NEGATĪVS KRĀSOJUMS: PAMATOJUMS, TEHNIKA, PRIEKŠROCĪBAS UN TRŪKUMI - BIOLOĢIJA - 2025

Negatīvs iekrāsošanas ir metode, īpašu krāsojumu, lai iezīmētu klātbūtni kapsulas dažos mikroorganismiem , galvenokārt Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae un Cryptococcus neoformans-, klīnisko paraugiem vai tīrkultūru.

Tiešais paraugs, ko parasti izmanto negatīva iekrāsošanai, ir cerebrospinālais šķidrums. Šis paņēmiens ir ātra alternatīva iespējamai meningīta, īpaši Cryptococcus neoformans, diagnozei.

A. Zobu zobakmens, kas iekrāsots ar Indijas tinti, B. Cryptococcus neoformans var gatti ir vāji iekapsulēts, jo tas sastopams dabā, izmantojot nigrosīnu. C. Cryptococcus neoformans var gatti ar biezu kapsulu, kas atrodama parazītu formā, izmantojot nigrosīnu. D. Cryptococcus neoformans ar nedaudz atšķaidītu Indijas tinti. Gisell Quinde, no Wikimedia Commons / CDC, izmantojot Wikimedia Commons / Photo Credit: Satura nodrošinātāji: CDC / Dr. Leanor Haley, izmantojot Wikimedia Commons

Tāpat šo traipu var uzklāt uz krēpām un steriliem šķidrumiem kopumā, kā arī celmiem, kas iegūti no jaunām tīrām kultūrām. Šis paņēmiens tā izpildei izmanto nigrosīna vai Indijas tinti; tāpēc tā ir ļoti vienkārša un lēta piemērošanas metode, kas īsā laikā sniedz ļoti diagnostisku vērtību.

Šajā nozīmē jebkura laboratorija ir spējīga veikt šo krāsošanu. Protams, laboratorijā jābūt kompetentam personālam, kas spēj atpazīt izolētus vai pumpurošos Cryptococcus neoformans raugus un atšķirt tos no leikocītiem un artefaktiem, ko paraugs var parādīt.

Pamats

Nigrosīna un Indijas tinte darbojas līdzīgi; tāpēc kādu no šīm divām vielām var izmantot savstarpēji aizstājot.

Šo paņēmienu sauc par negatīvu iekrāsošanu, jo tas darbojas pretēji pārējiem iekrāsošanas paņēmieniem. Šajā ziņā paliek neizdevīga struktūra, kuru meklē vai kuru vēlas redzēt; tas ir, mikroorganismi.

Tāpēc krāsošanas pamatā ir uztriepes dibena iekrāsošana tumšā krāsā. Šajā scenārijā kapsulētās struktūras izceļas gaišā vai bezkrāsainā krāsā.

Raugi parasti ir rafinēti, tos ieskauj caurspīdīgs halors, kas atbilst kapsulai. Tas notiek tāpēc, ka Indijas tinte un nigrosīns ir vielas, kas nespēj iekļūt polisaharīdā, kas veido dzīvo mikroorganismu kapsulu.

Ir vērts atzīmēt, ka arī citas struktūras, kas var atrasties tiešajā paraugā, piemēram, leikocīti vai sarkanās asins šūnas, neieplūst.

Tomēr, ja mikroorganismi ir miruši, krāsviela var iekļūt to iekšpusē, tāpēc šī krāsošana ir noderīga arī mikroorganismu dzīvotspējas novērtēšanai.

Tehnika

materiāli

Nigrosine

Nigrosine ir parādā savu vārdu melnajai krāsai, kāda tai ir. Tā ir sintētiska viela, ko iegūst, karsējot organisko savienojumu maisījumu - piemēram, kā nitrobenzīnu, anilīnu un anilīna hidrohlorītu -, izmantojot minētajā reakcijā katalizatoru (dzelzi vai varu).

Ķīniešu tinte

Ķīniešu tinte ir viela, ko galvenokārt aziāti izmanto rakstīšanai, mākslas darbu izgatavošanai un monohromatiskai krāsošanai. Tas ir ļoti populārs ķīniešu kultūrā.

To iegūst no kalmāra tintes, kas sajaukta ar pulverizētu kokogli, koku ar zemu sveķainu koku dedzināšanas produktu.

To var arī pagatavot no kvēpiem, sadedzinot ogļūdeņražus (augu eļļas), kopā ar olbaltumvielu želatīnu, kas piešķir tai pareizo konsistenci, lai izvairītos no oglekļa daļiņu izgulsnēšanās.

Specifikācijas paraugu ņemšanai

- Tas neprasa badošanos.

- CSF, krēpu vai sterila šķidruma paraugā jābūt vismaz 1 ml tilpuma, un tas nekavējoties jāpārnes laboratorijā istabas temperatūrā.

- CSF un sterila šķidruma paraugi jāņem specializētam ārstam.

- Tā var būt arī tīra aizdomīga celma kultūra, kas saistīta ar iepriekšminētajiem patogēniem.

Tehnikas izpilde ar tiešiem paraugiem

- Paraugi jācentrifugē, pēc tam supernatantu izmet un ņem nogulsnes.

- Pilienam centrifugētā materiāla (nogulsnes) un pilienam Indijas tintes vai nigrozīna ievieto tīrā priekšmetstikliņā.

- Tas ir labi jāsajauc un jāpārklāj ar pārseguma lapu, ļaujot pilienam izplatīties kā plānai kārtiņai, nepārsniedzot malas.

- Pēc tam preparātu uzstāda uz mikroskopa.

- Ja preparāts ir pārāk tumšs, to var atšķaidīt ar ūdeni.

Tehnikas izpilde ar celmiem no kultūras

- Ļoti nelielu daļu no jaunās kultūras ņem ar sēšanas adatu un izšķīdina Indijas tintes pilienā, kas iepriekš ievietots tīrā priekšmetstikliņā.

- Virsū uzliek pārsegu.

- To novēro mikroskopā pie 10X un pēc tam pie 40X.

Jūs varat arī izšķīdināt daļu kolonijas destilētā ūdenī, un no turienes ņemt pilienu un sajaukt to ar Indijas tinti. Tādā veidā preparāts nebūs tik biezs, dodot iespēju novērot struktūras izolēti; ja ir pūļi, tas netiks labi novērots.

Vēl viena metodoloģija ir šāda:

- Ievietojiet suspensijas kultūras pilienu priekšmetstikliņa vienā galā.

- Tajā pašā galā ielieciet pilienu nigrozīna un samaisiet.

- Ar cita priekšmetstikliņa palīdzību paraugu izklāj tā, it kā veidotu hematoloģisko uztriepi.

- Ļaujiet nožūt un novērojiet zem mikroskopa.

Mikroskopa novērošana

Vispirms jākoncentrējas ar 10X mērķi, lai būtu plašs lauka skats. Pēc tam jāmeklē, vai ir brīvas vietas; ja ir, fokusējiet 40X, lai redzētu sīkāku informāciju.

Priekšrocība

- Tas ir viegli izpildāms.

- Tā ir lēta tehnika.

- šī metode neprasa, lai uztriepi nostiprinātu ar karstumu vai ar ķīmiskām vielām; tāpēc mikroorganismi tiek novēroti bez kropļojumiem.

- Svaigais preparāts nav jāizžāvē, tāpēc to var novērot nekavējoties, ātri iegūstot rezultātus.

Trūkums

Pēc salikšanas nekavējoties jāievēro svaigi preparāti; ja tiem ļauj nožūt, tos vairs nav iespējams novērot, un ir jāuzstāda jauns.

Audu krāsošana ar Indijas tinti

Vēl viena funkcija, ko Indijas tinte var izpildīt, ir patoloģijas laboratorijās. To piemēro ķirurģiski iegūtiem audu paraugiem, lai atzīmētu audzēja rezekcijas robežas.

Atzīmētos audus izsmidzina ar etiķskābi. Tas darbojas kā kodinātājs un novērš tintes noplūdi, kad audus regulāri apstrādā biopsijas sagatavošanai.

Procedūra sastāv no audu peldēšanās spirtā un ksilolā, pēc tam to iemērc parafīna vaskā. Šis marķējums vada patologu, novērojot audus, norādot, kur atrodas ķirurģiskās rezekcijas robeža vai cits apskates objekts.

Atsauces

1. «Nigrosina». Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2017. gada 11. jūlijs, 22:46 UTC. 2019. gada 6. janvāris, plkst. 16:56: lv.wikipedia.org
2. "Ķīniešu tinte". Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2018. gada 1. oktobris, 03:08 UTC. 2019. gada 6. janvāris, plkst.18: 20: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J un līdzstrādnieki. (2006). Extremadura autonomās kopienas leiboristu personāls. Īpašās programmas IV sējums. Redakcija MAD. Sevilja-Spānija, 211.-212.lpp.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006), Galisijas veselības dienesta (SERGAS) laboratorijas tehniķis. Konkrētas tēmas darba kārtības sējums 2. Redakcijas MAD. Sevilja – Spānija, 79. – 80. Lpp.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Argentīna. Redakcija Panamericana SA