- Pamats
- Sagatavošana
- -Tetracionātais buljons
- Joda joda šķīdums
- Pamatviela tetrationāta buljonam
- -Tetracionāta buljona variants ar spilgti zaļu
- Spīdoši zaļi
- Izmantojiet
- QA
- ieteikumi
- Atsauces
Tetrathionate buljons vai buljons TT ir selektīvs šķidrums barotne bagātināšanai un reģenerācijai no ģints Salmonella celmiem. To izveidoja Mīlers un vēlāk pārveidoja Kaufmans, tāpēc ir tādi, kas to dēvē par Müellera-Kaufena buljonu.
Oriģinālajā barotnē bija proteozes peptoni, kalcija karbonāts un nātrija tiosulfāts. Kaufmans tam pievienoja žults sāļus un izveidoja vēl vienu modalitāti ar spilgti zaļu krāsu. Šīs vielas kavē koliformu augšanu, atstājot barotni brīvu patogēno baktēriju, šajā gadījumā Salmonella, attīstībai.
Joda joda šķīduma pievienošana tetrationāta buljonam. Avots: Manuels Almagro Rivas
Modifikācija bija ļoti veiksmīga, jo tā ievērojami palielināja barotnes jutīgumu. Šī iemesla dēļ pašlaik ir noderīgi meklēt Salmonellas jebkura veida paraugos, bet jo īpaši cietos vai šķidros izkārnījumos un pārtikā.
Tās sagatavošana sastāv no divām fāzēm; Tirdzniecības vide ir pamats tetrationāta buljona pagatavošanai, un pēc tam, lai izveidotu tetrationātu, tam pievieno joda joda šķīdumu, lai pabeigtu barotni.
Amerikas Sabiedrības veselības asociācija (APHA) iesaka izmantot salmonellas paraugu bagātināšanai tetraetionātu buljonu, kas papildināts ar spilgti zaļu, jo tas ir selektīvāks nekā tetraetionātu buljons un selenīta buljons.
Kopumā tetrationātu buljons ir ideāls, ja ir aizdomas par Salmonella ģints baktēriju klātbūtni nelielos daudzumos vai ja tās tiek ļaunprātīgi pakļautas inhibitoru iedarbībai vai rūpnieciskiem procesiem, kas samazina to dzīvotspēju.
Pamats
Klāt esošie peptoni atbilst kazeīna aizkuņģa dziedzera sagremotai daļai un dzīvnieku audu peptiskajam sagremojumam. Tie nodrošina oglekļa, slāpekļa un vispārējo barības vielu avotu baktēriju augšanai.
Savukārt nātrija tiosulfāts reaģē ar joda šķīdumu, veidojot tetrationātu. Tas kavē koliformu augšanu un veicina tādu baktēriju attīstību, kuras satur fermentu tetrationāta reduktāzi, starp tām ir Salmonella ģints, kā arī Proteus.
Žults sāļi darbojas arī kā inhibējoša viela lielākajai daļai grampozitīvu un dažu gramnegatīvu baktēriju (koliformas).
Kalcija karbonāts absorbē toksiskās vielas, kas rodas, sadaloties tetrationātam, kas veido sērskābi. Šajā ziņā kalcija karbonāts neitralizē skābumu, uzturot barotnes pH stabilu.
Koši zaļas modalitātes gadījumā šī viela palielina tetrationātu buljona selektīvo spēku, nomācot mikroorganismus, kas nav Salmonella ģints.
Sagatavošana
-Tetracionātais buljons
Joda joda šķīdums
Svērt:
- 6 grami joda.
- 5 g kālija jodīda.
Kālija jodīds tiek izšķīdināts apmēram 5 ml sterila destilēta ūdens, pēc tam maisījumu karsējot, pamazām pievieno jodu. Kad tas ir pilnībā izšķīdis, uzpilda līdz zīmei ar sterilu destilētu ūdeni, līdz gala tilpums ir 20 ml.
Pamatviela tetrationāta buljonam
Nosver 46 gramus dehidrētas barotnes un suspendē 1 litrā sterila destilēta ūdens. Sajauc un karsē, līdz tas ir pilnībā izšķīdis, tas var uzvārīties tikai dažas minūtes. Neveiciet autoklāvu. Barotnes pamatnei ļauj atdzist līdz aptuveni 45 ° C, un tajā laikā pievieno 20 ml joda šķīduma.
Pēc joda šķīduma pievienošanas barotnei tas jāizlieto nekavējoties. Ja nevēlaties lietot visu maisījumu, rīkojieties šādi:
10 ml bāzes barotnes tiek sadalīti mēģenēs, un tikai tiem, kas jāinokulē ar paraugiem, pievieno 0,2 ml joda šķīduma.
Tos, kas netiks izmantoti, joprojām var uzglabāt ledusskapī, taču, tā kā barotne nav sterilizēta, ideāls ir precīza vajadzīgā daudzuma pagatavošana.
Barotnes krāsa pirms joda šķīduma pievienošanas ir pienaini balta ar baltām nogulsnēm, un pēc pievienošanas tā ir brūna ar blīvām nogulsnēm. Novērotās nogulsnes ir normālas un atbilst kalcija karbonātam, kas nešķīst. Barotnes galīgais pH ir 8,4 ± 0,2.
-Tetracionāta buljona variants ar spilgti zaļu
Lai pagatavotu koši zaļu tetrationātu buljonu, veic visas iepriekš aprakstītās darbības, bet maisījumam papildus pievienos arī 10 ml spilgti zaļa šķīduma, kas pagatavots ar 0,1% saturu.
Spīdoši zaļi
Šo šķīdumu sagatavo šādi:
Nosver 0,1 g spilgti zaļas krāsas un suspendē 100 ml destilēta ūdens. Karsē līdz vārīšanās temperatūrai, lai panāktu pilnīgu izšķīšanu. Uzglabāt dzintara pudelē.
Izmantojiet
Izkārnījumu paraugiem (izkārnījumu kultūra) protokols ir šāds:
Inokulē 1 g cieta izkārnījuma vai 1 ml šķidra izkārnījumu mēģenē ar 10 ml lietošanai gatavas tetrationāta buljona. Spēcīgi krata un aerobi inkubē 43 ° C temperatūrā 6–24 stundas.
Pēc tam ņem 10 līdz 20 μl buljona un subkultūras alikvotu daļu no selektīvās salmonellas barotnes, piemēram, SS agara, XLD agara, spilgti zaļā agara, Hektoen enteriskā agara, cita starpā.
Paralēli selektīvajai Salmonella barotnei jābūt inokulētai ar tiešo paraugu (fekālijām) bez bagātināšanas. Taisnās zarnas tamponu paraugiem izlejiet savākto materiālu mēģenē un rīkojieties, kā aprakstīts iepriekš.
Pārtikas paraugiem nosver 10 g cieta pārtikas vai 10 ml šķidra pārtikas un pudeli inokulē ar 100 ml lietošanai gatavas tetrationāta buljona. Rīkojas tāpat, kā aprakstīts iepriekš, bet inkubē 37 ° C temperatūrā.
Kā redzams, attiecības starp izlasi un buljonu vienmēr būs 1:10.
QA
Barotnes testēšanai var izmantot zināmus kontroles celmus. Visplašāk tiek izmantoti ATCC sertificēti celmi.
Izmantojamie celmi ir Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 un Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Paredzams lielisks salmonellas celmu pieaugums, savukārt Escherichia coli augšana var būt vāja vai regulāra, un grampozitīvie celmi (Enterococcus un Staphylococcus) ir daļēji vai pilnībā kavēti.
ieteikumi
- Tā kā šī barotne neinhibē Proteus augšanu, dažas laboratorijas izmanto 40 mg / L novobiocīna, lai novērstu šī mikrobu celma attīstību. Pirms joda šķīduma jāpievieno antibiotika.
-Pēc barotnes, ieskaitot joda joda šķīdumu, sagatavošanas nedrīkst būt vairāk par 2 stundām, kamēr to inokulē.
-Izplatot barotni mēģenēs, maisījumu nepārtraukti homogenizē, lai atkārtoti suspendētu izveidotās nogulsnes.
- Mazāk piesārņotos paraugos tetrationātu buljonu inkubē 35-37 ° C temperatūrā, un ļoti piesārņotos paraugos ieteicams inkubēt 43 ° C temperatūrā.
Atsauces
- Conda Pronadisa laboratorija. 2010. Tetracionāta buljona bāze saskaņā ar Müeller-Kauffmann. Pieejams:
- BD laboratorijas. 2003. Tetracionāta buljona bāze. Pieejams:
- Britannia laboratorijas. 2015. Tetranāta bāzes buljons. Pieejams:
- BBL Media. 2005. Sagatavots mēģenēs salmonellu sugas kultūrai.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
- Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Nātrija selenīta un nātrija tetrationāta barotņu salīdzinājums, abi inkubēti 37 ° C un 42 ° C Salmonella spp izdalīšana no nesēju ekskrementiem. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215–220