BIOĶĪMISKIE TESTI: VEIDI, KĀDI TIE IR UN CIK SVARĪGI - BIOLOĢIJA - 2025

Ar bioķīmiskās analīzes mikrobioloģijā ir kopums testa ķimikāliju tiek veikti, lai mikroorganismi iesniegt paraugā, lai identificētu tos ; Šie mikroorganismi parasti ir baktērijas. Mikrobiologam ir pieejams liels skaits bioķīmisko testu.

Tomēr šo testu izvēle ir balstīta uz provizoriskiem atklājumiem, piemēram, Gram traipu shēmu un augšanas pazīmēm, kas ļauj baktērijas iedalīt noteiktā kategorijā. Bioķīmiskie testi galvenokārt balstās uz katra veida baktēriju metabolisma īpašībām.

Ne visām baktērijām ir vienādas īpašības, tāpēc tiek pārbaudīts, vai tām ir kāds īpašs enzīms, pievienojot substrātu un gaidot reakcijas iestāšanos. Parasti šo noteikšanu nosaka ar krāsas vai pH izmaiņām barotnē.

Lai ticami noteiktu baktēriju līdz sugas līmenim, bieži ir nepieciešami mazāk nekā 15 bioķīmiskie testi. Bioķīmisko testu veikšana var palielināt pārliecību par identifikāciju.

Lielāko daļu šo bioķīmisko testu veic serumā vai asins plazmā. Tomēr tos var veikt arī ar citām bioloģiskām sekrēcijām, piemēram: urīnam, cerebrospinālajam šķidrumam, pleiras šķidrumam un fekālijām.

Klasifikācija

Bioķīmiskos testus var iedalīt 3 grupās:

Universāls

Tās ir pārbaudes, kuras var veikt jebkuram paraugam, un kas mikrobiologam palīdz veikt šādus bioķīmiskos testus, kas jāveic, lai iegūtu ticamu identifikāciju.

Piemērs

Katalāzes un oksidāzes tests.

Diferenciāļi

Tie ir testi, kas veikti, lai identificētu paraugā esošos mikroorganismus līdz sugas līmenim.

Identifikācija tiek veikta, pamatojoties uz testu kombinācijas rezultātiem, jo ​​individuālie rezultāti nav pietiekami informatīvi, lai identificētu.

Piemērs

IMViC testi un cukura izmantošanas testi.

Konkrēts

Tie ir īpaši testi noteiktai sugu kopai vai sugas apakštipam. Šīs pārbaudes parasti tiek veiktas, lai apstiprinātu vai identificētu pasugas līmenī. Atsevišķi testi ir informatīvi.

Piemērs

Γ-glutamilaminopeptidāzes tests.

Bioķīmisko testu veidi

Katalāzes tests

Katalāzes tests ir tests, lai pierādītu katalāzes enzīma klātbūtni, sadalot ūdeņraža peroksīdu skābeklī un ūdenī. Uz priekšmetstikliņa nelielā daudzumā ūdeņraža peroksīda (3%) pievieno baktērijas.

Katalāzes tests ir vienkāršs tests, ko izmanto mikrobiologi, lai palīdzētu identificēt baktēriju sugas un noteiktu dažu mikrobu spēju sadalīt ūdeņraža peroksīdu, ražojot fermentu katalāzi.

Ja tiek novēroti skābekļa burbuļi, tas nozīmē, ka baktērijām ir enzīma katalāze, jo tā katalizē ūdeņraža peroksīda sadalīšanos skābeklī un ūdenī. Pēc tam tiek teikts, ka organisms ir katalāzes pozitīvs (piemēram, Staphylococcus aureus).

Oksidāzes tests

Šo testu izmanto, lai identificētu mikroorganismus, kas satur enzīmu citohroma oksidāzi (svarīgi elektronu transporta ķēdē). To parasti izmanto, lai atšķirtu Enterobacteriaceae un Pseudomadaceae ģimenes.

Citohroma oksidāze pārnes elektronus no elektronu transportēšanas ķēdes uz skābekli (galīgo elektronu akceptoru) un samazina to ūdenī. Mākslīgo elektronu donoru un akceptoru molekulas tiek nodrošinātas oksidāzes testā.

Kad elektronu donors tiek oksidēts ar citohroma oksidāzes darbību, vide kļūst tumši violeta un tiek uzskatīta par pozitīvu rezultātu. Mikroorganisms Pseudomonas aeruginosa ir oksidāzes pozitīvas baktērijas piemērs.

Sālīta mannīta agara (MSA) pārbaude

Šis testa veids ir gan selektīvs, gan diferencēts. MSA atlasīs organismus, kas spēj dzīvot vidē ar augstu sāls koncentrāciju, piemēram, Staphylococcus sugas atšķirībā no Streptococcus sugām, kuru augšana šādos apstākļos tiek kavēta.

Diferenciālā sastāvdaļa šajā testā ir mannīta cukurs. Organismi, kas var izmantot mannītu kā pārtikas avotu, veidos fermentācijas blakusproduktus, kas ir skābi un tādējādi pazemina barotnes pH.

Barotnes skābuma dēļ pH indikators, fenola sarkans, kļūst dzeltens. To baktēriju sugu piemēri, kuras var atšķirt ar šo metodi, ir: Staphylococcus aureus (pozitīvs, jo tas raudzē mannītu) un Staphylococcus epidermidis (negatīvs, jo tas neraudzē mannītu).

Koagulāzes tests

Koagulāze ir ferments, kas palīdz asins plazmā sarecēt. Šo testu veic grampozitīvām un katalāzes pozitīvām baktēriju sugām, lai identificētu Staphylococcus aureus (koagulāzes pozitīvos). Faktiski koagulāze ir šīs baktēriju sugas virulences faktors.

Trombu veidošanās ap infekciju, ko izraisa šī baktērija, iespējams, aizsargā to no fagocitozes. Šis tests ir ļoti noderīgs, ja vēlaties atšķirt Staphylococcus aureus no citām Staphylococcus sugām, kuras ir koagulāzes negatīvas.

Ureazes tests

Šo testu izmanto, lai identificētu baktērijas, kuras var hidrolizēt urīnvielu, izmantojot fermentu ureāzi. To parasti izmanto, lai atšķirtu Proteus ģints no citām zarnu trakta baktērijām.

Karbamīda hidrolīze rada amonjaku kā vienu no tā produktiem. Šī vājā bāze palielina barotnes pH virs 8,4, un pH indikators (fenola sarkanais) mainās no dzeltenas uz rozā. Ureazes pozitīvu baktēriju piemērs ir Proteus mirabilis.

Kas ir bioķīmiskie testi?

Bioķīmiskos testus mikrobioloģijā izmanto, lai diagnosticētu slimības, ko izraisa mikrobi, un pārraudzītu ārstēšanu, kas tiek veikta to apkarošanai. Turklāt tos izmanto infekcijas slimību skrīningam un to prognozēšanai.

Mikroorganismu bioķīmiskā identifikācija sniedz priekšstatu par to, ko šie mikroorganismi ir spējīgi, un tas ir iespējams, ka tiek diskriminēti dažādi vienas sugas celmi ar specifiskiem bioķīmiskiem profiliem.

Specifisko fermentu aktivitāšu atšķirības ietekmē mikroorganismu ekoloģiju, fizioloģiju vai dabisko dzīvotni, ko dažos gadījumos var uzskatīt par svarīgu informāciju.

Svarīgums

Baktēriju formas, lieluma un izkārtojuma strukturālās atšķirības maz palīdz identificēšanas procesā, jo ir daudz baktēriju sugu, kurām pēc formas, lieluma un izkārtojuma ir līdzīgi.

Šī iemesla dēļ baktēriju identificēšana galu galā galvenokārt balstās uz atšķirībām to bioķīmiskajās aktivitātēs.

Katrai baktēriju sugai ir precīzi noteikts metabolisma aktivitāšu kopums, kas atšķiras no visām pārējām sugām. Šie bioķīmiskie "pirkstu nospiedumi" ir īpašības, ko kontrolē baktēriju fermenti.

Tādējādi bioķīmiskie testi ir svarīgi, jo tie palīdz pētniekam pareizi identificēt paraugā esošos patogēnus un tādā veidā spēt ieteikt pacientam piemērotu ārstēšanu.

Atsauces

1. Bekets, G., Walkers, S. un Rae, P. (2010). Klīniskā bioķīmija (8. izdevums). Vailijs-Blekvels.
2. Clarke, PH, un Cowan, ST (1952). Bioķīmiskās metodes bakterioloģijai. Journal of General Microbiology, 6 (1952), 187. – 197.
3. Gaw, A., Murphy, M., Srivastava, R., Cowan, R., St, D. & O'Reilly, J. (2013). Klīniskā bioķīmija (5. izdevums). Elsevier veselības zinātnes.
4. Goldmans, E. un Grīns, L. (2008). Mikrobioloģijas praktiskā rokasgrāmata (2. izdevums). CRC Press.
5. Harrigan, W. (1998). Laboratorijas metodes pārtikas mikrobioloģijā (3. izdevums). Akadēmiskā prese.
6. Vasanthakumari, R. (2009). Praktiskā mikrobioloģija. BI Publikācijas Pvt Ltd.