BAROTNES SAGATAVOŠANA: MĒRĶI UN SOĻI - BIOLOĢIJA - 2025

Barotnes sagatavošana ir ierasta metode, ko laboratorijās izmanto vēlamo mikroorganismu augšanai. Barotnes ir cietas, šķidras vai daļēji cietas zāles, kurās ir visas nepieciešamās barības vielas mikrobu populācijas attīstībai.

Kopumā mikroorganismu kultivēšanas līdzekļi ir bagāti ar olbaltumvielām un aminoskābēm un parasti satur kādu sastāvdaļu, kas cita starpā veicina pētāmā organisma augšanu, piemēram, vitamīnus, asinis, serumu.

Avots: pixabay.com

Nav vispārējas vai universālas barotnes, jo tās sastāvs mainās atkarībā no interesējošā mikroorganisma vajadzībām. Dažas baktērijas var augt jebkurā barotnē, bet citām ir īpašas prasības.

No kā tas sastāv?

Mikroorganismus, piemēram, sēnītes un baktērijas, nevar pētīt atsevišķi to mazā izmēra dēļ. Šī iemesla dēļ tie jāaudzē mākslīgos veidos, kas ļauj ievērojami palielināt iedzīvotāju skaitu.

Piemēram, ja mēs vēlamies izpētīt baktērijas, mums ir jānodrošina tām piemēroti apstākļi, lai tās varētu vairoties un veidot koloniju (ko var novērot ar neapbruņotu aci).

Barotnes sagatavošana ir ļoti atšķirīga atkarībā no kultivējamā mikroorganisma veida. Pirms tā sagatavošanas ir jāzina darba organisma pamatvajadzības.

Zemāk tiks aprakstīti visbiežāk sastopamie komponenti, kas tiek izmantoti barotnēs, lai iegūtu vispārēju priekšstatu par to sagatavošanu:

Agars

Kultūrās to izmanto kā želejošu līdzekli un pievieno, meklējot cietu vai pusšķidru barotni. Pirmais barojošo aģents, ko izmanto barotņu pagatavošanā, bija želatīns, bet 1883. gadā agaru bakterioloģijas pasaulē iepazīstināja W. Hesse.

Bakterioloģiskā agara galvenā sastāvdaļa ir polisaharīds ar sarežģītiem zariem, kas iegūti no aļģēm. Šis savienojums tiek izmantots kā sabiezinātājs parastos ēdienos, piemēram, saldējumā un ievārījumos.

Tas ir ļoti vērtīgs elements mikrobioloģijā vairāku iemeslu dēļ. Galvenokārt tāpēc, ka mikroorganismi to nespēj noārdīt, tas sašķidrina 100 ° C temperatūrā un paliek šķidrā stāvoklī, līdz sasniedz 45 ° C vai zemāku temperatūru.

Gadījumā, ja vēlaties sagatavot cietu barotni, agara koncentrācijai jābūt aptuveni 1,5%, bet pusšķidrajām vielām jābūt no 0,3 līdz 0,5%.

Šķidrumi

Patogēno organismu audzēšanai nepieciešami ķermeņa šķidrumi, lai tie varētu attīstīties tāpat kā dabiskajā vidē. Šī iemesla dēļ tiek pievienotas veselas vai defibrilētas asinis. Šķidrumu ņem no veselīga dzīvnieka un pēc sterilizācijas to pievieno barotnei.

Izvilkumi

Tos iegūst no dažādām dzīvnieku daļām (piemēram, gaļas vai aknām) vai dārzeņiem (sēklām) un apstrādā, lai iegūtu cietu koncentrātu pastas vai pulvera veidā. Visizplatītākās ir raugs, iesals un gaļa.

Peptoni

Šos organiskos savienojumus iegūst fermentatīvā vai ķīmiskā dzīvnieku vai augu audu hidrolīzē. Mērķis ir pievienot saturu, kas bagāts ar aminoskābēm, kas ir olbaltumvielu pamatvienības.

Amortizatori

"Buferi" vai buferu sistēmas ļauj izvairīties no pēkšņām pH izmaiņām un palīdz uzturēt optimālo diapazonu, ko ķermenis panes.

Lielākā daļa organismu var labi attīstīties, ja pH ir 7, lai gan dažas baktērijas dod priekšroku sārmainai videi. Tomēr ir baktērijas, kuras pretojas pH svārstībām starp vērtībām 6 un 9.

Sugas, kas jutīgas pret pH, kaitējumu rada pārmērīgs ūdeņraža vai hidroksiljonu daudzums, bet gan vāju skābju vai bāzu, kas var iekļūt šūnā, palielināšanās.

Tāpat tiek pievienoti pH indikatori, lai to uzraudzītu un izvairītos no novirzēm, ko izraisa fermentācija vai citi procesi.

mērķus

Gatavojot barotni, galvenais mērķis ir pievienot visus nepieciešamos komponentus, lai varētu veiksmīgi izolēt organismu. Jānosaka visefektīvākā sastāvdaļu un barības vielu kombinācija, lai sasniegtu vēlamo barotni.

Gan barotnes sagatavošana, gan uzglabāšana ir izšķiroša, lai nodrošinātu veiksmīgu augšanu, jo barotnes sastāvs un barības vielu pieejamība ir atkarīgas no šiem soļiem.

Jāņem vērā, ka mikroorganismu kultivēšana ir uzdevums, kuru ietekmē vairāki faktori, kas ir ārpus barotnes, piemēram, saņemtā gaismas intensitāte, temperatūra un barotnes skābuma vai sārmainības līmenis. Tāpēc ir jāņem vērā katrs no šiem mainīgajiem.

Mediju veidi

Balstoties uz tā sastāvu

Balstoties uz to sastāvu, ir trīs galvenie kultūru veidi: dabiski vai empīriski, daļēji sintētiski un definēti sintētiski vai ķīmiski augi.

Dabiska vide

Dabiskā vidē precīzs sastāvs nav zināms. Tajos ietilpst tādas sastāvdaļas kā piens, atšķaidītas asinis, dārzeņu sulas, gaļas un peptonu ekstrakti un uzlējumi. Ekonomisku apsvērumu dēļ bieži pievieno lētas sastāvdaļas, piemēram, sojas ekstraktu, sūkalas, melasi utt.

Daļēji sintētiski nesēji

To sauc par daļēji sintētisku barotni, ja tā sastāvs ir daļēji zināms. Jebkura barotne, kas satur agaru, kļūst par daļēji sintētisku barotni.

Starp tiem, starp citiem piemēriem, ir kartupeļu dekstrozes agars, czapek-dox agars, auzu agars, gaļas peptona agars.

Sintētiska vai ķīmiski noteikta vide

Šajā gadījumā barotnes sastāvs - oglekļa, slāpekļa, sēra, fosfora un jebkura cita nepieciešamā augšanas faktora avotu daudzuma ziņā - ir pilnībā zināms. Tas ir ļoti noderīgi, ja vēlaties iegūt reproducējamus rezultātus citiem pētniekiem.

Tā sauktajiem "mikroorganismiem ar īpašām augšanas prasībām" ir jāpievieno nepieciešamie komponenti. Šāda veida piemērs ir Lactobacillus.

Balstoties uz mikroorganismu veidu

Līdzīgi ir arī cita barotņu klasifikācija, pamatojoties uz mikroorganismu veidu, kas uz tiem var augt. Pēc šī principa mums ir šādi vispārīgi, bagātināšanas, selektīvi un diferencēti līdzekļi. Katrs no tiem ir aprakstīts zemāk:

Vispārējie mediji

Tie atbalsta visdažādāko mikroorganismu attīstību. Ja kādam organismam nepieciešami īpaši apstākļi tā augšanai, tas nevarēs veiksmīgi attīstīties šāda veida kultūrā.

Bagātināšanas līdzekļi

Bagātināšanas vide atbalsta noteikta veida mikroorganismu augšanu, taču nav pievienota viela, kas neļautu tajā augt cita veida mikrobiem.

Selektīvie mediji

Viņi meklē specifisku mikroorganismu augšanu, cita starpā to sauc par sēnītēm, baktērijām, vienšūņiem. Lai to izdarītu, tie kavē citu attīstību.

Lai sasniegtu šo mērķi, var pievienot ķīmiskus savienojumus, kas ir nāvējoši plašai mikroorganismu grupai un nekaitīgi interesējošajam organismam, vai arī pievienojot enerģijas avotus, kurus var asimilēt tikai meklētais mikrobs.

Paņemot medicīniskos paraugus patogēno mikroorganismu kultivēšanai, izmanto selektīvos barotnes. Šeit ir nepieciešams veicināt patogēna augšanu un kavēt no pacienta normālas mikrobu floras attīstību.

Bismuta sulfīta agars, piemēram, nepieļauj grampozitīvu baktēriju un liela skaita baktēriju augšanu kuņģa-zarnu trakta dobumā. Šī iemesla dēļ to izmanto gramnegatīvo baktēriju, kas izraisa vēdertīfu, Salmonella typhi, kultivēšanai fekāliju paraugos.

Diferenciālie nesēji

Šis tips izmanto dažus interesējošā organisma diagnostiskos parametrus (piemēram, tā metabolisma īpatnības), lai tos varētu identificēt ar citu sugu, kas aug tajā pašā vidē.

Gan diferenciālie barotnes, gan selektīvie barotnes ir ļoti noderīgi klīniskās mikrobioloģijas un sabiedrības veselības jomā, jo šīm disciplīnām ir jāidentificē specifiski mikroorganismi, kas saistīti ar patoloģijām vai sliktiem higiēnas apstākļiem.

Kultūrai var pievienot indikatorus, kas piešķir raksturīgo iezīmi meklējamajai kolonijai. Piemēram, laktozi un pH indikatoru pievieno agara-eozīna-metilēnzilā (saīsināts EMB) un MacConkey agaram.

Tādējādi, kad šajos barotnēs attīstās kolonija ar spēju raudzēt laktozi un ražot aldehīdus, tos var novērot īpašā krāsā.

Pakāpieni

Pašlaik barotnes var iegādāties liofilizētā veidā. Tāpēc sagatavošana ir vieglāka, un vienīgais, kas jādara, ir produkta rehidratācija. Saturs jāsver (ņemot vērā gatavo gatavo daudzumu) un jāizšķīdina destilētā ūdenī, ievērojot visas norādes uz produktu.

Šķidrā barotnes saturs jāsadala vēlamajos traukos (Petri trauciņos, mēģenēs utt.) Turpmākai sterilizēšanai. Cietās barotnes izplatīšanai ir nepieciešams to izkausēt, izmantojot mikroviļņu krāsni vai pakļaujot materiālu ūdens vannai. Ir jākoriģē barotnes pH.

Parasti agaru izmanto mēģenēs vai Petri traukos. Ja agars sacietē slīpā stāvoklī ar pareizu leņķi tā, lai gala gala mala būtu pa diagonāli, šo izkārtojumu sauc par knābja vai slīpām caurulēm. Kad agars sacietē pilnīgi vertikālā stāvoklī, to sauc par "dziļu".

Pēc barotnes sterilizācijas - izmantojot autoklāvu - tām ļauj atdzist. Tie jāapstrādā vidē, kurā nav mikroorganismu, visbiežāk ir jāstrādā ar iedegtu šķiltavu, kas nodrošina aseptisku vidi to tuvumā.

Atsauces

1. Celis, JE (2006). Šūnu bioloģija: laboratorijas rokasgrāmata (2. sējums). Elsevier.
2. Finegold, SM, Beilija, WR, Barons, EJ, Fineglod, SM, & Scott, EG (1991). Beilija Skota: mikrobioloģiskā diagnoze. Pan-American Medical.
3. Olivas, E. (2004). I un II mikrobioloģijas un parazitoloģijas prakses rokasgrāmata. Ciudad Juarez autonomā universitāte.
4. Schlegel, HG, & Zaborosch, C. (1993). Vispārējā mikrobioloģija. Cambridge University Press.
5. Tortora, GJ, Funke, BR, & Case, CL (2007). Ievads mikrobioloģijā. Panamerican Medical Ed.