LAKTOZES SATUROŠS BULJONS: PAMATS, SAGATAVOŠANA UN PIELIETOJUMS - BIOLOĢIJA - 2025

Laktoze buljons ir līdzeklis, kas nav - selektīvās šķidrums barotnē, ko galvenokārt izmanto kā a pre-bagātināšanu Salmonellu celmu no mikrobioloģisko analīžu rezultāti uz apstrādātu pārtikas produktu, piena produktu vai ūdeni. To iesaka Starptautiskā pārtikas mikrobioloģisko specifikāciju komisija (ICMPF).

Barotne satur fermentatīvu želatīna, gaļas ekstrakta un laktozes sadalījumu, vielas, kas vajadzīgas baktēriju augšanai. Turklāt laktoze ir raudzējams ogļhidrāts, tāpēc dažas kolibaktērijas to spēj sadalīt, veidojot gāzi.

Laktēti buljoni ar duļķainību. Avots: Autores uzņemts foto MSc. Marielsa gil

Šī iemesla dēļ laktozes buljonu iesaka Amerikas Sabiedrības veselības asociācija (APHA), lai veiktu kopējo un fekālo koliformu baktēriju izpēti, kvalificējot to kā lielisku alternatīvu triptozes laurilsulfāta buljona aizstāšanai standarta paņēmienā ar visiespējamāko skaitli (MPN). ), ko izmanto pārtikas, piena un virszemes ūdens, pazemes, atpūtas, sadzīves un rūpniecības atkritumu paraugu mikrobioloģiskai analīzei.

Pamats

Dažu paraugu mikrobioloģiskai analīzei ir nepieciešama iepriekšēja bagātināšana, lai varētu atgūt specifisku mikroorganismu, kura daudzums var būt ļoti mazs vai nelabvēlīgos apstākļos, kas pārkāpj vai samazina tā dzīvotspēju.

Tas attiecas uz žāvētiem un pārstrādātiem pārtikas produktiem, kas, iespējams, ir inficēti ar Salmonellas sp. Šajos gadījumos, ja baktērijas ir klāt, produktu ražošanas procesā tās ir cietušas no fiziskas un ķīmiskas vardarbības.

Tādā veidā, ka mikroorganismi ir pakļauti nelabvēlīgiem faktoriem, piemēram, dehidratācijai, iedarbībai uz inhibējošiem vai toksiskiem produktiem, un pārklāšanās, ko rada citu baktēriju klātbūtne, cita starpā.

Šajā ziņā laktozes buljonam ir atjaunojoša iedarbība uz bojātajām mikroorganisma struktūrām, liekot tam atjaunoties un vairoties tādā veidā, lai to varētu noteikt.

Tāpat laktozes buljonam ir iespēja atšķaidīt inhibējošās vielas, kas var ietekmēt tā dzīvotspēju, ļaujot tam attīstīties. Turklāt laktozes buljona uztura sastāvs ir stratēģisks, lai sekmētu Salmonella sp augšanu pār citiem mikroorganismiem.

Galīgai identifikācijai tai jābūt subkulturālai ar citiem galīgajiem barotnēm.

No otras puses, barotnes sastāvs arī ļauj noteikt laktozi fermentējošos mikroorganismus, kas ražo gāzi.

Sagatavošana

Lai pagatavotu litru laktozes buljona, jāsver 13 grami dehidrētas barotnes un jāizšķīdina 1000 ml destilēta ūdens.

Lai palīdzētu izšķīdināt barotni ūdenī, šķīdumu var nedaudz, bet ne pārāk karsēt.

Pēc viendabīga šķīduma pagatavošanas: ja buljonu izmanto koliformu meklēšanai, tiek sagatavots mēģenīšu plaukts, kurā otrādi ievietota Durhamas fermentācijas caurule.

Durhamas caurule ir ļoti svarīga detaļa, jo tā ļaus noteikt gāzu veidošanos, kas ir ļoti vērtīga koliformu meklējumos.

Kad mēģenes ir gatavas, tajās tiek iepludināts 10 ml laktozes buljona, kas ir pietiekams, lai aptvertu visu Drehemas mēģeni.

Ja laktozes buljonu paredzēts izmantot kā iepriekšēja bagātināšanas buljonu, nav nepieciešams ievietot Durhamas fermentācijas mēģeni. Šajā gadījumā ir nepieciešams lielāks daudzums barotnes (225 ml), kas tiks pasniegta 500 ml pudelēs, ar platu muti un ar termoizturīgu skrūvējamu vāciņu.

Pēc tam mēģenes vai kolbas 15 minūtes autoklāvē 121 ° C temperatūrā.

Barotnei temperatūrā 25 ° C jāsaglabā galīgais pH 6,9 ± 0,2.

Buljonus līdz lietošanai tur ledusskapī.

Pirms lietošanas buljoni jāuzsilda līdz istabas temperatūrai.

No otras puses, laktozes buljonu var pagatavot arī divkāršā koncentrācijā.

Dažās laboratorijās kā pH indikatoru laktozes buljonam pievieno bromkrezola purpursarkanu, lai parādītu mēģenes, kurās krāsas maiņas dēļ ir notikusi laktozes fermentācija. Šajā gadījumā buljons iegūst purpursarkanu krāsu, un, ja notiek fermentācija, tas kļūst dzeltens.

Lietojumprogrammas

Mikrobioloģijas laboratorijās laktozes buljonu plaši izmanto, jo tā ir salīdzinoši lēta barotne, kas nodrošina ticamus un ātrus rezultātus (24–48 stundas).

To var izmantot kopējo un fekālo koliformu analīzei pārtikā un ūdenī vai kā salmonellas iepriekšēja bagātināšanas buljonu.

Iepriekšēja bagātināšana

Iepriekšēja bagātināšana ir solis pirms parauga bagātināšanas, kas ievērojami uzlabo Salmonella ģints baktēriju atjaunošanos pārstrādātos pārtikas produktos.

Lai to izdarītu, cieto pārtikas paraugu (25 gramus) vai šķidrumu (25 ml) iesēj 225 ml laktozes buljona, inkubējot 24 līdz 48 stundas. Pēc tam tas tiks subkulturēts bagātinātā vidē, piemēram, selenīta cistīna buljonā vai tetrationāta buljonā. Pēc tam pārejiet uz selektīviem XLD un SS.

Kopējās un fekāliju koliformas analīze

Tā ir lieliska vide kā fekāliju piesārņojuma indikators.

Šī iemesla dēļ laktozes buljons ir ideāli piemērots koliformas pētījuma iespējamajai fāzei, izmantojot visticamākā skaitļa metodi.

Paraugiem, kuros ir aizdomas par lielu daudzumu koliformu, inokulē mazāku daudzumu to (1 ml), savukārt paraugiem, kuros ir aizdomas par mazāku koliformu daudzumu, inokulē lielāku paraugu daudzumu (10 ml).

Analīzei tiek veikti 10 ^-1 , 10 ^-2 , 10 ^-3 atšķaidījumi , veidojot 3-5 mēģenīšu bateriju katrai izmantotajai koncentrācijai.

No katras atšķaidīšanas laktozes buljonos iesēj vienādu daudzumu.

Caurulītes inkubē 24 stundas. Negatīvos buljonus inkubē vēl 24 stundas.

Rezultātus interpretē, novērojot divus raksturlielumus: pirmais ir duļķainuma esamība vai neesamība un tā kā šī barotne nesatur pH indikatoru, krāsa nemainīsies.

Otrais ir gāzes ražošana vai neražošana. Par gāzi Drehemas caurulē viegli liecina viena vai vairāku gaisa burbuļu parādīšanās tajā.

To uzskata par pozitīvu, ja tiek novērotas abas īpašības, tas ir, duļķainība ar gāzes ražošanu. Pozitīvās mēģenes atkārtoti jāiesēj apstiprinošajā vidē (2% Brilliant Green Bile buljona un EC buljona).

Barotnes kvalitātes kontrole

- Sagatavojot barotni, ir svarīgi neaizmirst novietot Durhams mēģenes, ja tās mērķis ir izpētīt koliformas.

- Pirms sterilizācijas barotnes nepārkarsē.

- Pirms sterilizācijas, nekad pēc tam, sadaliet to mēģenēs.

- Nelietot, ja barotne ir vecāka par 3 mēnešiem.

- Nelietojiet, ja novērojat kādas izmaiņas parastās barotnes īpašībās.

- Gatavojot laktozes buljona partiju, pārbaudiet tā kvalitāti, sējot zināmos celmus, piemēram, Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii un Klebsiella pneumoniae. Viņi aug ļoti labi, iegūstot gāzi (pozitīvā kontrole).

- Tajā var ietilpt arī Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium vai Enterococcus faecalis, kas aug labi, bet bez gāzes veidošanās (negatīvā kontrole).

- Jāatzīmē, ka dehidrētās barotnes sākotnējā krāsa ir smilškrāsa, un sagatavotās barotnes krāsa ir ļoti gaiša un caurspīdīgi dzeltena. Ja tiek novērotas krāsas vai izskata izmaiņas, tās var pasliktināties.

Atsauces

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Vides bioloģija un mikrobioloģija. (2013) 1. izdevums. Kartahenas Universitāte, Kolumbija.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B un Velázquez O. (2009). Pārtikas produktu mikrobioloģiskās analīzes paņēmieni. 2. ed. UNAM Ķīmijas fakultāte. Meksika.
3. Conda Pronadisa laboratorijas. 2017. gada laktozes buljona dubultā koncentrācija (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Koliformu baktēriju ekstrakcijas paņēmienu salīdzinājums no Meksikas Xochimilco ezera nogulsnēm. Argents. mikrobiols. 2013; 45 (3): 180–184. Pieejams vietnē: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Artēzisko urbumu ūdeņu mikrobioloģiskās kvalitātes noteikšana centrālās, Kordiljeru un galvaspilsētas pašvaldības departamentu rajonos. Mem. Inst. Zinātne. Veselība 2013; 11 (1): 5–14. Pieejams vietnē: scielo.iics.