MEDIO: PAMATOTĪBA, SAGATAVOŠANA, LIETOJUMI UN IEROBEŽOJUMI - BIOLOĢIJA - 2025

OF vai glikozes fermentācijas vide ir puscieta agars, kas speciāli paredzētas pētījumu par oksidatīvu un fermentatīvā metabolisma ogļhidrātu svarīgs grupa, kas nav Enterobacteriaceae mikroorganismiem, ko sauc par non-zarnu Gram negatīvs bacilli.

To izveidoja Hjū un Leifsons; šie pētnieki saprata, ka parastie skābes ražošanas no ogļhidrātiem pētīšanas līdzekļi nav piemēroti šai specifiskajai baktēriju grupai.

A. Vidēja komerciālais pamats. B. Caurules ar OF vidēju sēklu. Avots: A un B Autores fotogrāfijas MSc. Marielsa Gil.

Tas notiek tāpēc, ka neelektriski gramnegatīvie stieņi atšķirībā no Enterobacteriaceae parasti rada nelielu daudzumu skābju.

Šajā nozīmē OF barotnei ir īpašas īpašības, kas var noteikt nelielu skābes daudzumu veidošanos gan oksidatīvā, gan fermentācijas ceļā. Šīs atšķirības ir saistītas ar peptonu, ogļhidrātu un agara daudzumu.

Šī barotne satur mazāk peptonu un augstāku ogļhidrātu koncentrāciju, tādējādi samazinot produktus, kas olbaltumvielu metabolisma rezultātā sārmina barotni, un ogļhidrātu lietošanas dēļ palielina skābju ražošanu.

No otras puses, agara daudzuma samazināšanās veicina arī skābes izplatīšanos visā barotnē, turklāt ļaujot novērot kustīgumu.

OF barotne sastāv no peptona, nātrija hlorīda, bromtimola zilā, dikālija fosfāta, agara un ogļhidrātu. Visizplatītākais ogļhidrāts ir glikoze, bet citus var izmantot, piemēram, laktozi, maltozi, ksilozi.

Pamats

Tāpat kā jebkurā barotnē, arī OF barotnē jābūt barojošām vielām, kas garantē baktēriju augšanu; šīs vielas ir peptoni.

Savukārt ogļhidrāti nodrošina enerģiju un tajā pašā laikā kalpo mikroorganismu izturēšanās pret to izpētei, tas ir, tas ļauj baktērijas klasificēt kā oksidējošu, fermentējošu vai nesacharolītisku organismu.

OF barotne satur peptona / ogļhidrātu attiecību 1: 5 pretstatā parastajai barotnei 2: 1. Tas nodrošina, ka sārmaino amīnu daudzums, kas veidojas peptonu sadalīšanās laikā, neitralizē vāju skābju veidošanos.

No otras puses, barotne satur nātrija hlorīdu un dikālija fosfātu. Šie savienojumi osmotiski stabilizē barotni un attiecīgi regulē pH. Bromtimola zilā krāsa ir pH indikators, kas, iegūstot skābi, barotnes krāsu pārvērš no zaļas līdz dzeltenai.

Daži mikroorganismi var izmantot ogļhidrātus pa oksidācijas vai fermentācijas ceļiem, savukārt citi neizmanto nevienu no šiem veidiem.

Tas ir atkarīgs no katra mikroorganisma īpašībām. Piemēram, daži stingri aerobie mikroorganismi var oksidēt noteiktus ogļhidrātus, un fakultatīvie anaerobi var oksidēties un raudzēties atkarībā no apkārtējās vides, savukārt citi neoksidē un neraudzē ogļhidrātus (asakarolītiskos).

Visbeidzot, CDC ieteiktā barotnes modifikācija satur īpašu OF bāzi ar indola sarkano fenolu.

Oksidācijas process

Glikozes oksidācijas procesam nav nepieciešama glikozes fosforilēšana, tāpat kā fermentācijas procesam. Šajā gadījumā aldehīdu grupa tiek oksidēta par karboksilgrupu, iegūstot glikonskābi. Tas savukārt tiek oksidēts līdz 2-ketoglukoniem.

Pēdējais vai nu uzkrājas, vai sadalās līdz divām piruānskābes molekulām. Šī sistēma pieprasa skābekļa vai kāda neorganiska savienojuma klātbūtni kā galīgo elektronu akceptoru.

Skābju veidošanās šajā ceļā ir vājāka nekā fermentācijas ceļā iegūtā.

Fermentācijas process

Lai glikozes fermentācija notiktu kādā no pieejamajiem ceļiem, tā vispirms fosforilē, kļūstot par glikozes-6-fosfātu.

Glikozes fermentācijai var būt vairāki ceļi, no kuriem galvenais ir Embden-Meyerhof-Parnas ceļš, bet tie var arī veikt Entner-Doudoroff ceļu vai Warburg-Dickens heksozes monofosfāta ceļu, kas pazīstams arī kā pentožu noārdīšanās.

Izvēlētais ceļš būs atkarīgs no mikroorganisma fermentatīvās sistēmas.

Via Embden-Meyerhof- Parnas

Fermentējot glikozi pa Embden-Meyerhof-Parnas ceļu, to sadala divās triozes molekulās, lai vēlāk sadalītos dažādos oglekļa savienojumos, līdz veidojas glicerraldehīda-3-fosfāts. No turienes rodas starpposma viela, kas ir pirovilskābe.

No tā izveidosies dažādu veidu jauktas skābes, kas var atšķirties no vienas sugas uz otru.

Šī sistēma rodas, ja nav skābekļa, un kā galīgo elektronu akceptoru nepieciešams organisks savienojums.

Entner-Doudoroff ceļš

Fermentējot glikozi pa Entnera-Doudorofa ceļu, glikozes 6-fosfāts kļūst par glikono-ᵼ-laktona-6-fosfātu, un no turienes tas tiek oksidēts par 6-fosfoglukonātu un 2-keto-3-deoksi-6- fosforglikonātu, lai beidzot veidotos piruvavīnskābe. Šim ceļam ir nepieciešams skābeklis, lai notiktu glikolīze.

Pentozes sadalīšanās ceļš vai Vorburgas-Dikensa heksoksa monofosfāta ceļš

Šis maršruts ir divu iepriekšminēto hibrīds. Tas sākas līdzīgi kā Entnera-Doudorofa ceļš, bet vēlāk glicerraldehīds-3-fosfāts tiek veidots kā pirūdskābes priekštecis, kā tas notiek Embden-Meyerhof-Parnas ceļā.

Sagatavošana

Svērt:

2 g peptona

5 g nātrija hlorīda

10 g D-glikozes (vai ogļhidrātu, kas jāsagatavo)

0,03 g bromtimola zilā

3 gr agara

0,30 g dikālija fosfāta

1 litrs destilēta ūdens.

Sajauc visus savienojumus, izņemot ogļhidrātus, un izšķīdina 1 litrā destilēta ūdens. Uzkarsē un krata, līdz tā pilnībā izšķīst.

Atdzesējot līdz 50 ° C, pievieno 100 ml 10% glikozes (filtrē).

Aseptiski sadalīt 5 ml barotnes mēģenēs ar kokvilnas augšpusi un 15 minūtes autoklāvot 121 ° C spiedienā 15 mārciņu spiedienā.

Ļauj sacietēt vertikālā stāvoklī.

Barotnes pH jābūt 7,1. Sagatavotās barības krāsa ir zaļa.

Uzglabāt ledusskapī.

Lietojumprogrammas

OF barotne ir īpaša barotne mikroorganisma metaboliskās izturēšanās noteikšanai pret ogļhidrātiem. Īpaši tiem, kas veido maz, vāji vai nesatur skābes.

Sēj

Katram mikroorganismam ir vajadzīgas 2 OF mēģenes, abām jābūt inokulētām ar pētāmo mikroorganismu. Koloniju ņem ar taisnu rokturi un mēģenes centrā tiek veikta punkcija, nesasniedzot dibenu; Var veikt vairākas punkcijas, ja vien nav intereses novērot kustīgumu.

Vienai mēģenei pievieno sterila šķidra petrolatuma vai sterila kausēta parafīna slāni (apmēram 1 līdz 2 ml) un apzīmē ar burtu "F". Otra caurule ir atstāta oriģināla un marķēta ar "O". Abas mēģenes inkubē 35 ° C temperatūrā un novēro katru dienu līdz 3 līdz 4 dienām.

Interpretācija

Metabolisms un gāzes ražošana

Tabula: Mikroorganismu klasifikācija pēc to izturēšanās caurulēs atvērtās (oksidējošās) un aizvērtās (fermentācijas)

Avots: Autores veidots maģistrs. Marielsa gil

Gāzi novēro ar burbuļu veidošanos vai agara pārvietošanu.

Jāatzīmē, ka organisms, kas tikai oksidē glikozi, bet neraudzē to, nespēs raudzēt citus ogļhidrātus, katrā ziņā tas tikai oksidēsies. Tāpēc šajā gadījumā aizzīmogotā caurule citu ogļhidrātu izpētei netiks izlaista.

Motilitāte

Papildus kustīgumu var redzēt OF vidē.

Pozitīva kustīgums : augšana, kas neaprobežojas tikai ar inokulācijas laukumu. Caurulei ir vērojama izaugsme.

Negatīvā kustīgums : augšana tikai sākotnējā inokulātā.

QA

Par kvalitātes kontroli var izmantot šādus celmus: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa un Moraxella sp. Gaidāmie rezultāti ir:

1. coli: Glikozes fermentētājs (gan dzeltenās, gan dzirkstošās caurules).
2. aeruginosa: glikozes oksidētājs (atvērta dzeltena caurule un zaļš vai zils blīvējums).
3. Moraxella sp: nav saharolītiska (zaļa vai zila atvērta caurule, zaļi noslēgta caurule).

Ierobežojumi

-Daži mikroorganismi nevar augt OF barotnē. Šajos gadījumos testu atkārto, bet barotnei pievieno 2% seruma vai 0,1% rauga ekstrakta.

-Oksidācijas reakcijas bieži novēro tikai tuvu virsmai, un pārējā barotne var palikt zaļa, tāpat kā pozitīva.

Atsauces

1. Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
3. Mac Faddin J. (2003). Bioķīmiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. ed. Redakcija Panamericana. Buenosairesa. Argentīna.
4. Fransisko Soria Melguizo laboratorijas. 2009. OF Glikozes vide. Pieejams: http://f-soria.es
5. Conda Pronadisa laboratorijas. NO Glikozes barotnes. Pieejams vietnē: condalab.com
6. BD laboratorijas. 2007. OF OF Basal Medium. Pieejams vietnē: bd.com