- Pamats
- Tehnikas pag
- -Anthona traips
- materiāli
- Process
- Interpretācija
- Priekšrocība
- Trūkumi
- -Negatīva iekrāsošana
- materiāli
- Process
- Priekšrocība
- Trūkumi
- Interpretācija
- -Indijas tintes tehnika
- materiāli
- Process
- Interpretācija
- Atsauces
Iekrāsojot kapsula ir starpība iekrāsošanas metodi, kas ir īpašumā stresa polisaharīdu struktūra apkārtējo noteiktas baktērijas un rauga sauc kapsula. To lieto klīniskajās laboratorijās, lai palīdzētu diagnosticēt noteiktas patoloģijas, ko izraisa kapsulēti mikroorganismi.
To izmanto arī mācību laboratorijās, lai parādītu šo morfoloģisko struktūru veselības zinātņu karjeras studentiem, piemēram, medicīnā, bioanalīzē, medmāsā vai citotehnoloģijā.
Klebsiella pneumoniae uztriepe, kas iekrāsota ar kapsulas traipu. Indijas tintes metode ar safranīnu. Avots: А.А.В
Ir vairākas vienkāršas metodes, lai pierādītu kapsulas klātbūtni mikroorganismos, kam tā ir: - negatīvais traips, Entonija traips un variants, kas apvieno iepriekšējās divas.
Negatīvu krāsošanu galvenokārt izmanto CSF paraugos, ja ir aizdomas par rauga Cryptococcus neoformans klātbūtni. Šis raugs ir bieži sastopams meningīta cēlonis.
Šajā tehnikā tiek izmantota nigrosīna vai Indijas tinte, un tās pamatā ir kontrasta radīšana starp preparāta fonu un necaurlaidīgo mikroorganisma kapsulu. Fons kļūst tumšs, un kapsula ir bezkrāsaina. Tādā veidā šī struktūra tiek atklāta.
Attiecībā uz Entonija paņēmienu var teikt, ka to galvenokārt izmanto mācību laboratorijās, lai demonstrētu polisaharīdu struktūru tādās baktērijās kā Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae un Neisseria meningitidis.
Šo paņēmienu diagnostikai izmanto ļoti reti, jo ir arī citi ikdienas testi, kas ļauj identificēt šos mikroorganismus.
Pamats
Kapsula ir spēcīga polisaharīdu struktūra. Tas aizsargā mikroorganismus no fagocitozes, un tāpēc tiem ir grūti iekļūt.
Tāpēc kapsulu traipu pamatā ir kontrasts. Krāsvielas krāso preparāta dibenu, kamēr kapsula paliek bezkrāsaina.
Tādēļ ar šīm metodēm kapsula ir viegli atpazīstama. Ja mikroorganismam nav kapsulas, tas nebūs atšķirams ar šāda veida krāsošanu, jo viss tiks krāsots vienā krāsā.
Neskatoties uz dažādu krāsvielu un procedūru izmantošanu, visām kapsulas krāsošanai izmantotajām metodēm ir vienāds pamatojums.
Tehnikas pag
-Anthona traips
Entonija traipā kā traipu izmantots kristālviolets. Tas nokrāsos baktēriju ķermeni un fonu purpursarkanā krāsā.
No otras puses, tiek izmantots 20% vara sulfāts. Tas kalpo kā mazgāšanas šķīdums, tas ir, tas no preparāta noņem lieko violeto kristālu, padarot kapsulas skaidras, bet bez baktēriju ķermeņa vai fona krāsas zaudēšanas.
materiāli
- zaigojošs piens.
- Slidkalniņš.
- 1% violets kristāls.
- 20% vara sulfāts.
- optiskais mikroskops.
- iegremdēšanas eļļa.
Process
Šis paņēmiens sastāv no:
- Mikroorganismu 36 stundas kultivē zilganā pienā.
- Priekšmetstikliņa beigās ievieto kultūras pilienu un blakus tam, ielieciet violetas stikla pilienu, samaisiet un izklājiet ar cita priekšmetstikla galu.
- Žāvē gaisu un neliec siltumu.
- Nomazgā ar 20% vara sulfāta šķīdumu, ļauj nožūt.
- Novērot mikroskopā ar iegremdēšanas mērķi. Meklēt virzienā uz izplatības galiem.
Ir svarīgi neizmantot siltumu ne fiksēšanai, ne žāvēšanai, jo tas sabojā kapsulu. Nemazgājiet arī ar ūdeni.
Interpretācija
Zaigojošs piens ir lieliska barotne, jo tas nodrošina nepieciešamās barības vielas mikroorganismiem, lai izveidotu ievērojamu kapsulu.
No otras puses, zaigojošais piens veidos biezu un kompaktu dibenu, kas tiks krāsots purpursarkanā krāsā kopā ar baktēriju ķermeni, bet kapsula, kas ieskauj mikroorganismu, paliks bezkrāsaina. Tāpēc ap baktēriju ķermeni tiek novērota skaidra halo.
Ar Entonija traipu iekrāsotās Klebsiella pneumoniae uztriepes grafiskais attēlojums mikroskopiskā novērošanā. Avots: Autores veidots maģistrs. Marielsa Gil.
Priekšrocība
Tas ir vienkāršs izpildīšanas paņēmiens. Nav nepieciešams noteikt.
Jāatzīmē arī, ka var izmantot arī citas barotnes, taču priekšroka tiek dota piena barotnei, jo tās priekšrocība ir ievērojamāku kapsulu nodrošināšana.
Trūkumi
Tā ir nedaudz darbietilpīgāka tehnika nekā negatīva iekrāsošana, un tās vizualizēšanai ir nepieciešams gaidīt, līdz preparāts pilnībā izžūst.
-Negatīva iekrāsošana
materiāli
- Bīdiet slaidus.
- Barotne ar mikroorganismu.
- ķīniešu tinte vai nigrozīns.
- optiskais mikroskops.
- fizioloģiskais fizioloģiskais šķīdums.
Process
Ievietojiet pilienu fizioloģiskā šķīduma uz pārsega un izšķīdiniet nelielu mikrobu kultūras daļu. Svarīgi, lai preparāts nebūtu pārāk biezs. Tad ielieciet pilienu ķīniešu tintes vai nigrozīna un samaisiet.
Pēc tam virs preparāta tiek uzlikta pārklājoša loksne, nepārpildot šķidrumu. To novēro mikroskopā, vispirms koncentrējoties uz 10X objektīvu un pēc tam pārejot uz 40X.
Šo paņēmienu var tieši izmantot arī CSF paraugos. Tas ir, tā vietā, lai ievietotu mikrobu kultūras pilienu, tiek ievietots CSF piliens.
Priekšrocība
Tā ir vienkārša veikšanas metode, tajā pašā laikā lēta. Tas neprasa preparāta fiksāciju vai žāvēšanu.
Trūkumi
Trūkums ir tāds, ka tas jānovēro mikroskopā pirms preparāta izžūšanas, jo, ja tas notiks, mikroorganismi saraujas, kas apgrūtina vizualizāciju.
No otras puses, nepatiesi pozitīvi rezultāti var rasties, ja analītiķis nav pieredzējis, jo leikocītus bieži sajauc ar raugiem.
Rauga kapsulu novērošana ar ķīniešu tintes vai nigrosīna metodi būtu jāuzskata par Cryptococcus neoformans iespējamo diagnozi, līdz tā tiek pierādīta ar kultūru.
Tas notiek tāpēc, ka ir arī citi raugi, kas varētu būt meningīta cēlonis, un ne tikai Cryptococcus neoformans, piemēram, Candida un Rhodotorula ģints ģints pārstāvji, kā arī citas Cryptococcus sugas.
Interpretācija
Ja ir kapsulēti mikroorganismi, tiks novērots tumšs fons ar caurspīdīgiem ķermeņiem, kas peld šķidrumā, izceļot kapsulas klātbūtni.
Cryptococcus neoformans kapsula, kas iekrāsota ar ķīniešu tinti. Avots: Foto kredīts: Satura nodrošinātāji: CDC / Dr. Leanor haley
-Indijas tintes tehnika
Šo paņēmienu var veikt arī ar nigrosīnu. Tas ir iepriekš izskaidroto paņēmienu apvienojums. Šajā tehnikā tiek izmantota kristālvioleta un indiešu tinte vai nigrozīns.
Baktēriju ķermenis no kristālviolets kļūst purpursarkans, jo tas ir negatīvi lādēts, turpretī nigrosīns krāso uztriepes dibenu. Ja baktērijai ir kapsula, tā parādīsies kā caurspīdīgs halo ap mikroorganismu.
Kristālvioleto krāsu var aizstāt ar jebkuru no šīm krāsām: safranīnu, pamata fuksīnu vai metilēnzilo.
materiāli
- violets stikls.
- Nigrosīna vai Indijas tinte.
- Bīdiet slaidus.
- Mikroskops.
Process
- Audzējiet mikroorganismus barotnē.
- Priekšmetstikliņa galā un blakus tam ielieciet kultūras pilienu, ielieciet Indijas kristāla tintes vai nigrozīna pilienu, samaisiet un izklājiet ar cita priekšmetstikla galu.
- Žāvējiet gaisā un nepiestipriniet karstumu.
- Pārklājiet ar violetu kristāla šķīdumu 1 minūti, mazgājiet ar destilētu ūdeni, bet ļoti smalki (mīksta strūkla), ļaujiet tai nožūt brīvā dabā.
- Novērot mikroskopā ar iegremdēšanas mērķi. Meklēt virzienā uz izplatības galiem.
Interpretācija
Būs redzams violets baktēriju ķermenis un tumšs fons. Kapsula, ja tāda ir, ap baktērijām parādīsies bezkrāsaina.
Atsauces
- Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Mikrobioloģijas pamatmetodes. Baktēriju novērošana. Reduca (bioloģija). Mikrobioloģijas sērija. 2010; 3 (5): 15-38. D
- López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Pamata traipi mikrobioloģijas laboratorijā. Mediagraphic.org. 2014. gads; 3 (1): 10-18. Pieejams vietnē: medigraphic.com
- Gil M. Negatīvs krāsojums: pamatojums, paņēmiens, priekšrocības un trūkumi. Lifeder.com.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Argentīna. Redakcija Panamericana SA
- Tankeshwar A. Kapsulas traips: princips, procedūra un rezultāti. 2019. Medicīniskās mikrobioloģijas rokasgrāmata. Pieejams vietnē: microbeonline.com