VIDĒJS SIMTS: PAMATS, SAGATAVOŠANA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

SIM medijs ir bieza masa, un starpība agars, kas īpaši izstrādāta, lai palīdzētu identificēt dažas baktērijas, īpaši Enterobacteriaceae. Tas sastāv no tripteina, peptona, dzelzs sulfāta, amonija sulfāta, nātrija tiosulfāta un agara.

Šī vide ļauj veikt trīs svarīgus testus: sērūdeņraža (H ₂ S) veidošanos, indola veidošanos un kustīgumu, tātad saīsinājumu SIM. Lielās lietderības dēļ to nevar atrasties bakterioloģijas laboratorijā.

A. Tirdzniecības SIM nesējs B. SIM H2S (-), Indola (-) un Motilitātes (+) pārbaude un SIM H2S (+), Indola (-), Motilitātes (+) pārbaude. Avots: A. Autores fotogrāfija MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

Atšķirībā no citiem barotnēm tai jābūt daļēji cietai, lai dažu baktēriju kustības spēja būtu nosakāma. Šajā ziņā šis tests ļoti labi darbojas Enterobacteriaceae, bet ne fermentējošos gramnegatīvos stieņos, kur priekšroka tiek dota citām metodēm, piemēram, piekārtiem kritieniem.

SIM nesējs ļauj atšķirt noteiktas specifiskas īpašības, kas raksturo dažas baktērijas attiecībā pret citām. Piemēram Escherichia coli atšķiras ar to H ₂ S (-), Indola (+) un kustīguma (+), kamēr Proteus mirabilis ir H ₂ S (+), indola (-), kustīgums (+).

Pamats

Tā ir barotne, kas tiek uzskatīta par diferenciālu, jo tās izmantošana atšķir mikroorganismus, kas spēj ražot sērūdeņradi, no tiem, kas to nedara; tas arī izceļ tos, kas veido indolu no triptofāna, no tiem, kas to nedara, un visbeidzot atšķir kustīgās baktērijas no nekustīgajām.

Enerģijas avots

Tāpat kā jebkurā barotnē, tajā ir elementi, kas nodrošina nepieciešamās barības vielas, lai varētu attīstīties neprasīgi mikroorganismi. Šos elementus attēlo peptoni un tripteins.

Mikroorganismu attīstība vidē ir būtiska, lai varētu novērot to īpašību esamību vai neesamību, kuras šī barotne novērtē.

Sērūdeņraža iegūšana

A saīsinājuma SIM burts S norāda uz sērūdeņraža (H ₂ S) ražošanu . Baktērijas, kas spēj veidot sērūdeņradi, uzņems sēru no nātrija tiosulfāta.

Pēc tam, kad H ₂ S - bezkrāsas gāzes - tiek veidots, tas reaģē ar dzelzs sāls, kas atrodas vidē, veidojot dzelzs sulfīds, skaidri redzams (melns nogulsnes). Baktērijas, kas neveido H ₂ S, atstāj barotni no sākotnējās krāsas (smilškrāsas).

Melno nogulsņu klātbūtne var kavēt kustīgumu interpretāciju. Tomēr ir zināms , ka vairums H ₂ S producējošo Enterobacteriaceae ir pozitīvi kustīgas, piemēram, Salmonella, Proteus un Citrobacter. Turklāt melnās nogulsnes, kas pārklāj gandrīz visu barotni, liecina par pozitīvu kustīgumu.

Indola veidošanās

Otrais saīsinājuma SIM burts ir "I", kas apzīmē indola veidošanos.

Šajā ziņā tripteins papildus tam, ka tas ir barības vielu avots, pilda arī citu pamatfunkciju. Šis peptons ir bagāts ar aminoskābi, ko sauc par triptofānu, tāpēc tas var parādīt baktērijas, kas ražo triptofanāzi.

Šis enzīms ir atbildīgs par aminoskābes triptofāna šķelšanu, un no tā izrietošā veidā veidojas indols (bezkrāsaina viela), pirūdskābe un amonijs.

Tāpēc, lai parādītu šo reakciju, jāpievieno atklājoša viela (Ehrila reaģents vai Kovaca reaģents). Vai nu reaģē ar indolu, uz agara virsmas veidojot sarkanas fuksijas gredzena formu. Ja parādās fuksijas gredzens, indola testu interpretē kā pozitīvu.

Baktērijas, kurām nav šī enzīma, neveidos gredzenu, un to interpretē kā negatīvu indola testu.

Ir svarīgi atzīmēt, ka indola testam jābūt pēdējam, kas jāinterpretē, jo pēc reaģenta pievienošanas barotne kļūst duļķaina, apgrūtinot kustīgumu.

Motilitāte

Visbeidzot vārda SIM burts "M" nozīmē kustīgumu. Lai novērtētu kustīgumu, šī barotne ir stratēģiski daļēji cieta, jo šī īpašība ir būtiska, lai varētu novērot baktēriju kustību. Baktērijas, kurām ir flagella, ir tās, kuras dod šo pozitīvo testu.

Pozitīvs tests būs redzams, ja tiek novērots duļķainība gan sākotnējā inokulātā, gan ap to. Tā kā nemotīlas baktērijas attīstās tikai sākotnējā sējmateriāla ceļā.

Sagatavošana

Vidēja SIM

Nosver 30 g dehidrētas barotnes un izšķīdina litrā destilēta ūdens. Maisījumu atstāj nostāvēties 5 minūtes un pēc tam karsē līdz vārīšanās temperatūrai, bieži maisot, līdz tā pilnībā izšķīst.

Sadaliet maisījumu mēģenēs ar kokvilnas vāciņiem un 15 minūtes autoklāvējiet 121 ° C temperatūrā. Noņemiet mēģenes statīvu no autoklāva un ļauj tam sacietēt vertikālā stāvoklī tā, lai barotne būtu bloka formā.

Lai to saglabātu, līdz lietošanai to uzglabā ledusskapī. Sagatavotās barotnes galīgajam pH jābūt 7,3 ± 0,2.

Barotnes inokulēšanas laikā tam jābūt istabas temperatūrā. Vidējā krāsa ir bēša.

Kovaca reaģents

Izmēra 150 ml amil-, izoamil- vai butilspirta. (Izmantojiet vienu no trim minētajiem).

Izšķīdina 10 g p-dimetilaminobenzaldehīda. Tad lēnām pievieno 50 ml koncentrētas sālsskābes.

Lietošanai gatavs reaģents ir bezkrāsains vai gaiši dzeltens. Tas jātur dzintara pudelē un jāuzglabā ledusskapī. Nelietot, ja tas kļūst tumši brūns; kas norāda, ka tas ir bojāts. Šis reaģents ir vēlams, kad runa ir par Enterobacteriaceae.

Erliha reaģents

Nosver 2 g p-dimetilaminobenzaldehīda un izšķīdina 190 ml absolūtā etilspirta un lēnām sajauc ar 40 ml koncentrētas sālsskābes. Tādā pašā veidā uzglabājiet Kovac reaģentu. Ehrila reaģents visvairāk tiek izmantots nefermentējošām un anaerobām baktērijām.

Lietojumprogrammas

SIM barotne tiek plaši izmantota bakterioloģijas laboratorijās. Tās priekšrocība ir tā, ka, identificējot Enterobacteriaceae, vienā mēģenē var novērot trīs būtiskus raksturlielumus.

Sēj

Pareizais veids, kā sēt šo barotni, ir, izmantojot adatu, ar kuru ņem pētāmās tīras kolonijas daļu un vertikāli ievieto barotnes centrā. Būtu jāveic viena iekāre. Punkcijai nevajadzētu sasniegt mēģenes dibenu, ir pareizi aptvert tikai divas trešdaļas no dziļuma.

Sējmateriāla atkārtošana nav ieteicama, jo tas var izraisīt kļūdainu pozitīvās motilitātes interpretāciju. Inokulēto barotni 24 stundas inkubē aerobos apstākļos 37 ° C temperatūrā.

Kad laiks ir secinājusi, ka ir novērots, vai tur bija ražošana H ₂ S un kustīgums ir lasīt. Visbeidzot atklāj indolu, pievienojot 3 līdz 4 pilienus Ehrila vai Kovaca reaģenta, viegli samaisa un interpretē.

Avots: Koneman E, Allens S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.

QA

Kā sterilitātes kontroli vienu vai divas mēģenes 24 stundas inkubē bez inokulācijas krāsnī 37 ° C temperatūrā. Paredzams, ka pēc šī laika nav ne augšanas, ne krāsas maiņas.

Kā kvalitātes kontroli var izmantot zināmus sertificētus celmus, piemēram: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Gaidāmie rezultāti ir: Escherichia coli H ₂ S negatīva, indola un pozitīva kustīgums, Enterobacter aerogenes tikai pozitīva kustīgums, Salmonella typhimurium H ₂ S un pozitīva kustība, ar negatīvu indolu. Proteus vulgaris visi ir pozitīvi, savukārt Klebsiella pneumoniae un Shigella visi ir negatīvi.

Ierobežojumi

-Daži Morganella morganii celmi, starp citiem celmiem, šajā barotnē var radīt brūnganu pigmentu, jo rodas melanīns, to nevajadzētu sajaukt ar melnā sulfīda nogulsnēm. Nepieredzējušiem speciālistiem šī situācija var radīt kļūdainus pozitīvus rezultātus H ₂ S testa interpretācijā .

- Stingras aerobās baktērijas augs tikai uz mēģenes virsmas, apgrūtinot kustīgumu.

Atsauces

1. BD laboratorijas. BBL SIM Medium. 2008. Pieejams: bd.com
2. Neogēnu laboratorijas. SIM vidēja. Pieejams vietnē: pārtikas nekaitīgums
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM vidēja. 2009.Pieejams vietnē: http://f-soria.es
4. Brizuela-Lab laboratorija. Vidēja SIM. Pieejams vietnē: .brizuela-lab.com
5. Britannia laboratorijas. Vidēja SIM. 2015.Pieejams vietnē: studyres.es/doc
6. Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.