SELENĪTA BULJONS: PAMATS, SAGATAVOŠANA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Selenīts ir selektīvs šķidrums barotne. To izstrādāja Leifsons paraugu bagātināšanai, ja ir aizdomas par Salmonella ģints enteropatogēnām baktērijām.

Šī barotne atbilst Amerikas Sabiedrības veselības asociācijas (APHA) prasībām, tāpēc to cita starpā izmanto salmonellas klātbūtnes izmeklēšanai fekāliju, urīna, šķidra vai cieta pārtikas, ūdens paraugos.

Selenīta buljons. Avots: Autores uzņemts foto MSc. Marielsa gil

Tās ķīmiskais sastāvs veicina šo mikroorganismu atjaunošanos un, savukārt, kavē citu augšanu. Tas galvenokārt ir toksisks lielākajai daļai baktēriju, kas pieder Enterobacteriaceae ģimenei. Tomēr tas arī ļauj atjaunot Shigella celmus un neinhibē Pseudomonas un Proteus augšanu.

Tas sastāv no bezūdens nātrija hidrogēncelenīta, bezūdens nātrija fosfāta, peptoniem un laktozes. Ir arī variants, kam pievieno cistīnu, līdz ar to tā nosaukums ir selenīta-cistīna buljons.

Pašlaik tiek dota priekšroka selenīta-cistīna buljona izmantošanai, jo tiek iegūts lielāks salmonellu reģenerācijas procents, kas ir līdzvērtīgs tam, ko novēro ar citiem selektīviem barotnēm tam pašam mērķim, piemēram, nātrija tetrationāta buljonam.

Pamats

Buljonā esošie peptoni kalpo kā barības vielas pareizai mikroorganismu attīstībai. Salmonellas celmos peptoni tiek izmantoti kā slāpekļa, vitamīnu un aminoskābju avots.

Laktoze ir raudzējamais ogļhidrāts, savukārt nātrija selenīts ir inhibējošā viela, kas aptur grampozitīvo baktēriju un lielāko daļu baktēriju, kas atrodas zarnu florā, īpaši Enterobacteriaceae dzimtas, augšanu. Nātrija fosfāts ir buferšķīdums, kas stabilizē barotnes pH.

L-cistīnu saturošā selenīta buljona variantā šis papildu savienojums ir reducējošs līdzeklis, kas samazina selenīta toksicitāti, palielinot Salmonella reģenerāciju.

Sagatavošana

-Selenīta buljons

Ja jums ir maisījuma sastāvdaļas, varat nosvērt:

4 g bezūdens nātrija hidrogēncelēna.

10 g bezūdens nātrija fosfāta.

5 g peptonu.

4 grami laktozes.

Izšķīdina savienojumus 1 litrā sterila destilēta ūdens. To var nedaudz uzkarsēt, lai tas pilnībā izšķīst.

Dažas laboratorijas 10 minūtes pakļauj barotni tekošā tvaikā, lai to sterilizētu, jo autoklāvu nevajadzētu izmantot. Ja barotne ir sterilizēta, to var uzglabāt ledusskapī līdz lietošanai.

To var arī pagatavot nesterilā veidā un pasniegt tieši no 10 līdz 15 ml sterilās mēģenēs.

Šajā gadījumā to vajadzētu atstāt atpūsties un nekavējoties lietot. Tā kā barotne nav sterila, to nevar uzglabāt ledusskapī vēlākai lietošanai.

- Tirdzniecības vides sagatavošana

Ja ir pieejama barotne, nosver 23 g dehidrētas barotnes un izšķīdina to vienā litrā sterila destilēta ūdens. Īsi karsē, lai pabeigtu izšķīšanu. Neveiciet autoklāvu. Aseptiski pasniedziet 10 vai 15 ml sterilās mēģenēs.

Barotnes galīgajam pH jābūt 7,0 ± 0,2.

Jāatzīmē, ka dehidrētās barotnes krāsa ir bēša, un preparāts ir gaišs un caurspīdīgs dzintars.

Selenīta-cistīna buljona variants

Tas satur tos pašus savienojumus kā selenīta buljons, bet pievieno 10 mg cistīna. Pārējā procedūra ir tieši tāda pati, kā aprakstīts iepriekš.

Lietojumprogrammas

Šī barotne ir īpaša, lai to izmantotu epidemioloģiskos pētījumos gadījumos, kad slimība vēl nav tās akūtā stadijā, asimptomātiski pacienti vai veseli nesēji.

Salmonella ģints izolēšana parasti ir sarežģīta, jo tie parasti ir tikai slikti piesārņoti paraugi. Atrodoties mazos daudzumos, tas viegli pārklājas ar citu baktēriju ģinšu augšanu, kuras ir sastopamas lielākā daudzumā.

No otras puses, izejvielas, ar kurām tiek izgatavoti pārstrādāti pārtikas produkti, cita starpā, bieži tiek pakļauti karstumam, dehidratācijas procesiem, dezinfekcijas līdzekļu, starojuma un konservantu izmantošanai.

Tāpēc ar izejvielā esošajām salmonellu palīdzību rīkojas nepareizi, pakļaujot produktu iepriekšminētajiem rūpniecības procesiem. Tāpat klīnisko paraugu, piemēram, fekāliju gadījumā celmi var būt vāji, ja tie nāk no pacientiem, kuri ir ārstēti ar antibiotikām.

Tādēļ visus paraugus, kuros ir aizdomas par Salmonella klātbūtni, vajadzētu iepriekš bagātināt ar laktozes buljonu un pēc tam bagātināt ar selenīta buljonu, lai optimizētu tā reģenerāciju selektīvās barotnēs, piemēram, SS agars, ksilozes agars, lizīna deoksiholāts (XLD) ), enterālais Hektoena agars (HE) un spilgti zaļais agars, cita starpā.

Sēj

Izkārnījumu paraugiem ņem 1 g parauga un suspendē mēģenē ar 10 līdz 15 ml selenīta buljona. Ja izkārnījumi ir šķidri, ņem 1 ml un suspendē buljonā. Taisnās zarnas tamponiem izdaliet tamponu materiālu buljonā.

Cietos pārtikas paraugos ņem 1 gr un suspendē selenīta buljonā.

Šķidros pārtikas produktos vienādās daļās samaisa ar selenīta buljonu divkāršā koncentrācijā.

Urīna paraugiem centrifugē, virsējo slāni izmet, ņem visus nogulsnes un suspendē selenīta buljonā.

Buljonus inkubē 37 ° C temperatūrā 24 stundas. Par baktēriju augšanu liecina duļķainība. Inkubēšanai 42 ° C temperatūrā var iekļaut arī papildu mēģeni vienam paraugam. Pēc tam selektīva buljona izsēšana no selektīva cietā barotnes.

QA

Lai kontrolētu sterilitāti, selenīta buljonu no katras neinokulētās partijas inkubē 37 ° C 24 stundas. Paredzams, ka barotnē nav duļķainības vai krāsas izmaiņas.

Lai kontrolētu barotnes pareizu darbību, var izmantot zināmus celmus, piemēram:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 un Proteus mirabilis ATCC 43071.

Gaidāmie rezultāti ir:

• Pirmajiem trim baktēriju celmiem augšanai jābūt apmierinošai.
• Escherichia coli daļējai inhibīcijai.
• Proteus mērenai augšanai.

Ierobežojumi

Selenīta buljona vide ir toksiska cilvēka ādai, tāpēc jāizvairās no tiešas saskares.

Atsauces

1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Nātrija selenīta un nātrija tetrationāta barotņu salīdzinājums, abi inkubēti 37 ° C un 42 ° C Salmonella spp izdalīšana no nesēju ekskrementiem. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215–220
2. Britannia laboratorijas. Selenito buljons. 2015.Pieejams vietnē: britanialab.com
3. Neogēnu laboratorijas. Selenīta buljons. Pieejams vietnē: foodsafety.neogen.com
4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Salmonella spp. Mikrobioloģiskā izolācija. un molekulārie instrumenti tā noteikšanai. Veselība, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Pieejams vietnē: http://www.scielo.org.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnostika. 12 ed. Redakcija Panamericana SA Argentīna.