KOAGULĀZES PĀRBAUDE: PAMATOJUMS, PROCEDŪRA UN LIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Koagulāzes tests ir laboratorijas metode, ko izmanto, lai atklātu klātbūtni enzīma koagulāzes. Šim fermentam ir koagulējošas īpašības plazmā. 1903. gadā Loebs pirmais aprakstīja šo fermentu.

Šo testu veic ar grampozitīviem, katalāzes pozitīviem kokiem, ļaujot Staphylococcus aureus celmus atšķirt no pārējiem stafilokokiem, jo ​​tas ir vienīgais klīniski nozīmīgais mikroorganisms, kas to ražo.

Abi attēli atklāj pozitīvu koagulāzes testu. Avots: attēls pa kreisi: Philippinjl. Labais attēls: Foto autors ieguvis MSc. Marielsa Gil.

Šajā nozīmē Staphylococaceae ģimenes locekļus, kuru testa rezultāts ir negatīvs, bieži sauc par koagulāzes negatīvu Staphylococcus.

Ir daži celmi, izņemot S. aureus, kas var ražot koagulāzi, piemēram, Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius un S. delphini.

Tomēr pirmie trīs ir klīniski nozīmīgi veterinārā līmenī, un tos ļoti reti var atrast kā cilvēku infekcijas cēloni, savukārt S. delphini ir sastopams tikai jūras vidē.

Turklāt tie ir viegli diferencējami, jo S. hyicus un S. intermedius neraudzē mannītu un S. schleiferi spp coagulans neraudzē maltozi vai trehalozi, savukārt S. aureus raudzē šos ogļhidrātus.

Koagulāzes enzīma klātbūtne ir saistīta ar celmu virulenci. Tomēr šī teorija sabrūk, jo tiek novērotas citas virulentas koagulāzes negatīvas sugas, kas spēj izraisīt nozīmīgas infekcijas.

Pamats

Interpretācija

Aglutinācija 5-20 sekunžu laikā (spēcīgs pozitīvs tests).

Mainīga aglutinācija, kas notiek no 20 sekundēm līdz vienai minūtei (pozitīva testa kavējums).

Zināma aglutinācijas pakāpe pēc vienas minūtes (apšaubāmi pierādījumi). Ieteicams atkārtot testu vai apstiprināt ar mēģenes metodi.

Nav aglutinācijas (negatīvs tests).

Rezultāts ar SSF. Tam vienmēr jābūt negatīvam, ja tas automātiski dod pozitīvu, testa rezultāts tiek atzīts par spēkā neesošu.

-Tube koagulāzes tests

materiāli

-Sterila testa mēģene

-Plasma

-Marijas vanna 37 ° C temperatūrā.

Tehnika

Ar sterilu pipeti ar pipeti iepilina 0,5 ml plazmas 12 x 75 mēģenē.Ielieciet platīna cilpu ar 2–4 tīrām kolonijām, lai 18 līdz 24 stundas pētītu no cietās kultūras un izšķīdinātu plazmā. uzmanīgi samaisa un inkubē 4 stundas 37 ° C temperatūrā.

Pirmajā stundā pārbaudiet mēģeni, to nekratot, vienkārši viegli nolieciet to. Ja receklis joprojām nav redzams, to var turpināt novērot ik pēc 30 minūtēm, līdz ir pabeigtas četras stundas. Ja pēc 4 stundām tas joprojām ir negatīvs, to var atstāt līdz 24 stundām, bet istabas temperatūrā. Novērot rezultātu un ziņot par to.

Balstoties uz pieredzi, daži mikrobiologi testa veikšanai iesaka izmantot 500 µl baktēriju suspensijas no 18 stundu kultūras šķidrā barotnē.

Šķiet, ka tas piedāvā ātrākus un ticamākus rezultātus nekā tad, ja kolonijas emulģē no cietas barotnes, īpaši, ja ir izmantota asins plazmā iegūta cilvēka plazma.

Celma izmantošana no buljona palīdz atšķaidīt iespējamo cilvēka anti-stafilokoku antivielu klātbūtni plazmā, kas var kavēt koagulāzes darbību.

Interpretācija

Ja ir redzams receklis, kas aptver visu šķidrumu (pilnīga recēšana), vai receklis, kurā atlikušajā šķidrumā nav nekāda (daļēja recēšana), tas jāuzskata par pozitīvu testu.

Ja trombs neveidojas, tas ir, suspensija paliek viendabīga, tests ir negatīvs.

-Koagulāzes pārbaude, izmantojot fibrinogēnu

Fibrinogēns tiek izmantots tāpat kā plazma, un to izmanto gan priekšmetstikliņa, gan mēģenes pārbaudē. Rīkojieties, kā aprakstīts plazmā, un interpretējiet tāpat.

Izmantojiet

To izmanto, lai atšķirtu Staphylococcus aureus no koagulāzes negatīvajiem stafilokokiem.

QA

Jābūt pieejamām svaigas S. aureus celma kultūrām, kuras var izmantot kā pozitīvo kontroli. Kā negatīva kontrole ir pieejams arī S. epidermidis celms.

Ierobežojumi

- Pozitīvu testu nedrīkst atstāt inkubācijā 24 stundas, jo S. aureus rada fibrinolizīnu, kas izšķīdina trombu.

-Uzticamam testam jāizmanto svaiga vai tikko atjaunota plazma, kā arī svarīgi izmantot svaigas baktēriju kultūras (no 18 līdz 24 stundām). Tas ļauj izvairīties no viltus negatīviem.

-Tests jāveic kopā ar negatīvu un pozitīvu kontroli.

-Daži cietie barotnes var traucēt koagulāzes testu. Nav ieteicams lietot kolonijas no sāļa mannīta agara.

-Ja tiek izmantota citrēta plazma, vienā plazmas ml ieteicams ievietot 5 vienības heparīna, lai izvairītos no viltus pozitīviem rezultātiem. Tas notiek tāpēc, ka daži mikroorganismi, izņemot S. aureus, var sadalīt citrātu un izraisīt plazmas recekļu veidošanos. Šajā gadījumā ieteicams veikt Gram un katalāzes testu.

- Caurulītes testā ir svarīgi novērot reakciju ik pēc 30 minūtēm, jo ​​ir S. aureus celmi, kas rada augstu fibrinolizīna koncentrāciju un ātri atšķaida jaunizveidoto recekli. Izvairieties no viltus negatīvām.

-Uzraugot testu, izvairieties no pēkšņas kratīšanas mēģenē, tas var iznīcināt trombu veidošanās sākumu, kas vēlāk netiks atjaunots, izraisot nepatiesas negatīvas.

Atsauces

1. Konemāns E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
3. Mac Faddin J. (2003). Bioķīmiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. ed. Redakcija Panamericana. Buenosairesa. Argentīna.
4. Pro-Lab laboratorijas. Trusis koagulē plazmu. Pieejams vietnē: pro-lab.com
5. "Koagulāze." Wikipedia, bezmaksas enciklopēdija. 2019. gada 12. februāris, 04:23 UTC. 2019. gada 22. aprīlis, 15:50 wikipedia.org.