TRYPTICASEIN SOJAS BULJONS: PAMATS, SAGATAVOŠANA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Soy buljons triptonsojas ir šķidrums barotni, ļoti barojošu, neselektīvie. Lielās daudzpusības dēļ tas ir viens no mikrobioloģijas laboratorijā visplašāk izmantotajiem šķidrajiem barotnēm.

Tas ir arī pazīstams ar nosaukumu triptisks sojas buljons vai sagremots kazeīns-soja, kura saīsinājums ir TSB ar tā saīsinājumu angļu valodā Tryptic Soy Broth vai CST ar tā saīsinājumu spāņu valodā. Tā pielietojums ir ļoti daudzveidīgs, ņemot vērā tā sastāvu. Tas sastāv no tripteina, sojas peptona, nātrija hlorīda, dikālija fosfāta un glikozes.

Trypticasein sojas buljons, kas iesēts ar Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 celmu, kur novērota pigmenta veidošanās. Avots: Autores uzņemts foto MSc. Marielsa Gil.

Tas spēj reproducēt klīniski nozīmīgas patogēnās baktērijas, ieskaitot tās, kuras prasa barību un anaerobās baktērijas. Šajā vidē var attīstīties arī dažas oportūnistiskas un piesārņojošas sēnītes.

Tā kā tai ir liela barības spēja, tai ir augsta jutība, lai noteiktu mikrobu piesārņojumu, šī iemesla dēļ USDA Dzīvnieku un augu veselības inspekcijas dienests to izvēlējās vakcīnu mikrobioloģiskajai analīzei.

Tāpat trippticasein sojas buljons atbilst dažādu farmakopeju (Eiropas EP, Japānas JP un Ziemeļamerikas USP) prasībām attiecībā uz tādu produktu mikrobioloģiskiem pētījumiem rūpnieciskā līmenī kā kosmētika un pārtika.

No otras puses, ir vērts pieminēt, ka, neskatoties uz lielo lietderību, šī vide ir salīdzinoši lēta, padarot to pieejamu lielākajai daļai mikrobioloģijas laboratoriju. To ir arī ļoti viegli pagatavot.

Pamats

Tripteins, peptons un glikoze nodrošina svarīgas uzturvērtības, padarot to par ideālu barotni ātrai mikrobu augšanai.

Aptuveni 6 līdz 8 inkubācijas stundās lielākajā daļā mikroorganismu jau var redzēt augšanu. Tomēr ir lēnām augoši celmi, kuru audzēšana var ilgt vairākas dienas.

Nātrija hlorīds un divkālija fosfāts darbojas attiecīgi kā osmotiskā līdzsvara un pH regulators. Par augšanas klātbūtni liecina duļķainība vidē; ja augšanas nav, barotne paliek caurspīdīga.

Tā gaišās krāsas dēļ ir iespējams novērot tādu pigmentu ražošanu kā, piemēram, tas, kas parādīts attēlā, kas atrodas raksta sākumā, kas atbilst pigmentam, ko ražo Pseudomonas aeruginosa.

Sagatavošana

-Triptysein sojas buljons

Lai pagatavotu triptisku sojas buljonu, 30 g dehidrētas komerciālās barotnes jāsver digitālā skalā. Tad to izšķīdina litrā destilēta ūdens kolbā.

Maisījumu atstāj atpūsties 5 minūtes un pēc tam to novieto siltuma avotā, lai palīdzētu izšķīdināt barotni. To bieži maisa, vārot 1 minūti.

Pēc izšķīdināšanas tas pēc vajadzības tiek sadalīts atbilstoša izmēra mēģenēs. Var izmantot caurules ar kokvilnas aizbāžņiem vai ar bakelīta vāciņiem. Pēc tam mēģenes sterilizē ar barotni autoklāvā 121 ° C temperatūrā 15 minūtes.

Barotnes pH līmenim jābūt 7,3 ± 0,2

Jāatzīmē, ka dehidrētā barotne ir gaiši smilškrāsas un to jāuzglabā temperatūrā no 10 līdz 35 ° C sausā vietā. Kamēr sagatavotais buljons ir gaišā dzintara krāsā, tas jāuzglabā ledusskapī (2–8 ° C).

- Tryptiskā sojas buljona varianti

Modificētu trippticaseīna sojas buljonu var pagatavot, pievienojot žults sāļus un novobiocīnu, lai tas būtu selektīvs E. coli izolēšanai. Vēl viena iespēja tam pašam mērķim ir sagatavot triptazes sojas buljonu, kas papildināts ar vankomicīnu, cefiksīmu un tellurītu (2,5 μg / ml).

No otras puses, triptiskam sojas buljonam var pievienot vairāk glikozes (0,25%), ja mērķis ir stimulēt bioplēvju veidošanos.

Izmantojiet

Tas ir pietiekami barojošs, lai ļautu augt izveicīgām vai izsmalcinātām baktērijām, piemēram, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp un Brucella sp, bez vajadzības papildināt ar asinīm vai serumu.

Tāpat šajā buljonā var attīstīties dažas sēnītes, piemēram, Candida albicans Complex, Aspergillus sp un Histoplasma capsulatum.

Turklāt šī barotne anaerobos apstākļos ir ideāli piemērota baktēriju, kas pieder pie Clostridium ģints, kā arī nesporētu anaerobu baktēriju, kam ir klīniska nozīme, atgūšanai.

Ja pievieno 6,5% nātrija hlorīda, to var izmantot Enterococcus un citu D grupas streptokoku augšanai.

Pētniecības līmenī tas ir bijis ļoti noderīgs dažādos protokolos, īpaši bioplēves vai bioplēves veidojošo baktēriju izpētē. To izmanto arī 0,5% Mac Farland baktēriju suspensijas pagatavošanai, kas nepieciešama, lai veiktu pretiogrammu ar Kirbija un Bauera metodi.

Šajā gadījumā ņem no 3 līdz 5 līdzīga izskata kolonijas un emulģē 4-5 ml trippticasein sojas buljona. Pēc tam to inkubē 2 līdz 6 stundas 35-37 ° C temperatūrā un pēc tam pielāgo ar vēlamo koncentrāciju, izmantojot sterilu fizioloģisko šķīdumu. Trypticasein sojas buljonus nedrīkst lietot 18 līdz 24 stundu inkubācijā.

Sēj

Paraugu var tieši iesēt vai no selektīvās barības ņemt tīras kolonijas var subkultūru. Sējmateriālam jābūt mazam, lai pirms inkubācijas barotne nesmērētu.

Parasti to inkubē 37 ° C aerobiozē 24 stundas, taču šie apstākļi var atšķirties atkarībā no meklētā mikroorganisma. Vajadzības gadījumā to var inkubēt arī anaerobos apstākļos 37 ° C temperatūrā vairākas dienas. Piemēram, ātri augošus vai izvēlīgus mikroorganismus var inkubēt līdz 7 dienām.

Farmaceitisko vielu, piemēram, vakcīnu, mikrobioloģiskajā analīzē protokoli ir stingrāki. Šajos gadījumos buljonu bez augšanas neizmet, līdz tas sasniedz 14 dienas nepārtrauktu inkubāciju.

QA

No katras sagatavotās partijas inkubē 1 vai 2 neinokulētās mēģenes, lai pierādītu to sterilitāti. Tam jāpaliek nemainīgam.

Var arī stādīt zināmus celmus, lai novērtētu viņu izturēšanos. Starp celmiem, kurus var izmantot, ir:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 vai 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC28CC305, pneumoniae ATCC28omonas 905, pneumoniae ATCC28omonas305.

Visos gadījumos augšanai jābūt apmierinošai katram mikroorganismam piemērotajos atmosfēras un temperatūras apstākļos.

Ierobežojumi

-Glikozes fermentācija izraisa barotnes pH pazemināšanos skābju ražošanas dēļ. Tas var būt nelabvēlīgs dažu mikroorganismu, kas jutīgi pret skābumu, izdzīvošanai.

-Tas nav ieteicams celmu uzturēšanai, jo papildus skābumam baktērijas pēc dažām dienām noārda barības vielas, kā rezultātā uzkrājas toksiskas vielas, kas padara vidi nelietderīgu.

-Jums ir jāstrādā, rūpējoties par visiem sterilitātes protokoliem, jo ​​buljoni ir viegli piesārņoti.

-Pēc trippticaseīna sojas buljonu sagatavošanas jums nevajadzētu mēģināt buljonu pārvietot uz citu sterilu mēģeni, jo šāda veida manevrs ir ļoti neaizsargāts pret piesārņojumu.

Atsauces

1. Cona E. Nosacījumi laba uzņēmības pētījumam ar agara difūzijas testu. Sv. infektols. 2002. gads; 19 (2): 77-81. Pieejams vietnē: scielo.org
2. Britannia laboratorija. Tripteina sojas buljons. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
3. MCD laboratorija. Trypticasein sojas buljons. Pieejams vietnē: electronic-systems.com
4. Neogēnu laboratorija. Triptihu sojas buljons. Pieejams vietnē: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Magnētiskās imūno atdalīšanas tehnikas novērtējums Escherichia coli O157: H7 atjaunošanai piena krēmos. ALAN. 2006; 56 (3): 257–264. Pieejams vietnē: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilmu veidošanās Staphylococcus aureus izolātos pēc pretmikrobu jutības un klīniskās izcelsmes. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Pieejams vietnē saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Escherichia coli O157: H7 izolēšana divējāda mērķa liellopu fekāliju paraugos no Miranda pašvaldības, Zulijas štatā, Venecuēlā. Cien. (Marakaibo), 2007; 17 (3): 239.-245. Pieejams vietnē: scielo.org