HEMATOKSILĪNA-EOZĪNA KRĀSOŠANA: RAKSTUROJUMS, LIETOJUMS, PAŅĒMIENI - ĶĪMIJA - 2025

Hematoxylin - eozīnu ir iekrāsošanas paņēmiens, izmantojot par krāsvielu hematoksilīnu un eozīnu kombināciju. Šis krāsvielu pāris veido perfektu duetu, jo hematoksilīns darbojas kā pamata krāsviela, un eozīns ir skābes krāsviela.

Pamata vai skābo krāsvielu apzīmējums neattiecas uz pH, ko tās iegūst šķīdumā, bet drīzāk runā par dominējošo proporciju attiecībā uz to anjonu vai katjonu lādiņiem vai hromoforu grupas atrašanās vietu.

Hematoksilīns - eozīns (HE) iekrāsots ciliēts koloniālais epitēlijs Avots: Tods Straus un Vladimir Osipov

Šajā ziņā hematoksilīnu uzskata par pamata (katjonu) krāsvielu, un tāpēc tai ir afinitāte pret skābju struktūrām, piemēram, šūnu kodolu. Kamēr eozīns ir skābes (anjonu) krāsviela, tai ir afinitāte pret sārmainām vai bāziskām struktūrām, piemēram, šūnu citoplazmu.

Šī iemesla dēļ šo krāsvielu kombināciju plaši izmanto audu krāsošanai, jo tā ļauj skaidri atšķirt kodolus un citoplazmas. Kodoli iekrāsojas tumši zilā vai purpursarkanā krāsā, bet citoplazma - rozā krāsā.

Hematoksilīna-eozīna krāsošana ir viena no visplašāk izmantotajām krāsošanas metodēm histoloģijā un citoloģijā, pateicoties tā vieglai apstrādei un zemām izmaksām. To izmanto, lai vizualizētu šūnas, biezas nervu šķiedras un noteiktu mikroorganismu klātbūtni audos, piemēram: parazītus, sēnītes un baktērijas.

raksturojums

Hematoksilīns

Hematoksilīns ir neitrāla krāsviela. Tomēr komponents, kas nodrošina krāsu (hromofors), atrodas molekulas katjonu vai pamata centrā. Tādējādi tā afinitāte pret skābju struktūrām. Tās ķīmiskā formula ir C ₁₆ H ₁₄ O _6, un tās zinātniskais nosaukums ir 7,11b-dihidroindeno-hromene-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentools.

Tas galvenokārt krāso šūnu kodolus, jo tie ir ļoti bagāti ar nukleīnskābēm. Tas var arī notraipīt vīrusu izcelsmes citoplazmas ieslēgumus.

Lai hematoksilīns notraipītu, tam jābūt oksidētā stāvoklī un saistītam ar metālu. Pēdējais kalpos, lai fiksētos pie audiem, tas ir, tas darbosies kā kodinātājs.

Kad hematoksilīns tiek oksidēts, to sauc par hemateīnu. Oksidēšanu panāk, reaģenta iedarbībā izmantojot skābekli (novecojot) vai ar vielām, kas veicina tā oksidēšanu (ķīmiska oksidēšana).

Eozīns

Eozīns ir krāsviela, kas iekrāsojas sarkanā vai rozā krāsā. Tas nešķīst ūdenī, lai gan ir arī ūdenī šķīstoša versija. Parasti eozīnu sagatavo, izšķīdinot spirtā (95 ° etanolā).

Tas krāso citoplazmas, muskuļu šķiedras, citoplazmas organellus un kolagēnu, bet nekrāso šūnu kodolus. Tas ir tāpēc, ka tas ir negatīvi lādēts, tāpēc tam ir afinitāte pret pozitīvi lādētām struktūrām.

Ir divu veidu eozīns "Y" un "B". Eozīns "Y" ir pazīstams kā dzeltenais eozīns. Tās zinātniskais nosaukums ir tetrabromo-uoresceīns, un tā ķīmiskā formula ir C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ .

No otras puses, eozīnu "B" dažreiz sauc par zilganu eritrozīnu B. Tās zinātniskais nosaukums ir dibromodinitro-uoresceīns, un formula ir C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉ . Abas ir ļoti līdzīgas, un atšķirība starp viena vai otra lietojumu nav īsti pamanāma. Tomēr vispopulārākais ir eozīns "Y".

Eozīnam ir īpašība atšķirt dzīvo un mirušo šūnu, jo tas spēj šķērsot membrānu tikai, lai notraipītu citoplazmu, kad šūnas ir mirušas, atstājot šūnas citoplazmu bezkrāsainu, ja tā paliek dzīva.

Lietojumprogrammas

Nervu šķiedru krāsošana

Biezās nervu šķiedras var iekrāsot un identificēt ar hematoksilīna-eozīnu. Tomēr tas nav noderīgi, lai iekrāsotu plānas nervu šķiedras, jo pēdējās vizualizēšanai ir nepieciešama sudraba krāsošana.

Histoloģiski ādas sekcijas traipi

Ādas ragveida slāņa iekrāsošanā krāsviela, kas darbojas, ir eozīns, jo šajā līmenī šūnām nav kodola.

Ādas granulētajā slānī hematoksilīns spēcīgi iekrāso keratohyalin granulas granulu šūnu iekšpusē. Tieši pretēji, muguras ādas slānis ir vāji iekrāsots ar hematoksilīnu, savukārt bazālais vai germinālais slānis ir diezgan iekrāsots.

Eozīns iekrāso visu šūnu citoplazmu, un krāsas intensitāte dažādos slāņos var atšķirties.

Izkārnījumu paraugu krāsošana ar hematoksilīna-eozīna palīdzību

Gómez et al., 2005. gadā pierādīja, ka hematoksilīna-eozīna krāsošana bija efektīvāka, lai identificētu amoebiasis gadījumus, kas saistīti ar Entamoeba histolytica un Entamoeba, nekā svaigā vizualizācijas metode (fizioloģiskais šķīdums un lugol) pacientiem ar akūtu caurejas slimību.

Ir arī pierādīts, ka tas ir ļoti jutīgs, nosakot eritrofagocitozi (amēbas, kuras ir apgrūtinājušas eritrocītus).

Histoloģisko sekciju iekrāsošana infekcijas diagnozei

Walwyn et al., 2004. gadā ierosināja histoloģisko traipu izmantošanu infekcijas izraisošo mikroorganismu noteikšanai.

Izmantojot hematoksilīna-eozīna krāsošanu, viņi varēja vizualizēt infekcijas, ko izraisīja Clostridium, Actinomyces, spirillae vai Candida. Viņi arī varēja novērot parazīta Sarcoptes escabiei klātbūtni ādas sekcijās un citomegalovīrusa un herpes vīrusu ieslēgumus dažādu audu sekcijās.

Metodes

Histoloģiskiem paraugiem

Histoloģiskās sekcijas iekrāsošana notiek caur virkni darbību. Pirmais ir iegūt histoloģisko sadaļu. Tas ir jāsaspiež, lai vēlāk ar mikrotomu iegūtu griezumus (īpaši smalki). Metode sastāv no šādiem soļiem:

1-liekā parafīna izvadīšana : šim nolūkam jūs varat izmantot ksilolu vai Heme-D, iegremdējiet 3-5 minūtes.

Parauga 2-rehidratācija: to panāk, iegremdējot paraugu dažādās spirtu koncentrācijās (etanolā) dilstošā secībā (100 °, 90 °, 70 °). Visos gadījumos 7 minūtes.

3-alkohola pārpalikuma novēršana: tam tas 7 minūtes tiek iegremdēts ūdenī.

4-krāsošana ar hematoksilīnu: paraugu uz 6-10 minūtēm iegremdē paplātē, kurā ir hematoksilīns. Ekspozīcijas laiks ir atkarīgs no parauga lieluma un biezuma.

5-hematoksilīna pārpalikuma novēršana: to 5 minūtes mazgā ar ūdeni un pēc tam ar skābu spirtu veic ātru caurstaigāšanu (10-20 sekundes). Vēlāk to atkal mazgā ar ūdeni 5 minūtes. Tad to 1 minūti iegremdē etanolā 96 ° temperatūrā.

6-krāsošana ar eozīnu: šim nolūkam paraugu uz 5 minūtēm iegremdē eozīna teknē.

7-Parauga dehidratācija : lai to izdarītu, tas iziet caur spirta paplātēm (etanolu), bet šoreiz augošā secībā. (70 °, 90 °, 100 °). (Attiecīgi 5 sekundes, 5 sekundes, 1 minūte).

8. parauga noskaidrošana : šim nolūkam to 5–10 minūtes pakļauj ksilolam un žāvē, lai pastāvīgi noslēgtu ar Kanādas balzamu vai citu līdzīgu materiālu.

Izkārnījumu paraugiem, kas meklē

Uz priekšmetstikliņa ar pacienta izkārnījumiem tiek uztriepes un 5 minūtes fiksētas ar 80% spirtu. Lapu 5 minūtes iegremdē hematoksilīnā un nekavējoties mazgā ar ūdeni.

Pēc tam to ātri iegremdē skābā spirtā un pēc tam amonjaka ūdenī. To mazgā ar ūdeni. Tas ir krāsots 5 minūtes eozīnā. Paraugu dehidrē, kā paskaidrots tehnikas līmenī, un visbeidzot noskalo ar ksilolu.

Reaģentu sagatavošana

- hematoksilīns

Vienā litrā destilēta ūdens izšķīdina 50 gramus kālija vai amonija alumīnija sulfāta. Kad tas pilnībā izšķīdis, pievieno 1 gramu kristalizēta hematoksilīna. Pilnīgi izšķīstot, pievieno 1 g citronskābes kopā ar 50 g hlorhidrāta un 0,2 g nātrija jodāta.

Maisījumu vāra 5 minūtes, pēc tam ļauj atdzist un filtrē, lai noņemtu visas cietās daļiņas, kas palikušas. Šādi sagatavotu reaģentu var nekavējoties izmantot.

- Eozīns

To var pagatavot ar spirta bāzi vai ar ūdens bāzi.

Alkoholiskais eozīns

100 ml etanola 95 ° temperatūrā izšķīdina 0,5 gramus eozīna "Y". Tad pievieno dažus pilienus ledus etiķskābes.

2% eozīna ūdens

1250 ml destilēta ūdens izšķīdina 25 gramus ūdenī šķīstoša eozīna "Y". Tad pievieno dažus pilienus ledus etiķskābes.

Skābs alkohols

Izmēra 0,5 ml koncentrētas sālsskābes un uzpilda līdz 100 ml ar absolūto spirtu.

Amonjaka ūdens

Izmēra 0,5 ml koncentrēta amonjaka un uzpilda līdz 100 ml ar destilētu ūdeni.

Atsauces

1. Navarrete, G. Ādas histoloģija. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130–133. Pieejams vietnē: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Entamoeba histolytica / E identifikācija Atšķirība pēc svaigas amēbas tehnikas un tās krāsošana ar hematoksilīna eozīnu akūtas caurejas gadījumā. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109.-112. Pieejams vietnē: medigraphic.com
4. Valvins V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Histoloģisko paņēmienu lietderība infekcijas diagnosticēšanai anatomiskos paraugos. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Pieejams vietnē: scielo.sld
5. PanReac AppliChem ITW reaģenti. Hematoksilīna-eozīna traips. 2017. gads, Spānija. Pieejams vietnē: itwreagents.com
6. Eozīns. Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2018. gada 7. novembris, 08:18 UTC. 2019. gada 4. augusts, 22:13 lv.wikipedia.org
7. "Hematoksilīns." Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2019. gada 3. maijs, 11:23 UTC. 2019. gada 4. augusts, 22:48 wikipedia.org