsē līdz vārīšanās temperatūrai. Sterilizējiet autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Ļauj nostāvēties, līdz tā sasniedz 45 ° C temperatūru, un pievieno 50 ml olu dzeltenuma emulsijas un 10 ml 1% tellurīta. Labi samaisa un ielej 15-20 ml uz steriliem Petri traukiem.

Ļauj sacietēt, pasūti apgrieztu plāksnēs un līdz lietošanai uzglabā ledusskapī.

Sagatavotās barotnes galīgajam pH jābūt 6,8 ± 0,2.

Pirms parauga iesēšanas pagaidiet, kamēr plate sasniedz istabas temperatūru. Sējiet plāksnes ar svītru palīdzību vai sējot ar Drigalski lāpstiņu.

Dehidrētās barotnes krāsa ir gaiši dzeltenbrūna, un sagatavotās barotnes krāsa ir gaiši dzintara.

Izmantojiet

Klīniskie paraugi

Klīniskos paraugus sēj tieši, vienā plāksnes galā iztukšojot daļu materiāla, un no turienes tas tiek izsvītrots izsīkuma dēļ. Inkubē no 24 līdz 48 stundām 35-37 ° C temperatūrā.

Pārtikas paraugi

Nosver 10 gr pārtikas parauga un homogenizē 90 ml 0,1% peptona ūdens, pēc vajadzības sagatavo atšķaidījumus. Plāksnītes inokulē trīs eksemplāros ar 0,3 ml sagatavoto šķīdumu un izsēj uz virsmas ar Drigalski lāpstiņu. Inkubē no 24 līdz 48 stundām 35-37 ° C temperatūrā.

Šī metodika ļauj saskaitīt iegūtās tipiskās kolonijas, un tā ir ideāla, ja ir aizdomas par S. aureus klātbūtni virs 10 CFU uz g / ml parauga.

Ja ir aizdomas, ka S. aureus daudzums ir neliels vai ir daudz pavadošās floras, ieteicams bagātināt paraugu triptazes sojas buljonā ar 10% NaCl un 1% nātrija piruvāta. Tas veicinās S. aureus augšanu un kavēs pavadošās floras attīstību. Duļķainās mēģenes tiek iesētas uz Baird Parker agara.

Ūdens paraugi

Sterilizētā vakuuma filtrēšanas sistēmā filtrē 100 ml pētījuma ūdens, pēc tam 0,4 mikronu mikroporaino membrānu noņem ar sterilām knaiblēm un ievieto uz Baird Parker plates. Inkubē no 24 līdz 48 stundām 35-37 ° C temperatūrā. Šis paņēmiens ļauj saskaitīt tipiskās S. aureus kolonijas.

QA

Lai novērtētu Baird Parker agara kvalitāti, var izmantot tādus zināmus celmus kā Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 vai Proteus mirabilis ATCC 43071.

Ir zināms, ka S. aureus ATCC celmu gadījumā samazinās tellurīts, un tie ir lipāzes un lecitināzes pozitīvi. Tādēļ jābūt apmierinošai attīstībai un jāaudzē izliektas kolonijas ar melnu centru un bezkrāsainu apmali ar necaurspīdīgu halo un vieglu ārējo halo.

Paredzams, ka S. epidermidis šajā barotnē attīstīsies vāji, ar brūngani pelēkām līdz melnām kolonijām, bez gaišas halogenas.

Paredzams, ka E. coli un P. mirabilis tiks pilnībā vai daļēji inhibēts. Augšanas gadījumā brūnās kolonijas attīstīsies bez necaurspīdīgas zonas vai gaišas halogenas.

ieteikumi

- Pēc tellurīta un olu dzeltenuma pievienošanas barotni nevajadzētu uzkarsēt.

-Olu dzeltenuma emulsijas sagatavošana un pievienošana tās vidū ir ļoti jutīgs piesārņojuma posms. Jāuzmanās īpaši.

-Ja ir tipiskas S. aureus kolonijas, tas jāapstiprina, šim celmam uzliekot koagulāzes testu.

-Ja koagulāzes rezultāti ir apšaubāmi, jāveic citi apstiprinošie testi.

- Esiet piesardzīgs, lai nesajauktu tipisko S. aureus koloniju klātbūtni ar netipiskām melnajām kolonijām.

Atsauces

1. Wikipedia līdzautori. Berdra-Pārkera agars. Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2017. gada 15. marts, 19:36 UTC. Pieejams: wikipedia.org/ Piekļuve 2019. gada 18. februārim.
2. BD laboratorijas. Baids Pārkers Agars. 2006.Pieejams vietnē: bd.com
3. Britannia laboratorijas. Berdra Pārkera agara bāze. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
4. Fransisko Soria Melguizo laboratorijas. 2009. Beords Pārkers Agars. Pieejams vietnē: http://f-soria.es/Inform
5. Britannia laboratorijas. Kālija tellurīts. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Enterotoxigenic Staphylococcus aureus A tipa pārvadāšana nazofarneksa uztriepēs pārtikas apstrādātājiem. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Venecuēlas standartkovenīns 1292-89. (1989). Pārtika. Staphylococcus aureus izolēšana un uzskaitīšana. Pieejams vietnē: sencamer.gob.ve