KINYOUN KRĀSOŠANA: PAMATOJUMS UN PAŅĒMIENI - BIOLOĢIJA - 2024

Kinyoun krāsojumam ir iekrāsošanas paņēmiens, ko izmanto, lai traipu baktērijas un parazītus izturīgu skābes alkoholu. Tas ir dzimis, mainot Zīla-Neelsena krāsu; Abas tehnikas tiek interpretētas vienādi, taču tās atšķiras ar diviem elementiem: galvenā reaģenta sagatavošanā un ar to, ka Kinyoun tehnika neizmanto siltumu.

Šī iemesla dēļ to sauc arī par auksti modificētu Ziehl-Neelsen vai Kinyoun traipu. Tas ir paredzēts Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, netipiskām mikobaktērijām, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris un Cyclosporas cayetanensis krāsošanai.

Cryptosporidium parvum iekrāso ar Kinyoun traipu. Punlop Anusonpornperm, no Wikimedia Commons

Ir vērts atzīmēt, ka Nocardia ar šo paņēmienu nokrāso vāji, jo tie ir daļēji izturīgi pret skābju un spirtu, tāpēc šai ģintij ir jāveic metodoloģijas modifikācijas.

Savukārt aukstā Kinyoun tehnika ir apvienota ar trihera paņēmienu, ko Didjē modificējis kokcīdiju (Cryptosporidium parvum un Isospora belli) un mikrosporidiju sporu (Enterocytozoon bieneusi un Encephalitozoon intestinalis) noteikšanai.

Pamats

Galvenais krāsojošais reaģents ir karbolfuksīns vai karbola fuksīns, kam piemīt īpašība saistīties ar karbolskābēm mikobaktēriju un noteiktu parazītu lipīdiem bagāto vaskaino šūnu sieniņās (mikola skābes).

Skābais balinātājs šo saiti neitralizē; tāpēc mikroorganismi tiek definēti kā ātri skābi saturoši.

Atšķirībā no Zīla-Neelsena paņēmiena, kurš krāsu nostiprina ar karstumu, Kinyoun tehnikā šis solis nav nepieciešams, jo šai metodei sagatavotais karbolais fuksīna šķīdums satur augstu fenola koncentrāciju.

Fenols izšķīdina lipīdu materiālu šūnas sienā, ļaujot iekļūt krāsā karbolfuksīnam. Pēc krāsvielas iekļūšanas tā paliek nemainīga, neskatoties uz skābā spirta mazgāšanu.

Tādā veidā ātri skābes saturošie mikroorganismi iegūst raksturīgo sarkano krāsu, savukārt viss, kas nav ātri skābes, mainās krāsa un paliek zils.

Tehnika

materiāli

- modificēts karbola fuksīns.

- Alkoholskābe.

- metilēnzilā.

Kinyoun carbol fuchsin sagatavošana

- pamata fuksīns: 4 gr.

- Fenols: 8 ml.

- Alkohols (95%): 20 ml.

- Destilēts ūdens: 100 ml.

Pamatsfuksīns lēnām jāizšķīdina spirtā, nepārtraukti samaisot. Pēc tam kristalizēto fenolu izkausē ūdens vannā 56 ° C temperatūrā. Pēc izšķīdināšanas iepriekš sagatavotajam fuksīna šķīdumam pievieno 8 ml.

Skābes-spirta sagatavošana

- koncentrēta sālsskābe: 3 ml.

- Etanols (95%): 97 ml.

Tas ir jāmēra, jāapvieno un jāsamaisa.

Metilēnzilā kontrastvielas krāsošana

- metilēnzilā: 0,3 g.

- Destilēts ūdens: 100 ml.

Tas tiek nosvērts un izšķīdināts.

Kinyoun krāsošanas tehnika

1- Sagatavo tieši no parauga uztriepi, kas cita starpā var būt krēpas, plaušu šķidrums, urīna nogulsnes, cerebrospinālais šķidrums vai ekskrementi; vai no mikroorganismu suspensijas, kas iegūta no tīrām kolonijām, kas izveidotas primārajos barotnēs.

2 - Piestipriniet uztriepi ar karstumu.

3 - Uzlieciet uztriepi uz krāsošanas tilta un pārklājiet ar sagatavoto Kinyoun karbola fuksīna reaģentu. Ļaujiet tai atpūsties 3 līdz 5 minūtes.

4 - Mazgāt ar destilētu ūdeni.

5 - Baliniet ar skābu spirtu 3 minūtes un atkal mazgājiet ar destilētu ūdeni.

6- Atkal baliniet ar skābu spirtu 1 vai 2 minūtes, līdz vairs neizdalās krāsviela.

7- Nomazgājiet ar destilētu ūdeni un ļaujiet notecēt, novietojot priekšmetstikliņu vertikālā stāvoklī.

8- Preparātu pārklāj ar metilēnzilo un ļauj iedarboties 4 minūtes.

9- Nomazgājiet ar destilētu ūdeni un ļaujiet nožūt.

10. Pārbaudiet 40X un pēc tam 100X.

Lai uzlabotu un paātrinātu ātri skābju mikroorganismu iekrāsošanu, pievienojiet 1 pilienu mitrināšanas līdzekļa (piemēram, Tergitol Nr. 7) 30 līdz 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.

Dažās laboratorijās metilēnzilā kontrasta krāsa tiek mainīta uz koši zaļu vai pikrīnskābi; pirmais piešķir fona zaļai krāsai, bet otrais - dzeltenu krāsu.

Īpašā Kinyoun tehnika Nocardias

Lai uzlabotu Nocardia ģints baktēriju iekrāsošanos, izmanto Kinyoun traipa modifikāciju. Metode ir šāda:

1- Uz 3 minūtēm pārklājiet uztriepi ar Kinyoun carbol fuchsin.

2- Nomazgājiet ar destilētu ūdeni.

3 - īsi nokrāsojiet ar skābu spirtu, kas pagatavots ar 3% saturu, līdz vairs neizdalās krāsviela.

4 - Vēlreiz nomazgājiet ar destilētu ūdeni.

5- Pārklājiet preparātu ar metilēnzilo un ļaujiet tam iedarboties 30 sekundes.

6- Nomazgājiet ar destilētu ūdeni un ļaujiet nožūt.

Kombinētais karbola fuksīna un trihroma paņēmiens, ko modificējis Didjē

Šī metode ir ieteicama vienlaikus izkārnījumu paraugu analīzei attiecībā uz kokcīdijām un Microsporidium sporām. Veicamā procedūra ir šāda:

1- 10 minūtes pārklājiet uztriepi ar Kinyoun carbol fuchsin.

2- Noņemiet krāsvielu un mazgājiet ar destilētu ūdeni.

3 - Baliniet 30 sekundes ar sālsskābes spirtu.

4 - Vēlreiz nomazgājiet ar destilētu ūdeni.

5- Pārklājiet uztriepi ar trihroma šķīdumu 30 minūtes 37 ° C temperatūrā.

6- Nomazgājiet ar destilētu ūdeni.

7 - Baliniet 10 sekundes ar etiķskābes spirtu.

8- Nomazgājiet uztriepi 30 sekundes, izmantojot 95% etanolu.

QA

Kā pozitīvu kontroli sagatavo un uzkodas ar Mycobacterium tuberculosis celmiem un krāso ar reaģentiem, kas sagatavoti, lai pārbaudītu, vai baktērijas iegūst atbilstošu krāsu (sarkanā fuksija).

Negatīvas kontroles var izmantot arī, ātri sagatavojot uztriepes ar jebkuru celmu, izņemot skābo spirtu, tādējādi pārbaudot, vai viss paraugs iegūst kontrastējošu krāsu.

Kinyoun tehnika salīdzinājumā ar Ziehl-Neelsen tehniku

Kinyoun tehnika ir vienkāršāka, jo tā novērš sildīšanas pakāpi, bet galvenā priekšrocība ir tā, ka tā ilgtermiņā ļauj izvairīties no ļoti toksisku un vēzi izraisošu tvaiku izplūdes. Tāpēc Kinyoun traips ir drošāks personāla krāsošanai.

Ir svarīgi ņemt vērā, ka ir jārūpējas, lai reaģenti tieši nenonāktu saskarē ar ādu, jo tie ir kodīgi un balinātājs ir viegli uzliesmojošs.

Runājot par trūkumiem, negatīva uztriepe nebūt nenozīmē, ka organisma nav. Turklāt šūnu atlieku klātbūtne var izraisīt viltus pozitīvus rezultātus, izraisot neskaidrības diagnozē.

Atsauce

1. Lietišķā klīniskā ķīmija. (2016). BK Kinyoun komplekts.Pieejams vietnē: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinijona traips un divas Kokcidijas HIV. Medicīnas žurnāls MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Argentīna. Redakcija Panamericana SA
4. Konemāns E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. (5. izd.). Argentīna, Panamericana SA redakcija
5. Wikipedia līdzautori. "Kinyoun traipu." Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija, 2018. gada 8. februāris. Web. 2019. gada 5. janvāris.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Krāsošanas tehnikas ieviešana vienlaicīgai kokcidijas un Microsporidia diagnostikai. Republikas Universitātes Higiēnas institūts. Montevideo. Urugvaja. Pieejams vietnē: higiēna.edu.uy