MAIJS GRÜNWALD-GIEMSA TRAIPU: PAMATOJUMS, TEHNIKA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

May Grünwald-Giemsa vai Pappenheim traipu ir atšķirīga iekrāsošanas metodi, maisījumi Giemsa un maijā Grünwald reaģenti. To lieto normālu un patoloģisku asins šūnu diferenciācijai perifēro asiņu un kaulu smadzeņu uztriepēs, kā arī histoloģisko sekciju un citoloģisko paraugu krāsošanai.

Abi reaģenti - Giemsa un Mai Grünwald - ir iegūti no Romānovska tipa krāsošanas - tehnikas, kuras pamatā ir skābās un bāzes krāsas.

Smarža, kas parāda segmentētu neitrofilu un milleocītu hroniskas mieloleikozes gadījumā, iekrāsota ar maija Grīnvalda Giemsa traipu. Dr Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) caur Wikipedia.org.

Giemsa uzlaboja šo paņēmienu, stabilizējot eozīna, metilēnzilā un to atvasinājumu maisījumu ar glicerīnu. Tā vietā Maijs Grünvalds izmanto eozīnu un metilēnzilo, kā šķīdinātāju izmantojot metanolu. Šī stratēģiskā kombinācija ir devusi izcilus rezultātus.

Lai arī šūnu morfoloģijas novērojumos tas darbojas līdzīgi Giemsa un Wright traipiem, šī tehnika uzlabo iepriekšējās, uzlabojot parazītu iekrāsošanu, kas izraisa malāriju, Chagas slimību, leišmaniozi un trichomoniāzi.

Turklāt tas ir izrādījies ļoti noderīgs paņēmiens spermatiskā šķidruma citoloģiskiem pētījumiem. Tas izceļas ne tikai ar spermas morfoloģisko īpašību parādīšanu, bet arī ar lielu efektivitāti ļauj diferencēt leikocītus, epitēlija šūnas un spermatoģenēzes šūnas.

Pamats

Metode seko Romānovska traipu veidošanai, kurā skābām krāsvielām ir selektīva afinitāte pret pamata šūnu komponentiem, un skābās sastāvdaļas piesaista pamata traipus.

Citā veidā izskaidrots, ka gan šūnu struktūrām, gan krāsvielām ir pozitīvi vai negatīvi elektriskie lādiņi; piemēram, lādiņi atgrūž, un dažādas maksas piesaista.

Piemēram, pamata krāsvielas, piemēram, metilēnzilā, ir pozitīvi lādētas, un tās piesaista negatīvi lādētas struktūras. Tāpēc šī krāsa krāso kodolus, kas ir bagāti ar DNS un RNS, kuriem ir negatīvi lādētas fosfātu grupas.

Iekrāso arī segmentētu bazofilu granulas un RNS saturošu balto asins šūnu mononukleāro šūnu citoplazmas.

Tāpat skābā krāsviela nes negatīvu lādiņu, tāpēc tā saistās ar pozitīvi lādētām struktūrām, piemēram, eritrocītiem un segmentētu eozinofilu granulām. Kas attiecas uz segmentētu neitrofilu granulām, tās nostiprina abas krāsvielas.

Krāsvielu daudzveidība

Šajā metodē vienlaikus notiek ortohromatisko un metahromatisko krāsvielu reakciju kombinācija. Ortohromatiskie līdzekļi (eozīns un metilēnzilais) saistās ar šūnu struktūru, ar kuru tie ir saistīti, un nodrošina stabilu krāsu, kas nemainās.

No otras puses, metakromatiem (metilēnzilā debeszils A un debeszils B atvasinājumi) mainās to sākotnējā krāsa, tiklīdz tie ir piestiprināti pie konkrētās struktūras, un var būt pat dažādas nokrāsas.

Visbeidzot, lai veiktu maija Grīnvaldes risinājumu, nepieciešama ūdens klātbūtne, jo bez tā krāsa iekļūs konstrukcijās, bet nefiksēsies. Lai tas notiktu, krāsvielai ir jākļūst polārai vai jonizētai, un tādējādi tai jābūt spējīgai izgulsnēties un saistīties ar saistītām struktūrām.

Tehnika

materiāli

- Bīdiet slaidus.

- krāsošanas tilti.

- Maija-Grünvaldes risinājums.

- Giemsa traipu.

- Destilēts ūdens.

Maijā Grünwald krāso koncentrētu šķīdumu

Jāizsver 0,25 g eozīna-metilēnzilā (traips saskaņā ar Maija Grīnvalda atzinumu) un jāizšķīdina 100 ml metanola. Tad preparātu sajauc 1 stundu un atstāj atpūsties 24 stundas. Laika beigās tas tiek filtrēts.

Lai izmantotu šo paņēmienu, maija Grīnvaldes krāsviela jāatšķaida šādi: 200 ml atšķaidītas krāsvielas izmēra 30 ml koncentrēta šķīduma, pievieno 20 ml buferšķīduma un 150 ml destilēta ūdens, kas noregulēts līdz pH 7,2-7,3 . Vēlāk to sajauc un filtrē.

Giemsa traipu koncentrāts

Jānosver 0,5 g debeszils-eozīna-metilēnzilā (traipu pēc Giemsa), izšķīdina 50 ml metanola un 50 ml glicerīna pievieno maisījumam.

Lai veiktu paņēmienu, atšķaida ar 1:10 ar buferšķīdumu un ļauj tam 10 minūtes atpūsties. Vajadzības gadījumā to var filtrēt.

Buferšķīduma pagatavošana ar pH 7,2

Tie būtu jāsver:

- 40 mg kālija dihidrogēnfosfāta (KH2PO4).

- 151 mg dinātrija hidrogēnfosfāta 12-hidrāta (Na2HPO4).

Abus savienojumus izšķīdina 100 ml ūdens.

Asins vai kaulu smadzeņu uztriepes krāsošanas procedūra

Ir divi režīmi: klasiskais un ātrais.

Klasiskais režīms

1. Pārklājiet uztriepes 2 līdz 3 minūtes ar atšķaidītu Maija-Grīnvalda šķīdumu.
2. Nomazgājiet ar buferētu destilētu ūdeni, lai noņemtu iepriekšējo šķīdumu.
3. Pārklājiet ar to pašu mazgājamo buferšķīdumu un atstājiet 1 minūti. Ideja ir tāda, ka iepriekšējā krāsviela ir piestiprināta pie konstrukcijām un tajā pašā laikā šūnas tiek hidratētas.
4. Pievienojiet 12 pilienus atšķaidītas Giemsa tinktūras buferētam ūdenim un uzpūš, lai sajauktu un homogenizētu. Ļaujiet tai atpūsties 15 līdz 20 minūtes.
5. Nomazgājiet uztriepes ar buferētu destilētu ūdeni un novietojiet nožūt.
6. Fokusējiet un apskatiet iekrāsotās asins šūnas gaismas mikroskopā, izmantojot 40X objektīvu. Ja nepieciešams, 100X var izmantot.

Ātrais režīms

1. Uz 1 minūtes pārklājiet uztriepi ar atšķaidītu maija Grīnvalda traipu.
2. Mazgāt ar buferētu destilētu ūdeni.
3. Pārklājiet ar buferētu ūdeni un ļaujiet tai atpūsties 1 minūti.
4. Pievienojiet atšķaidīto Giemsa traipu un atstājiet 5 minūtes.
5. Nomazgājiet ar destilētu buferšķīdumu un ļaujiet nožūt.

Šeit aprakstītie paņēmieni ir pamatnostādne, taču jāņem vērā, ka procedūras un krāsošanas laiki atšķiras atkarībā no komercsabiedrības, kas izplata reaģentus. Ieteicams ievērot soļus, ko stingri norāda katra tirdzniecības māja.

Spermatiskā šķidruma uztriepes krāsošanas tehnika

1- 4 minūtes pārklājiet uztriepi ar plānu maija Grīnvaldes šķīduma kārtu.

2- Noņemiet krāsvielu un mazgājiet ar destilētu ūdeni.

3 - Uz 15 minūtēm ielieciet atšķaidīta Giemsa slāni (1:10) destilētā ūdenī.

4- Noņemiet krāsvielu un mazgājiet ar destilētu ūdeni.

5- Ļaujiet nožūt un novērojiet zem mikroskopa.

Paredzamās krāsas ar maija Grīnvalda Giemsa traipu

Svarīgas specifikācijas

Metode prasa, lai reaģentu un mazgāšanas šķīdumu pH būtu noregulēts līdz 7,2-7,3, lai netiktu izkropļota krāsvielu saistība ar šūnu struktūrām un paredzamā gala krāsa nemainītos.

Lietojumprogrammas

Šo paņēmienu klīniskās laboratorijas izmanto, lai iekrāsotu perifēro asiņu un kaulu smadzeņu uztriepes, audu sekcijas un citoloģiju.

Hematoloģiskajā laukā šai metodei ir liela nozīme, pētot šūnu patoloģiju formas, lieluma un skaita ziņā. Tas ir ļoti vērtīgs rīks noteiktu slimību, piemēram, leikēmiju un anēmiju, diagnosticēšanai.

Turklāt tas ir īpaši noderīgs, meklējot parazītus hematoloģiskos (Plasmodium sp un Trypanosoma cruzi) vai histoloģiskos (Leishmanias sp) apgabalos.

Vaginālā citoloģija

Maksts citoloģijā šī metode ir īpaši izdevīga Trichomonas vaginalis novērošanai. Tas ir svarīgs atradums, jo tā klātbūtne imitē karcinomas attēlus in situ, kas vēlāk pazūd, kad tiek izvadīts parazīts.

Spermas paraugs

Tas ir bijis ideāls līdzeklis spermas paraugu pētīšanai, jo tas sniedz vērtīgu informāciju par spermas kvalitāti.

Piedāvātie dati galvenokārt ir saistīti ar skaitu un morfoloģiju, kā arī ar vienlaikus esošajām šūnām, kuras var būt un kuras ir vitāli svarīgas, piemēram, cilmes šūnām, leikocītiem un epitēlija šūnām.

Izmantojot šo analīzi, ir iespējams aprakstīt novirzes no normas, kas novērotas spermā galvas, kakla, vidusdaļas un galvenā gabala daļā.

Turklāt tie var arī palīdzēt parādīt hemospermijas (eritrocītu klātbūtne spermā) un leikospermijas vai piospermijas (palielināts leikocītu skaits spermā) gadījumus.

Atsauces

1. Costamagna S, Prado M. Svaiga testa validācija, maija Grünwald-Giemsa un Gram traipi un barotnes Trichomonas vaginalis diagnozei. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Pieejams: scielo.
2. Merck KGaA laboratorija. Maijs Grünwald eosin metilēnzilā mikroskopijai.
3. "Traips maijs-Grünwald-Giemsa." Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2018. gada 15. novembris, 14:37 UTC. 2019. gada 8. janvāris, 04:29: lv.wikipedia.org
4. Stikla ķimikāliju Panreac laboratorija. Reaģenti histoloģiskām metodēm, hematoloģijai un mikrobioloģijai. Pieejams vietnē glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Ieteikums asins uztriepes iekrāsošanai, lai nolasītu hemogrammu. Nacionālā un atsauces biomedicīnas laboratorija. Čīles Sabiedrības veselības institūts.
6. Sarabia L. Spermiogramma pēc PVO kritērijiem. Attīstības anatomijas un bioloģijas programma. Medicīnas skola. Čīles universitāte. Pieejams vietnē: pp.centramerica.com