MEDIO MIO: PAMATS, SAGATAVOŠANA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

MIO medijs ir bioķīmisks testu izmanto, lai palīdzētu identificēt baktēriju pieder Enterobacteriaceae dzimtas sugas. Tas ir diezgan barojošs un sastāv no glikozes, rauga ekstrakta, peptona, tripteina, L-ornitīna hidrohlorīda, bromkrezola purpura un agara.

Tā saīsinājuma (MIO) nozīme apraksta katru parametru, ko var novērot šajā vidē; kustīgums, indols un ornitīns. Motilitāte ir mikroorganisma spēja pārvietoties flagellas klātbūtnes dēļ. Lai šo īpašību varētu ievērot, barotnes konsistencei jābūt pusšķidrai, tāpēc preparātā ir mazāk agara.

Rezultātu interpretācijas izklāsts MIO datu nesējā. Avots: sagatavojusi autore MSc. Marielsa gil

Indola ražošana parāda fermenta triptofanāzes klātbūtni, kas iedarbojas uz aminoskābi triptofānu, tāpēc, lai indola ražošana būtu pamanāma, jāizmanto atklājošs reaģents.

Visbeidzot, ornitīns nosaka, vai baktērija spēj dekarboksilēt aminoskābi, tas ir, vai tai ir enzīms orinitīna dekarboksilāze.

Pamats

Peptons, rauga ekstrakts un tripteins

Šie elementi veicina šīs barotnes uzturvērtību. Tie kalpo kā barības vielu un neaizvietojamo aminoskābju avots baktēriju attīstībai.

Turklāt tripteins ir triptofāna avots, lai parādītu enzīma triptofanāzes klātbūtni, kas noārda triptofānu, veicot reduktīvu deaminēšanu, atbrīvojot indolu, pirūtskābi, amonjaku un enerģiju.

Indols ir bezkrāsains, tāpēc tā klātbūtni atklāj, pievienojot piecus pilienus Ehrila vai Kovača reaģenta, abi ar p-dimetilaminobenzaldehīdu.

Šī savienojuma aldehīdu grupa reaģē ar indolu, uz agara virsmas iegūstot gredzenveida fuksijas sarkano produktu.

Jebkuras krāsas pēdas jāuzskata par pozitīvu testu. Pierādījums ir jālasa nekavējoties, jo laika gaitā krāsa pasliktinās.

Turklāt šis tests būtu jāatklāj pēc tam, kad ir atzīmēti ornitīna kustīgumu un dekarboksilēšanas rezultāti.

Interpretācija

Pozitīvs tests: fuksijas sarkanā gredzena veidošanās, pievienojot Kovacs reaģenta pilienus.

Negatīvs tests: gredzena neveidojas.

Motilitāte

Baktēriju spēja pārvietoties būs acīmredzama, ja tiek novērota duļķaina barotne vai ap sākotnējo inokulāciju ir bieza augšanas līnija, kas izplešas.

Par negatīvu kustīguma pārbaudi liecinās novērojot plānu augšanas līniju, un viss ap to notiks bez izaugsmes.

Ir svarīgi pirms indola atklāšanas nolasīt kustīgumu, jo reaģenta pievienošana aizkavē visu barotni.

Mobilās, bet lēnām augošās baktērijās ir grūti pierādīt to kustīgumu ar šo barotni. Šajā gadījumā ieteicams izmantot citus testus vai metodes, piemēram, vidējas kustības spējas vai pilēšanas metodi.

Glikoze

Glikoze ir fermentējams ogļhidrāts, kas papildus enerģijas nodrošināšanai arī paskābina vidi, kas ir nepieciešams nosacījums aminoskābes ornitīna dekarboksilēšanai.

Glikozes fermentācijai vienmēr jānotiek, sākot ar principu, ka visas baktērijas, kas pieder Enterobacteriaceae ģimenei, raudzē glikozi.

L-ornitīns

Gadījumā, ja baktērijas ražo fermentu ornitīna dekarboksilāzi, tas var darboties, kad barotne ir paskābināta, fermentējot glikozi.

Ferments ornitīna dekarboksilāze iedarbojas uz aminoskābes karboksilgrupu, veidojot amīnu ar nosaukumu putresīns, kas atkal sārmina barotni.

Šis tests jālasa pēc 24 inkubācijas stundām, jo, ja jūs mēģināt lasīt pirms jūs varat kļūdaini interpretēt testu ar viltus negatīvu.

Jāatceras, ka pirmā reakcija, kas notiek, ir glikozes fermentācija, tāpēc barotne sākotnējā fāzē (pirmās 10 līdz 12 stundas) kļūst dzeltena. Ja pēc tam notiek ornitīna dekarboksilēšana, barotne kļūs violeta.

Pirms indola atklāšanas ir svarīgi interpretēt ornitīna dekarboksilēšanas testu, jo Kovacs reaģenta pievienošana maina barotnes krāsu.

Interpretācija

Negatīvs tests: vidēji dzeltens vai ar dzeltenu fonu.

Pozitīvs tests: vidēji pilnīgi purpursarkans.

PH indikators

Šajā gadījumā tiek izmantots bromkrezola violets; tas ir atbildīgs par atklāšanu, ja barotnē mainās pH. Pēc paskābināšanas indikators kļūst dzeltens, un, alkalizējoties, tas kļūst purpursarkans.

Sēšanas un attīstības tehnika

Lai sētu MIO barotni, tiek izmantota taisna cilpa vai adata, un kopā ar to tiek savākta pētāmās kolonijas daļa.

MIO vidū taisnā līnijā tiek veikta dziļa punkcija. Nav ieteicams veikt dubultu punkciju, jo tas var radīt nepareizu kustīgumu, ja punkcijas netiek veiktas tajā pašā vietā.

Inkubē 24 līdz 48 stundas 37 ° C temperatūrā aerobiozē. Apskatiet rezultātus šādā secībā: ornitīna kustīgumu, dekarboksilēšanu un beidzot atklājiet indolu.

Ieteicams aseptiski noņemt 2 ml barotnes, pārvietot to uz sterilu mēģeni un tur veikt indola testu, lai, ja tas ir negatīvs, pārējo oriģinālo mēģeni varētu inkubēt vēl 24 stundas, lai atkal atklātu indolu.

Indola izstrādi veic šādi: MIO barotnei pievieno 3 līdz 5 pilienus Kovacs reaģenta un enerģiski maisa. Tiek novērots, vai parādās sarkanās fuksijas gredzens.

Sagatavošana

MIO vide

Nosver 31 g MIO barotnes un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens.

Karsē, līdz maisījums vārās vienu minūti, bieži kratot, līdz agars ir pilnībā izšķīdis. Sadaliet 4 ml barotnes 13/100 mēģenēs ar kokvilnas vāciņiem.

Sterilizējiet autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes. Izņem no autoklāva un ļauj stāvēt taisni statīvā tādā veidā, lai veidotos pusciets bloks.

Uzglabāt ledusskapī 2-8 ° C temperatūrā. Pirms baktēriju celma sēšanas ļaujiet tam sasilt.

Dehidrētās barotnes krāsa ir bēša, un sagatavotās barotnes krāsa ir nedaudz opalescējoša purpursarkanā krāsā.

Sagatavotās barotnes galīgais pH ir 6,5 ± 0,2

Barotne skābā pH kļūst dzeltena un sārmainā pH ir purpursarkana.

Kovacs reaģents (indola testa izstrādātājs)

Šo reaģentu sagatavo šādi:

Izmēra 150 ml amil-, izoamil- vai butilspirta (jebkuru no trim). Tajā izšķīdina 10 g p-dimetilaminobenzaldehīda. Pēc tam lēnām pievieno 50 ml koncentrētas sālsskābes.

Sagatavotais reaģents ir bezkrāsains vai gaiši dzeltens. Tas jātur dzintara pudelē un jāuzglabā ledusskapī. Tumši brūna krāsa parāda tā pasliktināšanos.

Arī Kovacs reaģentu var aizstāt ar Ehrila reaģentu. Pēdējam, kas ir jutīgāks, ir vēlams atklāt indolu baktērijās, kas to ražo nelielos daudzumos, piemēram, dažos nefermentējošos gramnegatīvos stieņos un noteiktos anaerobos.

Izmantojiet

Šī barotne ir tests, kas papildina bioķīmisko testu kopumu, lai identificētu baktērijas, kas pieder Enterobacteriaceae saimei.

Ornitīna dekarboksilācijas dati kalpo, lai atšķirtu Shigella sonnei, kuras testa rezultāti ir pozitīvi, no Shigella boydii, Shigella flexneri un S. dysenterieae, kurām ir negatīvs.

Tas atšķir arī Klebsiella ģints, kuras testa rezultāti ir negatīvi, no Enterobacter ģints, kur lielākajai daļai tās sugu ir pozitīvs rezultāts.

Avots: Koneman E, Allens S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.

QA

Katru reizi, kad tiek sagatavota MIO barotnes partija, var veikt kontroles testu. Šim nolūkam barības uzvedības novērošanai izmanto zināmus vai sertificētus celmus.

Celmi, ko var izmantot, ir Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes un Proteus mirabilis.

Paredzamie rezultāti ir E. coli un M. morganii. Dan M: +, I: + un O: +.

Klebsiella pneumoniae viss ir negatīvs (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis un Enterobacter aerogenes dod M: + I: - un O: +.

Atsauces

1. Mac Faddin J. (2003). Bioķīmiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. ed. Redakcija Panamericana. Buenosairesa. Argentīna.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
3. Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
4. Britannia laboratorijas. MIO Medio 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
5. BD laboratorijas. BBL Motilitātes indola ornitīna (MIO) vide. 2007. Pieejams: bd.com
6. Valtek laboratorijas. Vidēja MIO kustīgums, indols, ornitīns. 2010.Pieejams vietnē: andinamedica.com