KARBAMĪDA BULJONS: PAMATS, SAGATAVOŠANA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Urīnviela buljons ir šķidrums barotni, ko izmanto, lai atklātu ureāzes fermenta noteiktos mikroorganismiem. Ureaze ir mikrobu enzīms, kas tiek ražots konstruktīvā veidā, tas ir, tas tiek sintezēts neatkarīgi no tā, vai atrodas substrāts, uz kura tas darbojas.

Ureazes funkcija ir saistīta ar organisko savienojumu sadalīšanos. Ne visi mikroorganismi spēj sintezēt šo enzīmu, tāpēc tā noteikšana laboratorijā ļauj identificēt noteiktus baktēriju celmus un pat atšķirt vienas ģints sugas.

Negatīvs un pozitīvs urīnvielas tests. Avots: Autores uzņemts foto MSc. Marielsa Gil.

Ir divu veidu urīnvielas pārbaude: Stjuarts un Kristensens. Viņi atšķiras pēc sastāva un jutīguma. Pirmais ir īpašs, lai parādītu lielu daudzumu ureāzes, ko ražo Proteus ģints sugas.

Otrais ir jutīgāks un var noteikt nelielu daudzumu ureāzes, ko novēloti radījušas citas baktēriju ģintis, piemēram, Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter un Mycobacterium.

Stjuarta urīnvielas buljons sastāv no urīnvielas, nātrija hlorīda, dikālija fosfāta, monokālija fosfāta, rauga ekstrakta, fenola sarkanā un destilēta ūdens.

Tikmēr Kristensena urīnvielas buljonu vai agaru veido peptoni, nātrija hlorīds, monokālija fosfāts, glikoze, urīnviela, fenola sarkanais, destilēts ūdens un agara agars. Pēdējais tikai tad, ja tas ir ciets barotne.

Pamats

Ferments ureāze hidrolizē urīnvielu, veidojot oglekļa dioksīdu, ūdeni un divas amonjaka molekulas. Šie savienojumi reaģē, veidojot galaproduktu, ko sauc par amonija karbonātu.

Stjuarta urīnvielas buljons

Stjuarta urīnvielas buljons ir vairāk buferēts ar pH 6,8. Tāpēc mikroorganismiem jāspēj veidot lielu daudzumu amonjaka, lai fenols kļūtu sarkans. PH vajadzētu paaugstināties virs 8.

Tāpēc Stjuarta urīnvielas buljons ir selektīvs Proteus sugām, sniedzot pozitīvus rezultātus 24 līdz 48 stundu laikā pēc inkubācijas, un tas nav efektīvs baktērijām, kas rada nelielu urēzes daudzumu vai lēnām hidrolizē urīnvielu.

Tas notiek tāpēc, ka Proteus sugas var izmantot urīnvielu kā slāpekļa avotu. Tā vietā citām avotiem, kas ražo ureazi, nepieciešams papildu avots.

Tomēr Pérez et al. (2002) noteica, ka Stjuarta urīnvielas buljons bija tikpat efektīvs kā Kristensena urīnvielas agars, nosakot ureazi Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon un Saccharomyces ģints rauga celmos.

Pētījuma autori apgalvo, ka, inkubējot 24 un 48 stundas, ir panākuši 100% vienošanos ar abiem plašsaziņas līdzekļiem (Stjuartu un Kristensenu); ar izņēmumu, ka celmi, kuriem izdevās barotni pārvērst spēcīgā rozīgi fuksijas krāsā, tika pieņemti kā pozitīvi.

Šis skaidrojums ir nepieciešams, jo Lodders (1970) paziņoja, ka gandrīz visiem raugiem izdodas Christensen urīnvielas agara slīpumu pārvērst gaiši rozā krāsā. Tas ir saistīts ar faktu, ka tie minimālā daudzumā var hidrolizēt urīnvielu, un amīnu veidošanās ar aminoskābju oksidējošu dekarboksilēšanu uz virsmas. To nevajadzētu uzskatīt par pozitīvu.

Kristjensena urīnvielas agars vai buljons

Kristjensena urīnvielas buljons vai agars ir mazāk buferēts, jo tas var noteikt nelielu daudzumu amonjaka. Turklāt šī barotne ir bagātināta ar peptoniem un glikozi. Šie savienojumi izraisa citu ureazi producējošu mikroorganismu augšanu, kas nepieaug Stjuarta buljonā.

Tāpat arī Kristensena urīnvielas tests nodrošina ātrākus rezultātus, īpaši attiecībā uz Proteus, jo tas dod ļoti pozitīvu rezultātu tikai 30 minūtēs kā minimālo laiku un līdz 6 stundām kā maksimālo laiku.

Pārējiem ureazi producējošajiem mikroorganismiem vidēja krāsa mainās nedaudz pēc 6 stundām un spēcīgi pēc 24, 48, 72 stundām vai vairāk, un pat daži celmi var izraisīt vāju reakciju pēc 5 vai 6 dienām.

Abu mediju interpretācija (Stjuarts un Kristensens)

Sākotnēji barotne ir dzeltenīgi oranžā krāsā, un pozitīvas reakcijas rezultātā barotnes krāsa kļūst par sārti fuksiju. Krāsas intensitāte ir tieši proporcionāla saražotā amonjaka daudzumam.

Negatīva reakcija atstāj sākotnējās krāsas barotni, izņemot raugus, kas Kristensena urīnvielas agara barotnē var kļūt gaiši rozā krāsā.

Sagatavošana

Stjuarta urīnvielas buljons

Nosveriet nepieciešamos gramus atbilstoši komercuzņēmuma norādēm. Vēlams izšķīdināt sterilā destilētā ūdenī. Šķīdināšanai neizmantojiet siltumu, jo urīnviela ir jutīga pret karstumu.

Sterilizēšanai tiek izmantota membrānas filtrācija. Šim nolūkam tiek izmantots Millipore filtrs ar porām ar 0,45 μ diametru. Nelietojiet autoklāvu. Kad šķīdums ir filtrēts, tas tiek sadalīts sterilās mēģenēs. Lai iegūtu ticamus rezultātus, tas jāpārnes starp minimālo daudzumu 1,5 ml un maksimālo daudzumu 3 ml vienā mēģenē.

Pirms lietošanas uzglabāt ledusskapī un sasildīt.

Ja filtrēšanas metode nav pieejama, barotne jāizmanto nekavējoties, lai iegūtu ticamus rezultātus.

Vēl viens veids, kā sagatavot Stjuarta urīnvielas buljonu, ir šāds:

Dažas komerciālas mājas pārdod bāzes barotni urīnvielas pārbaudei, neskaitot urīnvielu.

Tiek nosvērts komercsabiedrības norādītais daudzums. To izšķīdina destilētā ūdenī un 15 minūtes sterilizē autoklāvā 121 ° C temperatūrā. Ļauj nedaudz nostāvēties un kad barotne ir sasilusi, pievieno 100 ml urīnvielas šķīduma, kas pagatavots 20% apjomā un sterilizēts filtrējot.

Tas tiek izplatīts sterilās mēģenēs, kā aprakstīts iepriekš.

Kristjensena urīnvielas agars vai buljons

- urīnvielas šķīduma sagatavošana

Nosver 29 g dehidrētas urīnvielas un izšķīdina 100 ml destilēta ūdens. Izmantojiet filtrēšanas metodi, lai sterilizētu. Neveiciet autoklāvu.

-Karbamīda bāzes agars

Izšķīdina 24 g dehidrēta bāzes agara 950 ml destilēta ūdens. Sterilizējiet autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes. Ļaujiet tai atpūsties, līdz tā sasniedz 50 ° C temperatūru, un aseptiski pievienojiet iepriekš sagatavoto urīnvielu.

Ielejiet 4-5 ml sterilos mēģenēs un nolieciet līdz cietam. Jābūt garam flautas knābim.

Šo barotni var pagatavot arī šķidrā veidā.

Lietojumprogrammas

Karbamīda tests ir ārkārtīgi efektīvs, lai atšķirtu Proteus ģinti no citām Enterobacteriaceae dzimtas ģintīm, ņemot vērā Proteus sniegto ātro reakciju.

Izmantojot Christensen kompozīciju, tests palīdz atšķirt vienas ģints sugas. Piemēram, S. haemolyticus un S. warneri ir koagulāzes negatīvi un beta-hemolītiski Staphylococcus, taču tie atšķiras ar to, ka S. haemolyticus ir urīnvielas negatīvs un S. warneri ir urīnvielas pozitīvs.

No otras puses, McNulty veiksmīgi izmantoja Christensen 2% urīnvielas buljonu, lai izpētītu Helicobacter pylori klātbūtni biopsijas paraugos, kas ņemti no kuņģa gļotādas (antral region).

Par H. pylori klātbūtni liecina pozitīvs urīnvielas tests. Rezultātu novērošanas ilgums ir tieši proporcionāls klāt esošo mikroorganismu daudzumam.

Kā redzams, tā ir vienkārša metode Helicobacter pylori diagnosticēšanai kuņģa biopsijās.

Visbeidzot, šis tests ir noderīgs arī sugu diferencēšanai no Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus un Mycobacteria ģintīm.

Sēj urīnvielas testu

Lai optimizētu rezultātus, abām metodēm ir nepieciešams spēcīgs mikrobu inokulāts. Baktēriju kolonijas vēlams ņemt no asins agara un raugus no Sabouraud agara, ar dažiem izņēmumiem. Sējmateriālu emulģē šķidrā vidē.

Stjuarta urīnvielas buljonam inkubējiet 37 ºC temperatūrā 24 līdz 48 stundas, zinot, ka Proteus ģints celmus meklējat tikai tad, ja celms ir baktērija. Raugiem to var inkubēt 37 ° C vai istabas temperatūrā no 24 līdz 48 inkubācijas stundām.

Kristjensena urīnvielas buljona gadījumā to inkubē 37 ° C 24 stundas. Ja tests ir negatīvs, to var inkubēt līdz 6 dienām. Ja testa rezultāts ir pozitīvs pirms 6 stundām, tas norāda, ka tas ir Proteus ģints celms.

Kristjensena urīnvielas agara gadījumā agara slīpumu stingri inokulē bez caurduršanas. Buljonu inkubē un interpretē vienādi.

QA

Barotnes pārbaudei var izmantot tādus kontroles celmus kā Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 un Salmonella typhimurium. Pirmajiem diviem vajadzētu dot pozitīvus rezultātus, bet pēdējiem diviem - negatīvus rezultātus.

Avots: Koneman E, Allens S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.

Atsauces

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. Stjuarta urīnvielas buljona izmantošana ureāzes testā kā tests rauga diagnostikā. Soc. Ven. Mikrobiols. 2002. gads; 22 (2): 136–140. Pieejams vietnē Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). Bioķīmiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. ed. Redakcija Panamericana. Buenosairesa. Argentīna.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
4. Konemans E, Allens S, Janda V, Šrekenbergers P, Vins V. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika. 5. ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
5. Britannia laboratorijas. Christensen Medium (urīnvielas agara bāze) 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com