RAITA TRAIPS: PAMATOJUMS, MATERIĀLI, TEHNIKA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Wright traipu ir iekrāsošanas paņēmiens rada amerikāņu patologs, James Homer Wright 1902, pamatojoties uz Romanowsky traipu. Tā kā Romanovska traips bija nestabils, Wright kā šķīdinātāju un fiksējošo līdzekli pievienoja metanolu.

Šī krāsa ir polihromatiska, kas nozīmē, ka tā rada vairākas krāsas atkarībā no struktūras, kas absorbē krāsvielu. Šo krāsošanas paņēmienu plaši izmanto, lai veiktu diferenciālo balto asins šūnu skaitu un pētītu sarkano asins šūnu, trombocītu un leikocītu morfoloģiju perifērajās asinīs un kaulu smadzenēs.

Dažādas perifēro asiņu uztriepes, kas iekrāsotas ar Wright traipu. A. Akūta leikēmija B. Plasmodium vivax eritrocītos. C. Plasmodium falciparum, makrogametocīti. D. limfocīti

Tās pielietojums ir ļoti svarīgs, jo novirzes ir redzamas dažādās asins šūnu līnijās, atvieglojot tādu slimību kā leikēmija vai bakteriālas vai parazitāras infekcijas diagnozi.

Varbūt šīs ir visizplatītākās lietojumprogrammas, kurās šo paņēmienu izmanto, tomēr tie nav vienīgie. Tas ir noderīgs arī paraugos, kas nav asinis un kaulu smadzenes, piemēram, deguna izdalījumos, fekālo gļotu, krēpās, ādas paraugos, cita starpā.

Wright traipu pamatojums

Wright traips radās no Romanovska traipa, kas sastāv no skābes krāsvielas (eozīns Y) metilspirta šķīduma un pamata krāsvielas (metilēnzilā) un to oksidācijas produktiem.

Krāsvielu maisījums, ko izmanto Wright traipos, rada efektu, kas pazīstams kā Romanowsky, tas ir, tas piešķir skaistu purpursarkanu krāsu leikocītu un neitrofilo granulu kodoliem, bet sarkanās asins šūnas iekrāsojas rozā krāsā.

Komponenti, kas atbild par Wright traipu tipiskās krāsu gammas noteikšanu, ir zils B un eozīns Y. Novērotais efekts būs atkarīgs no krāsvielu saistīšanās ar ķīmiskajām struktūrām un zilā B un eozīna Y mijiedarbības.

Skābās struktūras, piemēram, nukleīnskābes, kodolproteīni un dažu šūnu tipu reaktīvā nenobriedušā citoplazma, fiksē zilo B (pamata traipu).

Kaut arī pamata struktūras, piemēram, hemoglobīns, segmentētu eozinofilu granulas, starp citām šūnu struktūrām, saista eozīnu Y (skābes krāsviela).

Krāsošanas rezultātu var ietekmēt dažādi faktori, piemēram, Wright krāsas pH līmenis, buferšķīdums un mazgāšanas šķīdums; kā arī krāsošanas un fiksācijas laiks.

Tāpēc katrs reaģentu sagatavošanas solis ir izšķirīgs, un tas jāveic, pievēršot uzmanību visām detaļām.

materiāli

Wright traipu. Par 100 ml tas ir nepieciešams:

Nosver 0,3 g Wright traipu, izmēra 97 ml metanola un 3 ml glicerīna.

Sagatavošana

Javā ievieto lielu daudzumu Wright krāsvielas un pakāpeniski pievieno glicerīnu, līdz pulveris ir pilnībā izšķīdis.

Pēc tam pievieno metanolu, samaisa un ielej dzintara pudelē.

Pirms lietošanas šķīdumu viegli sakrata un filtrē.

Buferēts buferšķīdums

Vienā litrā destilēta ūdens pievieno 3,76 g dinātrija hidrofosfāta (Na ₂ HPO ₄ 2H ₂ 0) un 2,1 g dihidrogēnija kālija fosfāta (KH ₂ PO ₄ ).

Ļoti labi samaisa, līdz visi pievienotie reaģenti ir izšķīduši. Pielāgo pH līdz 7,2. Ielejiet stikla burkā un turiet istabas temperatūrā.

Krāsošanas veikšanai nepieciešami papildu materiāli

Lai varētu veikt krāsošanu, ir nepieciešami arī citi materiāli: priekšmetu slaidi vai pārklāj priekšmetus, krāsojamais tilts, t-krekli ar ūdeni vai buferšķīdumu mazgāšanai, taimeris krāsošanas laiku saglabāšanai un daži žāvēšanas materiāli (absorbējošs papīrs, marle vai kokvilna).

Wright traipu komponenti

Metanols

Alkohols (metanols) kalpo par asins uztriepes fiksatoru priekšmetstikliņā.

Tas būtībā ir koagulants, reducējošs, dehidrējošs un fiksējošs reaģents. Tāpēc tā funkcija ir koagulēt olbaltumvielas un padarīt tos nešķīstošus, bet faktiski tos ne denaturējot.

Metanols ir visplašāk izmantotais uztriepes fiksācijas reaģents visās laboratorijās, jo tas nodrošina labākus rezultātus nekā etanols. Ideālā koncentrācija ir 99%.

Aizbīdnis

Buferšķīdumam (buferēts šķīdums) ir funkcija pielāgot vai uzturēt krāsvielas pH, jo pH, kas noregulēts līdz 7,2, ir būtisks, lai šūnu struktūras varētu pareizi absorbēt krāsvielas.

No otras puses, metanola fiksācijas solis dehidrē šūnas, un buferšķīdums palīdz tām rehidratēt.

Eozīns (Y)

Eozīnam ir afinitāte pret celtniecības blokiem, jo ​​tas ir skābes krāsviela. Divi eozīna veidi ir zināmi ļoti līdzīgi viens otram, tik daudz, ka var izmantot vienu no abiem, iegūstot vienādu rezultātu.

Vienu sauc par eozīnu Y, dzelteno eozīnu vai tetrabromfluoresceīnu, bet otru sauc par eozīnu B, zilganu eritrozīnu B vai dibromodinitrofluoresceīnu. Tomēr visbiežāk tiek izmantots eozīns Y.

Šīs krāsvielas vissvarīgākais īpašums ir negatīvā polaritāte, tas padara to pievilcīgu ar pozitīvi lādētu šūnu struktūru.

Metilēnzilā

Tā ir pamata krāsošana. Tās galvenais īpašums ir metokromasija, tas ir, ne visas struktūras tiks iekrāsotas vienā krāsā, tas ir atkarīgs no krāsojamo struktūru ķīmiskā sastāva.

Daži no tiem kļūs gaiši vai tumši zili, bet citi - tumši violeti vai gaiši ceriņi.

Tehnika

1-Izklājiet paraugu tā, lai plānā plēve paliktu uz slaida vai uz pārsega.

2 Ļaujiet tai nožūt gaisā apmēram 2 stundas.

3-Novietojiet sauso uztriepi uz krāsošanas tilta vai traipu paplātes ar parauga izplatību uz augšu.

4-Pārklājiet loksni ar Wright traipu pa pilienam, līdz visa virsma ir pārklāta. Atstājiet uz 5 - 8 minūtēm.

5-Traipam pilnībā jānosedz slaids, neizlīstot pa malām. Ja krāsošanas laikā tas sāk iztvaikot, pievienojiet dažus papildu pilienus.

6 Pēc tam pievienojiet vienādu daudzumu amortizatora, nedaudz izpūtiet, līdz parādās raksturīgais metāla spīdums. Laiks no 10 līdz 15 minūtēm.

7-Nomazgājiet ar krāna ūdeni, novietojot maigu straumi, līdz lapa izskatās rozā.

8-Ar spirtā samērcētu marli noņemiet priekšmetstikliņa aizmugurē esošo krāsu.

9-Ļaujiet uztriepei ļoti labi nožūt, pirms ievietojat iegremdēšanas eļļu, lai to aplūkotu mikroskopā.

Lietderība

Hematoloģija

Tas ir ideāli piemērots perifēro asiņu uztriepes krāsošanai, biezu asins plankumu izmeklēšanai un šūnu izpētei no kaulu smadzeņu paraugiem.

Sakarā ar šīs krāsvielu kombinācijas ķīmiskajām īpašībām, šūnu struktūras var viegli atpazīt, un ir iespējams atšķirt dažādos šūnu veidus.

Iesnas

Šis paņēmiens ir ļoti noderīgs, lai identificētu deguna izdalījumu šūnas (epitēlija šūnas, segmentēti eozinofīli, polimorfonukleāro šūnas) alerģiskā rinīta diagnozē.

parazitoloģija

Šajā ziņā tas ir bijis noderīgs Leishmania sp pētījumiem zemādas šūnu audu histiocītos ādas čūlu gadījumā. Tāpat to izmanto, lai identificētu leikocītus izkārnījumu paraugos (fekālo leikogrammu).

Šajā gadījumā ārsts ir ieinteresēts uzzināt, vai izkārnījumos esošā leikocitoze ir polimorfonukleārā vai mononukleārā. Šis atradnes fekāliju leikogrammā noteiks, vai tā ir attiecīgi baktēriju vai vīrusu infekcija.

No otras puses, parazīti, kas cirkulē asinīs, ir atrodami eritrocītos vai plazmā. Meklējamie parazīti ir Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii un filarias, un veterinārajā medicīnā tie ir noderīgi, meklējot Theileria equi un Babesia caballi, bebesiozes cēloņus, īpaši zirgiem.

Wright traips un arī Giemsa traips ļauj diferencēt hemoparazītus no normālajiem šūnu komponentiem. Šim nolūkam var izmantot divu veidu izklājumus:

Izklājiet plāni

Asinis tiek izklātas kā plāna plēve uz priekšmetstikliņa. Tas ir iekrāsots ar Wright traipu, atklājot kodola un citoplazmas īpašības.

Biezs piliens

Šī metodika tiek izmantota, lai izpētītu parazītu klātbūtni lielākā daudzumā asiņu.

Lai to izdarītu, uz slaida tiek novietots liels asiņu piliens. Kad tas ir tur, tas jādefinē, padarot lielākus un lielākus apļus no centra uz āru, izmantojot citas slaida malu.

Visbeidzot, lai varētu novērot parazītus biezajā uztriepē, eritrocīti ir jānoskalo ar ūdeni.

Elpošanas ceļu infekcijas

Elpošanas līmenī šī metode ir noderīga arī tāpēc, ka diagnozes noteikšanai ir svarīgas krēpu, bronhu skalošanas vai bronhoalveolārā parauga šūnas.

Līdzīgi šeit var atšķirt polimorfonukleārās šūnas un mononukleārās šūnas.

Bakterioloģija

Šīs tehnikas izmantošana bakterioloģijā ir ierobežota, jo tā nav laba baktēriju krāsošanai, tāpēc to krāsošanai izmanto citas specializētas krāsošanas metodes.

Tomēr to izmanto, lai meklētu epitēlija šūnas ar Chlamydia trachomatis iekļaušanas ķermeņiem urīnizvadkanāla vai endocervikālās gļotādas uztriepes, lai gan jāatzīst, ka tā nav labākā metode.

Starp inficētiem pacientiem sarkano asins šūnu vidū ir iespējams novērot arī spirālveidīgas baktērijas, piemēram, Borrelia burgdorferi, kā arī Ehrlichia sp morulas vai iekļaušanas ķermeņus limfocītu, monocītu vai neitrofilu citoplazmā asins uztriepi.

Mikoloģija

Histoplasma capsulatum ir patogēns sēnīte, kuru bieži diagnosticē, mikroskopiski novērojot dažādus audu paraugus, kas iekrāsoti ar Wright traipu.

Kā asins parauga struktūras tiek novērotas ar Wright traipu?

Avots: Retamales E, Mazo V. Sabiedrības veselības institūts, Čīles valdība. Ieteikumi asins uztriepes iekrāsošanai hemogrammas lasīšanai.

Ieteikumi labai iekrāsošanai

Asins paraugu priekšmetstikliņiem vajadzētu spontāni izžūt. Smaržām jābūt pēc iespējas plānākām, lai krāsu labāk nostiprinātu un izvairītos no pārliekas iekrāsošanās.

Augstas kvalitātes iekrāsošanai ieteicams notraipīt divu stundu laikā pēc uztriepes sagatavošanas. No otras puses, ideāls paraugs ir kapilārās asinis bez antikoagulanta.

Tomēr, ja tiek izmantotas venozās asinis, tās jāizmanto kā antikoagulants EDTA, nevis heparīns, jo pēdējais var deformēt šūnu struktūras.

Lai nesagatavotu sagatavoto krāsvielu, tas jāuzglabā sausās vietās.

Mazgāšanas laikā ieteicams lietot ūdeni, kas noregulēts uz neitrālu pH.

Visbeidzot, ieteicams laiku pa laikam pārbaudīt laboratorijā izmantotās krāsošanas metodes.

To kā kvalitātes kontroli veic, iekrāsojot paraugus vai izvērstus modeļus. Šis solis ir svarīgs, jo tas nodrošina, ka krāsošana ir pareizi sagatavota un krāsošanas laiki ir labi standartizēti.

Ja modeļa lapa ir slikti krāsaina, tad ir problēmas, kuras jāatrisina.

Biežās kļūdas Wright krāsošanā

Ļoti bāla iekrāsošana

Ļoti bāli uztriepes parasti rodas ļoti īsa krāsošanas laika vai pārmērīgas mazgāšanas dēļ. To izlabo, pagarinot kontakta laiku ar krāsvielu vai samazinot mazgāšanas laiku.

Krāsviela izgulsnējas

Krāsas nogulsnēm smērējumā var būt vairāki cēloņi, tomēr biežākie cēloņi ir šādi: nefiltrētas krāsvielas lietošana, krāsošana uz nelīdzeniem krāsošanas tiltiem, loksņu, kas ir netīras ar putekļiem vai taukiem, mazgāšana labi pilnīga krāsošana.

Īpaši sarkana vai zila uztriepe

Buferis ir atbildīgs par krāsvielas pH līmeni. Krāsvielas, kuru pH ir zemāks par norādīto (skābās), radīs ļoti sarkanīgas uztriepes.

Ja krāsvielas pH ir virs (sārmainas), iegūs ārkārtīgi zilganu uztriepi.

Uzglabāšanas režīms

Reaģents jāuzglabā istabas temperatūrā.

Atsauces

1. Gutiérrez V. Salīdzinošs pētījums starp Wright krāsošanas metodi un Elisa testu suņu Ehrlichiosis diagnozei San Pedro Sula pilsētā Hondurasā. 2008. gada diplomdarbs, lai iegūtu veterinārmedicīnas grādu. Gvatemalas San Karlosa universitāte.
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas F. Pamata traipi mikrobioloģijas laboratorijā. Pētījumi invaliditātes jomā. 2014. gads; 3 (1): 10-18.
3. "Wright traipu." Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2018. gada 18. maijs, 12:05 UTC. 2018. gada 8. decembris, 20:37
4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó. Babesia spp. medību zirgos, Kordovā (Kolumbija). Udcaactual paziņojums. 2013; 16 (2): 451-458.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Argentīna. Redakcija Panamericana SA
6. Retamales E, Mazo V. Sabiedrības veselības institūts Čīlē. Ieteikumi asins uztriepes iekrāsošanai hemogrammas lasīšanai.