KSANTOPROTEĪNA REAKCIJA: PAMATOJUMS, PROCEDŪRA, LIETOŠANA - ĶĪMIJA - 2025

Xanthoprotein reakcija ir ķīmiska procedūra, ko izmanto, lai noteiktu esamību vai neesamību aromātiskām aminoskābēm, piemēram, tirozīna un triptofāna, kas var būt brīvā formā vai veido šķīstošos proteīnus, peptīdus vai polipeptīdu.

To izmanto arī, lai noteiktu toksiskas vielas asinīs, kuru struktūrā ir benzola grupa. Šis tests ir pazīstams arī kā ksantoproteīna Bečera reakcija.

Pozitīva ksantoproteīna reakcija Avots: ņemts no video: https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo

Ksantoproteīna reakcijā izmanto koncentrētu slāpekļskābi, siltumu un neitralizējošu sārmu. Ja pēc reakcijas neitralizēšanas šķīdums kļūst no dzeltenas līdz oranžai, testu uzskata par pozitīvu. Novērotā krāsa ir saistīta ar slāpekļa savienojumu veidošanos, kas iegūti no benzola grupu nitrifikācijas.

Ja kopējā proteīna daudzums ir jānosaka kvantitatīvi, jāizmanto citas olbaltumvielu noteikšanas metodes, piemēram, Biurets.

Ksantoproteīna reakciju galvenokārt izmanto, kad tiek analizētas vielas, kuru ķīmiskais sastāvs nav zināms. Šī reakcija parasti ir daļa no testu kopuma, kas palīdzēs noteikt noteiktas vielas vai ekstrakta ķīmisko sastāvu. Tāpēc pētnieki to plaši izmanto.

No otras puses, Bekera ksantoproteīna reakcija tiek izmantota, lai noteiktu fenola un indola vielas asinīs, ļaujot prognozēt nefropātijas parādīšanos, pirms tiek palielināti citi vēlākie parametri.

Pamats

Reakcija pamatā nosaka benzola grupas klātbūtni gan aminoskābēs, gan olbaltumvielās un peptīdos. Slāpekļskābe iedarbojas uz aminoskābju benzola gredzenu, kam tas pieder, veidojot fenola nitro savienojumus.

Reakcijai ir nepieciešams karstums, parasti veidojas nogulsnes, kas aizēno barotni, padarot to pienainu. Nokrišņi var būt balti vai dzelteni. Visbeidzot, tas prasa alkalizācijas soli, kas akcentē krāsu. Šim nolūkam izmanto tādu bāzi kā 40% nātrija hidroksīds vai amonjaks.

Reakcija tiks interpretēta kā pozitīva, ja karsēšanas procesā tiek novērota spēcīga dzeltena krāsa vai tumši oranža, kad reakcija sārmainās. Aminoskābes, kuras tas atrod, galvenokārt ir tirozīns un triptofāns.

Ksantoproteīna reakcija. Avots: http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html

Fenilalanīna gadījumā, lai arī tā ir aromātiska aminoskābe, šīs aminoskābes benzola kodolu ir grūti nitrēt vienkāršā reakcijā, tāpēc tas izstaros vai nu negatīvu, vai vāju pozitīvu reakciju.

Kopumā ksantoproteīna testu var papildināt ar Hopkins-Cole testu, ko izmanto, lai īpaši identificētu triptofānu. Ja ksantoproteīna tests ir pozitīvs un Hopkinsa-Kola tests ir negatīvs, triptofāna klātbūtne šajā šķīdumā ir izslēgta, norādot uz galvenokārt tirozīna klātbūtni. Tāpat to var papildināt arī ar Millona reakciju, lai cita starpā noteiktu tirozīnu.

Šo reakciju var izmantot arī asins, plazmas vai desaluminizēta seruma paraugiem urēmijas vai nieru mazspējas diagnosticēšanai. Šajā gadījumā tiek prasīts noteikt toksiskas vielas (fenola un indola), kas rodas zarnu pūšanas rezultātā.

Šīm vielām ir benzola grupa, tāpēc tās rada pozitīvu ksantoproteīna reakciju, kaut arī reaģējošā viela nav ne aminoskābe, ne olbaltumviela.

Process

- Ksantoproteīna reakcija aminoskābju noteikšanai ar aromātiskām grupām

Tīrā, sausā mēģenē ievieto 1 ml testa parauga.

-Pievieno 0,5 ml koncentrētas slāpekļskābes.

-Inkubējiet maisījumu ūdens vannā 70 ° C temperatūrā 2 minūtes. Iepriekš sagatavojiet ūdens vannu minētajā temperatūrā.

-Izņemot mēģeni no ūdens vannas, var novērot, ka šķīdums ir kļuvis pienains un ieguvis noteiktu dzeltenīgi baltu krāsu.

-Šķīdumu atdzesē, pilinot aukstu ūdeni caurules pamatnē.

-Preparātu padara sārmainu, lēnām pievienojot (pa pilienam) 40% nātrija hidroksīda šķīdumu, līdz mainās krāsa.

-Ja tests ir pozitīvs, šķidrumu saskarnē izveidosies tumši oranžs gredzens.

-Ja reakcija ir negatīva, krāsa neveidosies.

- Ksantoproteīna reakcija, lai noteiktu fenola un indola vielas asinīs

-Izdaliet 5 cc 20% trihloretiķskābes uz 5 cc venozo asiņu, plazmas vai seruma, pēdējais ir visvairāk norādīts. Labi samaisa un filtrē.

-Ņem 2 ml filtrāta un sajauc to ar 0,5 ml slāpekļskābes. Pēc tam to uzkarsē līdz vārīšanās temperatūrai, tāpēc mēģeni 30 sekundes novieto tieši virs vieglas liesmas. To atdzesē ar ūdeni un pievieno 1,5% no 33% nātrija hlorīda.

To interpretē šādi:

-Negatīvs rezultāts: dzeltenīga krāsa.

-Pozitīvs (+) citrondzeltenas rezultāts.

- (++) zeltaini dzeltens.

- (+++) tumši dzeltenas līdz brūnas

To var arī interpretēt, izmantojot atsauces Autenrieth kolorimetrisko skalu, kas sastāv no dažādām kālija dihromāta koncentrācijām. To sagatavo no 10 līdz 10 atšķaidījumiem no 0,03874% rezerves šķīduma. Katra caurule norāda procentu.

Interpretācijas skalas

Pastāv divas interpretācijas skalas, ko sauc par seno un moderno. Normālās vērtības ir:

Vecais galds: no 75 līdz 85%

Mūsdienīgs galds: no 15 līdz 25%

Ja testa mēģenes krāsa ir divu standarta mēģenīšu vidū, starp abiem mērījumiem izdara vidējo vērtību.

Kālija dihromāta standartšķīdumu sagatavo šādi: Mērkolbā izmēra 7,9 ml 10 N kālija dihromāta un uzpilda līdz 100 ml. Atšķaidījumus ievēro, kā parādīts Autenrieth kolorimetriskajā tabulā.

Autenrietā kolorimetriskā tabula. Avots: Vásquez A. Ksantoproteīna reakcija. Spānijas klīniskais žurnāls. 1949. gads; 35 (5): 326-327. Pieejams vietnē: Elsevier

Izmantojiet

Ksantoproteīna reakcijas izmantošana ir daļa no bioķīmisko testu kopuma, kas palīdz uzzināt kādas nezināmas vielas ķīmisko sastāvu. Šis tests veicina ķīmisko analīzi, nosakot olbaltumvielas, kuru struktūrā ir benzola grupas.

Šo reakciju pētnieki plaši izmanto dažādos interesējošo vielu pētījumos.

Šajā ziņā Vásquez-Jorge un līdzstrādnieki izmantoja šo un citas reakcijas, lai izpētītu olbaltumvielu saturu šķidrumos, kas iegūti no mangrovju austeres (Crassostrea rhizophorae).

Tāpat Rojas et al. (2009) izmantoja virkni testu, ieskaitot ksantoproteīna reakciju, lai analizētu glikomakropeptīdus rikotas sūkalu nogulsnēs.

No otras puses, Behera ksantoproteīna reakciju Volhards pārveidoja, lai to izmantotu citiem mērķiem. Šajā gadījumā fenola un indola vielu noteikšanai, kas var paaugstināties daudz agrāk (nedēļās vai mēnešos), pirms urīnvielas un atlikušā slāpekļa līmenis asinīs palielinās.

Šie toksiskie atkritumi veidojas no pārtikas saindēšanās zarnās.

Šīs vielas uzkrājas asinīs, ja tās netiek pareizi izvadītas, tāpēc pozitīvs ksantoproteīna tests var paredzēt pareizu nieru mazspējas vai urēmijas stāvokļa agrīnu sākumu.

Atkarībā no krāsas intensitātes jūs varat noteikt, cik tā ir progresīva. Šajā gadījumā pārbaude ir kvantitatīva.

Veseliem cilvēkiem šis tests dod nelielu dzeltenu krāsu, kas atbilst normālam triptofāna un tirozīna līmenim, kas var būt asinīs.

Lai gan pacientiem ar nierēm ksantoproteīna reakcija ir izteikti pozitīva, pateicoties citu vielu klātbūtnei: fenols, indols, parakrezols, aromātiskās skābes skābes.

Piesardzības pasākumi

Šis tests jāveic apmācītiem speciālistiem. Jāņem vērā visi bioloģiskās drošības noteikumi, jo izmantotie reaģenti ir kodīgas skābes un bāzes.

Ja nejauši daži pilieni slāpekļskābes nokrīt uz ādas vai uz nagiem, tie kļūs dzelteni, jo abās struktūrās ir olbaltumvielas. Turklāt uz ādas un gļotādām tas izraisa smagus apdegumus.

Ja notiek saskare ar ādu, jāievēro protokols, ka apmēram 20 minūtes nekavējoties jānomazgā teritorija ar ziepēm un ūdeni.

Ja tas izšļakstās acīs, to vajadzētu mazgāt ar lielu daudzumu svaiga ūdens, cenšoties turēt acis vaļā.

Atsauces

1. "Ksantoproteīna reakcija" Wikipedia, Bezmaksas enciklopēdija. 2019. gada 2. septembris, 17:49 UTC. 2019. gada 21. oktobris, 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. Mangrove austeres (Crassostrea rhizophorae) šķidruma ekstraktu fizikāli ķīmiskais raksturojums un olbaltumvielu saturs. Rev Cubana de Química, 2014; 26 (1): 66-74. Pieejams Redalyc.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. GMP izolēšana un veiktspēja, sūkalas nogulsnējot ar trihloretiķskābi. Cients. (Marakaibo) 2009; 19 (3): 295-302. Pieejams: ve.scielo.
4. Vásquez A. Ksantoproteīna reakcija. Spānijas klīniskais žurnāls. 1949. gads; 35 (5): 326-327. Pieejams vietnē: Elsevier
5. Gálvezs I, Garāts O. Behera un Endrjū reakcijas urīna ķirurģijā. Spānijas slimnīcas Uroloģijas dienests. Argentīnas uroloģijas žurnāls 395–404