TIOGLIKOLĀTA BULJONS: PAMATOJUMS, SAGATAVOŠANA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Thioglycollate buljons ir vidēja bagātināts šķidrums konsistence. Ar saīsinājumu FTM tas ir pazīstams ar savu saīsinājumu angļu valodā Fluid Thioglycollate Medium. To izveidoja Brūveris un 1944. gadā modificēja Vera, kurš tam pievienoja kazeīna peptonu.

Šai barotnei ir zems oksidācijas-reducēšanās potenciāls, tāpēc to neiesaka attīstīt stingrās aerobos baktērijās, bet tā ir ideāli piemērota fakultatīvo aerobo, stingro anaerobo un nevajadzīgo mikroaerofilo baktēriju atjaunošanai.

Tioglikolāta buljons bez indikatora. Parāda izdalījumus no maksts. Avots: Bobjgalindo

Augstā veiktspēja, ko novēroja ar šo barotni dažādu mikroorganismu izolācijā un reģenerācijā, ļāva to akceptēt Amerikas Savienoto Valstu farmakopejā (USP), oficiālajā lauksaimniecības ķīmiķu asociācijā (AOAC) un Eiropas Farmakopejā ( EP).

Šīs organizācijas to iesaka farmaceitisko produktu sterilitātes kontroles testēšanai un dažāda veida paraugu bagātināšanai.

Cado tioglikolāts nelielā daudzumā sastāv no rauga ekstrakta, kazeīna aizkuņģa dziedzera sagremota, bezūdens dekstrozes, L-cistīna, nātrija hlorīda, nātrija tioglikolāta, resazurīna un agara.

Šai barotnei ir vairākas versijas, starp tām ir: tioglikolāta buljons ar indikatoru, tioglikolāta buljons bez indikatora, tioglikolāta buljons ar indikatoru, kas bagātināts ar hemīnu un K ₁ vitamīnu _, un tioglikolāta buljons ar kalcija karbonātu.

Proti, tioglikolāta buljona variants, kas bagātināts ar hemīnu un K vitamīnu, kalpo, lai veicinātu gardo anaerobu augšanu, un tioglikolāta buljona variants, kas satur kalcija karbonātu, ir noderīgs, lai neitralizētu skābes, kas rodas mikrobu augšanas laikā.

Pamats

Tioglikolāta buljonu uzskata par neselektīvu bagātināšanas barotni, jo tas ļauj augt lielākajai daļai negaršīgo baktēriju. Uztura prasības nodrošina rauga ekstrakts, aizkuņģa dziedzera sagremojums un glikoze.

No otras puses, neskatoties uz to, ka tas ir buljons, tas satur nelielu daudzumu agara; Tas nozīmē, ka tam ir zems oksidācijas-reducēšanās potenciāls sakarā ar to, ka tas palēnina skābekļa iekļūšanu tādā veidā, ka skābeklis samazinās, jo tas nonāk dziļāk mēģenē.

Tāpēc šī barotne ir ideāli piemērota fakultatīvu aerobās, mikroaerofīlās un stingrās anaerobās baktēriju attīstībai, pēdējās 2 nav nepieciešams inkubēt šajos apstākļos. Tā pati barotne regulē skābekļa daudzumu barotnē, tā nav caurules apakšā un pietiekamā daudzumā uz virsmas.

Tioglikolāts un L-cistīns darbojas arī kā reducētāji, palīdzot novērst baktēriju attīstībai kaitīgu vielu, piemēram, peroksīda, uzkrāšanos. Turklāt šie savienojumi satur sulfhidrilgrupas (-SH-), citu smago metālu starpā neitralizējot dzīvsudraba atvasinājumu, arsēnu, inhibējošo iedarbību.

Savukārt resazurīns ir oksīda reducēšanās rādītājs. Šī viela ir bezkrāsaina, kad tā ir reducēta, un rozā, kad oksidējas. Ir indikatoru un indikatoru nesaturošie tioglikolāta buljona varianti. Tās izmantošana būs atkarīga no parauga veida un laboratorijas izvēles.

Tikmēr nātrija hlorīds uztur tioglikolāta buljona osmotisko līdzsvaru, un glikozes izmantošana bezūdens formā novērš lieko mitrumu dehidrētajā vidē.

Sagatavošana

Tioglikolāta buljons ar indikatoru

Nosver 29,75 g dehidrētas barotnes un izšķīdina 1 litrā destilēta ūdens. Maisījumam ļauj nostāvēties apmēram 5 minūtes. Uzkarsē uz siltuma avota un bieži maisa, līdz tā ir pilnībā izšķīdusi.

Barotni ielej mēģenēs un 15 minūtes autoklāvā 121 ° C temperatūrā. Pirms lietošanas ļaujiet atdzist. Pārbaudiet tirdzniecības nama ieliktni tā saglabāšanai. Daži iesaka uzglabāt istabas temperatūrā tumšā vietā, bet citi ledusskapī, kas pasargāts no gaismas.

Sagatavotās barotnes pH ir 7,1 ± 0,2.

Dehidrētās barotnes krāsa ir gaiši bēša, un sagatavotā barotne ir gaiši dzintara ar nelielu opalescenci.

Tioglikolāta buljons ar indikatoru, kas bagātināts ar hemīnu un K vitamīnu

Ir komerciāli mediji, kas jau satur hemīnu un K ₁ vitamīnu , īpaši anaerobu audzēšanai.

Ja jums nav bagātinātas barotnes anaerobiem, varat pagatavot pamata tioglikolāta buljonu. Tam katram barotnes litram _pievieno 10 mg hemīna hidrohlorīda un 1 mg K ₁ vitamīna . Tomēr, ja tioglikolāta buljonam pievieno asinis vai serumu, hemīna vai K vitamīna pievienošana nav nepieciešama.

Tioglikolāta buljons ar kalcija karbonātu

Tas tiek piegādāts tirdzniecībā un ir sagatavots, ievērojot instrukcijas uz ieliktņa.

Tioglikolāta buljons bez indikatora

Tam ir tāds pats pamata tioglikolāta sastāvs, bet tas nesatur resazurīnu.

Nosver 30 g dehidrētas barotnes un izšķīdina litrā destilēta ūdens. Pārējais preparāta sastāvs ir tāds pats kā aprakstīts tioglikolāta buljonā ar indikatoru.

Izmantojiet

Tioglikolāta buljons ir noderīgs klīnisko paraugu bagātināšanai, jo īpaši no sterilām vietām. Tas ir noderīgi arī neklīniskiem paraugiem, piemēram, kosmētikai, narkotikām utt.

Šķidru paraugu (piemēram, CSF, cita starpā sinoviālā šķidruma) inokulēšanai paraugus vispirms centrifugē, pēc tam ņem 2 pilienus nogulšņu un ievieto tioglikolāta buljonā. Inkubē 24 stundas 35 ° C temperatūrā. Ja šajā laikā nav augšanas (duļķainības), to inkubē ne ilgāk kā 7 dienas.

Ja paraugu ņem ar tamponu, barotni vispirms inokulē plāksnēs un visbeidzot tamponu ievada buljonā, izvirzīto daļu sadala un mēģeni noslēdz, vāciņu atstājot iekšpusē. Inkubē 35 ° C temperatūrā 24 stundas, maksimāli 7 dienas.

Cietiem paraugiem homogenizē fizioloģiskajā šķīdumā (SSF) un pēc tam inokulē tioglikolāta buljonu ar 2 pilieniem suspensijas.

Dažreiz to var izmantot kā transportēšanas līdzekli paraugiem, kur ir aizdomas par stingriem anaerobiem, vai kā rezerves bagātināšanas buljonu.

Tioglikolāta buljona variants ar kalcija karbonātu tiek izmantots kontroles celmu uzturēšanai ilgāku laiku, jo tas spēj neitralizēt skābes, kas rodas, izmantojot glikozi; Šīs skābes ir toksiskas noteiktām baktērijām.

Tioglikolāta buljona augšanu novēro barotnes duļķainība. Atkarībā no parauga veida un iespējamiem mikroorganismiem ieteicams veikt Gram traipu un pēc tam subkultūru neselektīvos un selektīvos barotnēs.

QA

Sterilitātes kontrolei ieteicams inkubēt vienu vai divus buljonus bez inokulācijas. Gaidāmais rezultāts ir dzidrs buljons, nemainoties krāsai, lai gan ir normāli, ja mēģenes virsmā ir redzama viegla rozā krāsa.

Kvalitātes kontrolei vajadzētu inokulēt no 10 līdz 100 CFU sertificētu kontroles celmu, piemēram, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkubē aerobiozē 30-35 ° C temperatūrā 24 stundas, bet ne ilgāk kā 3 dienas, jo šie mikroorganismi ātri aug.

Laba attīstība gaidāma visos gadījumos, izņemot Micrococcus luteus un Bacillus subtilis, kur var būt mērena attīstība.

Tioglikolāta buljona, kas bagātināts ar hemīnu un K ₁ vitamīnu, kvalitātes kontrolei var izmantot kontroles celmus Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 un Bacteroides fragilis ATCC 25285. Gaidāmais rezultāts ir apmierinoša izaugsme.

ieteikumi

-Ražos var novērot, ka tioglikolāta buljona virsma ar indikatoru kļūst rozā; Tas ir saistīts ar barotnes oksidēšanu. Ja rozā krāsa pārklāj vismaz 30% no kopējā buljona, to var 5 minūtes sildīt ūdens vannā, vēlreiz atdzesēt un lietot.

Tas noņems absorbēto skābekli, atjaunojot barotni sākotnējā krāsā. Šo procedūru var veikt tikai vienu reizi.

-Lai uzlabotu aerobo baktēriju augšanu, inkubējiet ar nedaudz vaļīgu vāku. Tomēr stingru aerobu pareizai izstrādei šajā nolūkā ir ieteicams izmantot smadzeņu sirds infūzijas buljonu vai sojas buljonu trypticase.

- Jāizvairās no barotnes sasalšanas vai pārkaršanas, jo abi apstākļi sabojā barotni.

-Tieša gaisma sabojā barotni, tā jāuzglabā aizsargāta no gaismas.

Atsauces

1. Britannia laboratorijas. Tioglikolāts USP ar indikatoru. 2015.Pieejams vietnē labBritania.com.
2. Chios Sas laboratorijas. 2019. Tioglikolāta buljons. Pieejams vietnē: quios.com.co
3. Laboratorijas BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003.Pieejams vietnē: bd.com/Europe
4. Baros sagatavotas BBL barotnes anaerobo mikroorganismu audzēšanai. Tioglikolāta vide. 2013.Pieejams vietnē: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.