- Pamats
- Izmantojiet
- Process
- materiāli
- Tehnika (kvalitatīvā metode)
- Tehnika (daļēji kvantitatīva)
- QA
- Atsauces
Rose Bengal ir laboratorijas pārbaude, kuras pamatā ir antigēna-antivielu reakcija brucelozes diagnozei. Šis paņēmiens ļauj noteikt specifiskas antivielas pret Brucella abortus baktēriju cilvēka seruma paraugos. Rezultātu var ziņot kvalitatīvi vai daļēji kvantitatīvi.
Kvalitatīvā forma izsaka to, vai pacientam testa rezultāts ir pozitīvs vai negatīvs, tas ir, vai ir vai nav antivielas. Tikmēr puskvantitatīvo ziņojumu sniedz SV / ml un norāda aptuveno klāt esošo antivielu daudzumu. Jāatzīmē, ka antivielas tiks ražotas tikai tad, ja pacients ir bijis kontaktā ar mikroorganismu.
Rožu bengālijas reakcija aglutinācijas plāksnē. Avots: ņemts no videoklipa https://youtu.be/igAVQ-GiyGY
Lielās vienkāršības, augstas jutības un specifiskuma dēļ tā ir viena no seroaglutinācijas metodēm, ko medicīnā visbiežāk izmanto kā sākotnēju pārbaudi šīs slimības diagnosticēšanai.
Daži pētnieki ir salīdzinājuši Rožu Bengālijas testa efektivitāti ar citām metodēm, piemēram, seroaglutināciju (febrilajiem antigēniem), un novērojuši, ka, lai arī ir laba korelācija, viņi redzēja atsevišķus gadījumus, kad febrila antigēna tests bija negatīvs un Rozes de Pozitīvs uzliesmojums.
Iegūtās atšķirības bija saistītas ar faktu, ka šiem pacientiem bija IgG antivielu apakšklase pret Brucella abortus ar labāku saistīšanās spēju skābā pH, tāpēc viņi varēja reaģēt ar Rožu Bengāla reaģentu, bet ne ar febrilajiem antigēniem.
Šajā ziņā viņi ir ierosinājuši febrila antigēna tehnikas reaģentus modificēt līdz skābam pH līmenim, lai tie varētu atklāt šāda veida gadījumus.
Pamats
Rožu bengālijas reaģents sastāv no antigēnas suspensijas. Tas sastāv no Scella celma Brucella abortus, kas atšķaidīts skābā laktāta buferšķīdumā (pH 3,6), kā arī fenols un Rose Bengal krāsviela.
Tāpēc paraugā tiek pieprasītas antivielas pret Brucella, ja tādas ir, tās reaģēs ar antigēna reaģentu, un tiks novērota makroskopiski redzama aglutinācijas reakcija. Pārbaude nosaka IgM antivielas vai IgG antivielas.
Tas nozīmē, ka tā var atklāt slimību gan akūtā stadijā, kur dominē IgM antivielas, gan hroniskā stadijā, kur dominē IgG antivielas.
Tā ir priekšrocība, jo tā palielina testa jutīgumu, bet tajā pašā laikā tā ir neizdevīga, jo tā nediskriminē vienu un otru posmu, jo reakcija ar IgM un IgG antivielām ir identiska.
Pārbaude vienmēr jāveic kopā ar negatīvu un pozitīvu kontroli. Negatīvā kontrole satur dzīvnieku serumu bez antivielām, un pozitīvā kontrole satur dzīvnieku izcelsmes serumu ar 50 SV / ml anti-Brucella antivielu.
Izmantojiet
Bruceloze ir nopietna slimība, kurai ir tendence būt hroniskai un bīstamai, tāpēc ir ļoti svarīgi to savlaicīgi diagnosticēt. Tā ir zoonoze, un cilvēki var inficēties tiešā saskarē ar inficētiem materiāliem, visneaizsargātākie cilvēki ir veterinārārsti un dzīvnieku kopēji.
Infekcija var rasties arī starp citiem infekcijas veidiem, ēdot inficētu neapstrādātu gaļu.
Šī slimība uzbrūk lokāli vai sistēmiski. Sistēmiskā forma ir visnopietnākā, jo var tikt ietekmēti dažādi orgāni, tai skaitā retikulārā endotēlija sistēma (aknas, liesa, kaulu smadzenes), āda (celulīts un limfadenopātija), elpošanas sistēma (pneimonija), muskuļu un skeleta sistēma (artrīts, sacroiliīts un spondilīts), cita starpā.
Rozes bengālijas tests ir ļoti noderīgs paņēmiens sākotnējās skrīninga veikšanai, jo tas ir ļoti lēts, ērti lietojams un tam ir liela specifika un jutīgums.
Viltus negatīvu un viltus pozitīvu gadījumu gadījumi ir ļoti reti, un tie var rasties cilvēkiem ar attiecīgi ļoti zemu antivielu titru (<25 SV / ml) vai ārkārtīgi augstu (> 1000 SV / ml).
Process
materiāli
-Rozes Bengālijas komplekts
-Aglutinācijas plāksnes balts fons
-50 µl pipete
-Rotators (pēc izvēles)
-Vorteks
Tehnika (kvalitatīvā metode)
Komerciālajos rožu bengālijas komplektos ir gatavi lietošanai reaģenti.
-Pirms darba sākšanas apstrādājiet reaģentus.
-Aglutinācijas plāksnēm ir uzvilkti apļi, katrs no tiem ir paredzēts citam paraugam. Izmanto 3 apļus, pirmo negatīvajai kontrolei, otro paraugam un trešo pozitīvajai kontrolei.
-Ielieciet pilienu vai 50 µl kontroles un parauga to attiecīgajā aplī.
- Sajauciet rožu bengālijas reaģentu, izmantojot virpuli. Novietojiet pilienu blakus iepriekš novietotajiem.
-Sajauciet ar koka zobu bakstāmiem (katram paraugam vai kontrolei izmantojiet pa vienam). Veiciet apļveida kustības un izklājiet tā, lai aptvertu visu apli.
Avots: attēli, kas uzņemti no video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Rediģēts attēla izkārtojums.
-Ielieciet plāksni uz automātiskā rotatora ar ātrumu 80 līdz 100 apgr./min vai pagrieziet manuāli 4 minūtes. Izlasiet pierādījumus šī laika beigās.
-Pārliecinieties, ka kontrole deva, kā paredzēts. Salīdziniet testa parauga reakciju ar kontroli. Ziņot par pozitīvu, ja novēro aglutināciju, un kā negatīvu, ja nav aglutinācija.
Pozitīvs tests norāda, ka pacienta daudzums ir vienāds vai lielāks par 25 SV / ml anti-Brucella antivielu.
Pozitīvas (ar aglutināciju) un negatīvas (bez aglutinācijas) reakcijas interpretācija. Avots: Citrulīns. Rediģēts attēls.
Tehnika (daļēji kvantitatīva)
Ja kvalitatīvajā reakcijā paraugs ir izteikti pozitīvs, to var daļēji kvantitatīvi noteikt. Šim nolūkam parauga sērijveida dubultās atšķaidīšanas tiek veiktas ar fizioloģisko fizioloģisko šķīdumu. Iepriekš aprakstīto procedūru veic ar katru atšķaidījumu.
To interpretē arī, novērojot aglutināciju makroskopiski. Rezultāts būs augstākā atšķaidījuma titrs, kurā tika novērots pozitīvs rezultāts.
Anti-Brucella antivielu aptuvenās vērtības aprēķināšanai izmanto šādu formulu:
25 SV / ml x reakcijas titrs = SV / ml
Piemērs: ja pacientam puskvantitatīvajā testā rezultāts ir pozitīvs ½, ¼ un 1/8 atšķaidījumā un tas ir negatīvs, sākot no 1/16 atšķaidījuma, tas nozīmē, ka pacienta titrs ir 8 .
Piemērojot formulu:
25 SV / ml x 8 = 200 SV / ml
QA
-Komplektiem ir derīguma termiņš, un tas ir jāievēro. Nevajadzētu lietot, ja reaģenta derīguma termiņš ir beidzies.
-Lietošanas laikā pārliecinieties, ka reaģents nesatur cietas daļiņas, jo tas ir bojājuma pazīme.
-Uzturiet no 2 līdz 8 ° C.
-Nesasaldējiet, šī darbība reaģentu neatgriezeniski sabojā.
- Vienmēr pārbaudi veic kopā ar negatīvo un pozitīvo kontroli.
- Metode pieļauj seruma paraugus ar noteiktu lipemijas un hemolīzes pakāpi, tomēr nav ieteicams lietot pārmērīgi lipemiskus un hemolizētus serumus, abi apstākļi maina testa rezultātus.
- Pirms analīzes sākšanas vienmēr reaģentus uzkarsē līdz istabas temperatūrai.
- Neinterpretējiet reakcijas, kas prasa vairāk laika nekā ieteicamais laiks, jo tas rada ziņojumu par nepatiesiem pozitīvajiem rezultātiem, jo pēc noteikta laika reaģents izgulsnējas, simulējot pozitīvu reakciju.
-Tehnika ir 100% jutīga, un tās specifika ir 98%.
-Pēc daļēji kvantitatīvas 1000 SV / ml kvantitatīvas noteikšanas ir iespēja novērot prozona efektu (viltus negatīvs antivielu pārpalikuma dēļ, salīdzinot ar antigēnu daudzumu).
Atsauces
- Rubio M, Barrio B un Díaz R. Rosa de Bengala, Coombs un pretimunoelektroforēzes testu vērtība, lai diagnosticētu cilvēka brucelozes gadījumus, kad seruma aglutinācija ir negatīva. Mikrobioloģijas katedra. Klīniskās mikrobioloģijas dienests. Universitātes klīnika. Navarras universitāte. 406–407. Pieejams vietnē: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "Bruceloze." Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2019. gada 6. decembris, 14:37 UTC. 2019. gada 18. decembris, 18:09 lv.wikipedia.org.
- Monlab laboratorijas. Monlab Bengal Rose - tests. 2016.Pieejams vietnē: monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Bruceloze. Peru sv. Med. Sabiedrības veselība 1997; 14 (1): 63–66. Pieejams vietnē: scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Brucelozes ģimenes klīniskās, seroloģiskās un polimerāzes ķēdes reakcijas pēcpārbaudes. Sv. Infektols. 2014. gads; 31 (4): 425-433. Pieejams vietnē: scielo.conicyt.