VOGES-PROSKAUER TESTS: PAMATS, SAGATAVOŠANA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Voges-Proskauer tests ir bioķīmisks testu izmanto, lai palīdzētu identificēt baktēriju pieder Enterobacteriaceae dzimtas. Tas ir īpaši noderīgi, lai cita starpā atšķirtu Escherichia coli celmus no Klebsiella un Enterobacter.

Pārbaudi veic šķidrā barotnē ar nosaukumu Methyl Red - Voges Proskauer, kas labāk pazīstama ar saīsinājumu RM / VP. Šī barotne sastāv no buferēta polipeptona, glikozes, dikālija fosfāta un destilēta ūdens.

Metilsarkanā Vogesa Proskauera (RM / VP) komerciālā vide / VP tests ir attiecīgi pozitīvs un negatīvs. Avots: Autores uzņemts foto MSc. Marielsa Gil / Sudipta.nov15, no Wikimedia Commons

Pašreizējā RM / VP barotne ir Clark and Lubs barotnes modifikācija, kas sākotnēji saturēja zemāku peptonu un glikozes koncentrāciju. Tādējādi tika saražots mazāk ūdeņraža jonu, kas vajadzīgs pozitīvajai Voges-Proskauera reakcijai.

Pārbaudes pamatā ir mikroorganismu spēja izmantot glikozi caur butilēnglikola ceļu un skābekļa un sārmaina pH klātbūtnē radīt neitrālu galaproduktu, ko sauc par acetoīnu.

RM / VP barotnē papildus spējai atklāt Voges-Proskauer testu var atklāt arī metilsarkano testu.

Pamats

Voges-Proskauer testa bāze

Barotnē esošie pluripeptoni nodrošina pamatprasības baktēriju augšanai. Savukārt glikoze ir galvenais savienojums. Daudzām baktērijām piemīt spēja metabolizēt glikozi un veidot piruvīdskābi.

Piruvīnskābe ir glikozes metabolisma viduspunkts, un no tā katrs mikroorganisms var izvēlēties atšķirīgus ceļus. Daži veidos jauktas skābes, piemēram, pienskābi, etiķskābi, skudrskābi un dzintarskābi, bet citi veidos neitrālus produktus, piemēram, 2,3-butāndiolu.

Voges-Proskauer tests atklāj mikroorganismu spēju aerobos apstākļos veidot acetilmetilkarbinolu (acetoīnu), kas ir 2,3-butāndiola starpprodukts.

Acetoīns tiek reducēts un veido 2,3-butāndiolu, bet šī reakcija ir atgriezeniska, tāpēc, ja 2,3-butāndiols tiek oksidēts, veidojas acetoīns. Tāpēc skābeklis ir būtisks.

Dimālija fosfāts ir buferšķīdums, kas buferizē maisījumu ar pH 6,9 ± 0,2.

Pierādījumu atklāšana un interpretācijas pamats

Lai demonstrētu reakciju, ir jāveic izstrāde, izmantojot divus reaģentus (Barrit reaģentus), pazīstamus kā Voges A un Voges B.

Voges A ir 5% α-naftola šķīdums, un Voges B ir 40% kālija hidroksīda preparāts. Ja kālija hidroksīds nav pieejams, to var aizstāt ar 40% nātrija hidroksīdu.

Α-Naftols ir katalizators, kas palielinās reakcijas krāsas intensitāti, padarot testu jutīgāku. Vispirms vispirms jāpievieno α-naftools, kratot mēģeni tā, lai barotne nonāktu saskarē ar skābekli. Šādā veidā esošais acetoīns tiek oksidēts par diacetilu, un 2,3-butāndiols tiek oksidēts, veidojot acetoīnu, pārnesot to uz diacetilu.

Tādējādi α-naftools saistīsies ar diacetilu, kurš, savukārt, ir pievienojies guanidīna kodolam, kas atrodas aminoskābē arginīnā, pēdējais nāk no pluripeptoniem.

Kālija vai nātrija hidroksīds savukārt ir atbildīgs par CO ₂ absorbciju un reaģēšanu ar peptoniem. Šī reakcija izraisa laškrāsas krāsas veidošanos, kas ir skaidri redzama pēc caurules ļoti kratīšanas.

Lai krāsa uzreiz parādītos, jāsajauc pareizs diacetil-, peptona un α-naftola daudzums. Ja tas nenotiek, mēģenei pirms tulkošanas ļauj 15 minūtes atpūsties.

Tests parasti ir pozitīvs pēc 2 līdz 5 minūtēm, kad var redzēt vāji rozā krāsu. Ja krāsu atstāj nostāvēties no 30 minūtēm līdz 1 stundai, krāsas intensitāte būs maksimāla (izteikti sarkana).

Ja buljons kļūst dzeltens, parādīsies negatīvs tests. Pēc vienas stundas, ja testa rezultāts ir negatīvs, kālija hidroksīda un α-naftola reakcijas rezultātā var veidoties vara krāsa.

Sagatavošana

Vidējs MR / VP

Nosver 17 g dehidrētas barotnes un izšķīdina litrā destilēta ūdens. Ļaujiet nostāvēties 5 minūtes. Karsē līdz vārīšanās temperatūrai, lai pilnībā izšķīst. Pasniedz 3 līdz 4 ml mēģenēs un 15 minūtes sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā.

Dehidrētā barotne ir smilškrāsas krāsā, un sagatavotā barotne ir gaiši dzintara krāsā.

Barotnes galīgais pH ir 6,9 ± 0,2.

Voges Reaģents

Nosver 5 g α-naftola un izšķīdina 50 ml etilspirta (absolūti). Pēc tam turpiniet pievienot etilspirtu, līdz tas sasniedz 100 ml.

Voges B reaģents

Nosver 40 g kālija hidroksīda un vārglāzē izšķīdina 50 ml destilēta ūdens. Stiklu jānovieto auksta ūdens vannā, lai kontrolētu temperatūru, jo, izšķīdinot preparātu, temperatūra strauji paaugstinās.

Pēc tam, kad šķīdums ir auksts, to pārnes uz mērkolbu un uzpilda līdz 100 ml ar destilētu ūdeni.

Voges-Proskauer testa procedūra

Lai veiktu Voges-Proskauer testu, RM / VP buljonu inokulē ar pētāmo mikroorganismu no tīras kultūras 18 līdz 24 stundas.

Sējmateriālam nevajadzētu būt ļoti blīvam. To inkubē 35-37 ° C temperatūrā no 24 līdz 48 stundām, kaut arī dažreiz ir nepieciešama inkubācija vairākas dienas. Cowan un Steel uzskata, ka 5 dienas ir minimālais inkubācijas laiks, kas nepieciešams, lai noteiktu visas Enterobacteriaceae dzimtas Voges-Proskauer (VP) sugas.

Testa izstrāde

1 ml alikvotu atdaliet mēģenē un attīsta šādi: Ievietojiet 12 pilienus (0,6 ml) Voges A reaģenta un 4 pilienus (0,2 ml) Voges B. Samaisiet, lai aerētu un ļautu nostāvēties. 5–10 minūtes pirms tulkošanas. Tomēr, ja tests joprojām ir negatīvs, ļauj tam sēdēt un novērot mēģeni pēc 30 minūtēm līdz 1 stundai.

Sārti sarkanas krāsas izskats norāda, ka Voges-Proskauer reakcija ir pozitīva. Ja barotne paliek dzeltena, reakcija ir negatīva.

Izstrādātāju pievienošana norādītajā secībā un daudzumā ir būtiska, lai izvairītos no viltus negatīvām.

Izmantojiet

Voges-Proskauer tests ir noderīgs, lai atšķirtu E. coli celmus, kas ir VP negatīvi, starp Klebsiella, Enterobacter, Serratia ģintīm, kuriem ir VP pozitīvi celmi.

Avots: Koneman E, Allens S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.

QA

Kontroles celmus var izmantot sagatavotās barotnes kvalitātes pārbaudei, ieskaitot Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium un Enterobacter cloacae ATCC 13047.

Gaidāmie rezultāti ir pozitīvas Voges-Proskauer reakcijas tikai attiecībā uz K. pneumoniae un E. cloacae. Pārējie rada negatīvas reakcijas.

Atsauces

1. Britannia laboratorijas. MR-VP vide. 2015.Pieejams vietnē: www.britanialab.com
2. Microkit laboratorijas. M-Ident Voges Proskauer. 2014. Pieejams: http://www.medioscultivo.com
3. Mac Faddin J. (2003). Bioķīmiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. ed. Redakcija Panamericana. Buenosairesa. Argentīna.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
5. Konemāns E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.